吸收性氧化纤维素止血胶囊的止血作用研究

仲光勇，郭佩利，宋延平，赵林涛

(1.陕西中医药大学，咸阳　712046;2.陕西超群制药有限公司，西安　710018；3.陕西省中医药研究院药理室，西安　710003)



吸收性氧化纤维素止血胶囊的止血作用研究

仲光勇1，3，郭佩利2，宋延平3*，赵林涛3

(1.陕西中医药大学，咸阳712046;2.陕西超群制药有限公司，西安710018；3.陕西省中医药研究院药理室，西安710003)

摘要：目的研究吸收性氧化纤维素止血胶囊(XYZJ)的止血作用和止血机制。方法通过小鼠凝血、断尾止血模型和大鼠血小板聚集实验，评价本品的止血作用；通过血小板活化实验研究本品的止血机制。结果本品各剂量组小鼠体外凝血和外伤出血时间明显小于对照组(P<0.05，P<0.01)；本品高、中剂量组1～5 min血小板聚集度明显高于对照组(P<0.05，P<0.01)；本品高、中剂量组颗粒膜蛋白(CD62P)血小板阳性表达率明显高于对照组(P<0.05，P<0.01)。结论吸收性氧化纤维素止血胶囊有一定的止血作用，其止血作用可能是缩短凝血时间和增加血小板聚集度，其止血的机制可能是增强血小板活化功能。

关键词：止血胶囊；出血时间；凝血时间；血小板聚集；血小板活化

吸收性氧化纤维素胶囊是由陕西超群制药有限公司开发研制的一种新型的止血药,服用后经体内生化变化,最终降解为单糖类而被机体吸收,临床上得到广泛应用，多用于治疗各种原因的出血,并取得较好疗效。但其作用效果和作用机制未见报道。出血时间和凝血时间是检验止血药物最常用、最直观的2个指标，凝血时间测定是观察中药对凝血机制、止血机制是否有影响的主要方法[1]。本实验研究了本品对小鼠的止血作用，对大鼠血小板聚集和血小板活化

的实验研究，旨在研究其止血作用和止血机制，为临床应用提供实验依据。

1仪器与材料

1.1仪器QX-200全血血小板聚集仪(上海医大仪器有限公司)；Epics XL流式细胞仪(Beckman Coulter Inc)。

1.2药物与试剂吸收性氧化纤维素止血胶囊，由陕西超群制药有限公司提供，批号20141127；云南白药，云南白药集团股份有限公司生产，批准文号：国药准字Z53020798，批号ZJA1406；二磷酸腺苷二钠(ADP)，北京高科恒辉技术发展有限公司生产，批号014313；盐酸肾上腺素注射液(AD)，天津药业集团新郑股份有限公司生产，批号H41021054。FITC Mouse Anti-Rat CD61，Rabbit lgG(H+l)PE，Rabbit Anti-CD62P/PE，均由赛泰克生物科技有限公司生产。

1.3实验动物KM小鼠，体质量18～22 g，雌雄各半，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，合格证号：61001700000410，许可证号：SCXK(陕)2012-003；SD大鼠，体质量200～250 g，雌性，由第四军医大学实验动物中心提供；合格证号：0021656，许可证号：SCXK(军)2012-0007。

2方法与结果

2.1凝血时间实验将60只KM小鼠随机分为5组，每组12只：空白组；云南白药0.308 g·kg-1组；吸收性氧化纤维素止血胶囊1.476，0.738和0.369 g·kg-1组。按照体质量灌胃药物，每天1次，连续2 d，末次给药后1 h，用眼科弯镊迅速摘取一侧眼球，即有血流出，在载玻片两端各滴1滴，血滴直径约5 mm，立即用秒表计时，从采血开始至挑起血丝为止，所用时间即为凝血时间，2滴血的平均凝血时间为小鼠的凝血时间[2-4]。对小鼠凝血时间的影响，吸收性氧化纤维素止血胶囊高、中、底剂量组凝血时间明显小于对照组(P<0.05，P<0.01)，结果见表1。

表1吸收性氧化纤维素止血胶囊对小鼠凝血时间的影响

Tab.1 The effect of medical absorbable hemostcdic fibre capsules on the clotting time in mice

±s，n=12)

注：给药组与对照组比较*P<0.05,**P<0.01。2.2出血时间实验将小鼠随机分为5组，每组10只，

雌雄各半：空白组；云南白药0.308 g·kg-1组；吸收性氧化纤维素止血胶囊1.476，0.738和0.369 g·kg-1组。分组后称定体质量，按体质量灌胃药物，空白组灌胃等体积纯净水，灌胃体积均为25 mL·kg-1。每天1次,连续2 d，末次药后1 h，分别以利剪在距小鼠尾尖0.5 cm处横断，待血液自然流出后计时，每隔15 s用滤纸吸去血滴1次,直至血液自然停止(滤纸吸时无血迹)为止，秒表记录，即为出血时间[5-7]。对小鼠出血时间的影响，吸收性氧化纤维素止血胶囊高、中、低剂量组出血时间明显低于对照组(P<0.01)，结果见表2。

表2吸收性氧化纤维素止血胶囊对小鼠出血时间的影响

Tab.2 The effect of medical absorbable hemostcdic fibre capsules on the bleeding time in mice

±s, n=10)

注：给药组与对照组比较**P<0.01。

2.3ADP诱导全血血小板聚集实验将50只SD大鼠随机分为5组，每组10只：空白组；云南白药0.155 g·kg-1组；吸收性氧化纤维素止血胶囊0.744，0.372和0.186 g·kg-1组。分组后按体质量灌胃药物，每天1次，连续2 d。末次给药后1 h，颈总动脉取血0.45 mL，接至已硅化过并预先加过肝素的试管内，测定其血小板的聚集程度，以ADP为诱导剂，按照全血血小板聚集仪的操作规程测定每份血样1，2，3，4和5 min的聚集程度[2]。

云南白药组1～5 min血小板聚集程度明显高于对照组(P<0.05)；吸收性氧化纤维素止血胶囊0.744和0.372 g·kg-1组1～5 min血小板聚集度明显高于对照组(P<0.05)，结果见表3。

表3吸收性氧化纤维素止血胶囊对大鼠血小板聚集的影响

Tab.3 The effect of medical absorbable hemostcdic fibre capsules on the platelet aggregation in rats

±s)

注：给药组与对照组比较*P<0.05，**P<0.01。

2.4AD诱导全血血小板聚集实验及血小板活化实验将大鼠随机分为5组，每组10只：空白组；云南白药0.155 g·kg-1组；吸收性氧化纤维素止血胶囊0.744，0.372和0.186 g·kg-1组。按体质量灌胃药物，每天1次，连续2 d。末次给药后1 h，颈总动脉取血2 mL，接至已硅化过并预先加过肝素的试管内，测定其血小板的聚集程度，以AD为诱导剂，按照全血血小板聚集仪的操作规程测定每份血样1，2，3,4和5 min的聚集程度；同时用枸橼酸钠抗凝血管取血1 mL，流式细胞仪检测血小板活化功能[8]。云南白药组、吸收性氧化纤维素止血胶囊0.744和0.372 g·kg-1组1～5 min血小板聚集度明显高于空白组(P<0.01，P<0.05)，结果见表4。

表4吸收性氧化纤维素止血胶囊对大鼠血小板聚集的影响

Tab.4 The effect of medical absorbable hemostcdic fibre capsules on the platelet aggregation in rats

±s)

注：给药组与对照组比较*P<0.05，**P<0.01。

吸收性氧化纤维素止血胶囊0.744和0.372 g·kg-1组颗粒膜蛋白(CD62P)阳性血小板表达率明显高于对照组(P<0.05，P<0.01)，结果见表5。

表5吸收性氧化纤维素止血胶囊对大鼠颗粒膜蛋白阳性血小板表达率的影响

Tab.5 The effect of medical absorbable hemostcdic fibre capsules on the rat CD62P positive expression rate of platelet

±s, n=10)

注：XYZJ给药组与对照组比较*P<0.05，**P<0.01。

3讨论

吸收性氧化纤维素止血胶囊对小鼠凝血时间影响实验表明：吸收性氧化纤维素止血胶囊1.476，0.738和0.369 g·kg-1组小鼠体外凝血时间明显小于对照组。吸收性氧化纤维素止血胶囊对小鼠外伤出血时间影响实验表明：吸收性氧化纤维素止血胶囊1.476，0.738和0.369 g·kg-1组小鼠外伤出血时间明显小于对照组。结果表明，吸收性氧化纤维素止血胶囊具有明显促凝血作用，对小鼠外伤出血具有明显止血作用。

血小板聚集功能：血小板可相互黏着形成血栓堵塞伤口，有利于止血。本实验采用血小板聚集仪测定血小板聚集功能。当血浆中加入诱导剂(二磷酸腺苷ADP、肾上腺素AD)后，血小板聚集，引起插入样品的两电极间电阻增大，血小板聚集程度越高，电阻值越大。吸收性氧化纤维素止血胶囊对ADP、AD诱导的大鼠血小板聚集程度实验表明：吸收性氧化纤维素止血胶囊0.744和0.372 g·kg-1组1～5 min血小板聚集度明显高于对照组。

血小板活化功能：当身体受到损害血管破裂时，血小板受刺激后能迅速发生变形、枯附、释放、聚集等生理反应，并在纤维蛋白、凝血酶、血细胞等物质参与下形成凝血块而止血，这一过程被称为血小板活化[9]。血小板活化的标志物为血小板膜糖蛋白的表达，当血小板处于活化状态时，颗粒膜蛋白表达明显增加，但静息的正常血小板不表达，是血小板活化的晚期标志物。在体外实验中，颗粒膜蛋白的增加并不会随着时间的延长而发生逆转，因此颗粒膜蛋白被业界认为是血小板活化的“金标准”，其在血小板质膜上的表达或其阳性血小板的百分率的增加，被认为是活化血小板的特异性标志物，常用于测定血小板的活化功能。实验表明，吸收性氧化纤维素止血胶囊0.744和0.372 g·kg-1组颗粒膜蛋白血小板阳性表达率明显高于对照组。

综上所述，吸收性氧化纤维素止血胶囊有一定的止血作用，其止血作用可能是缩短出血、凝血时间和增加血小板聚集度，其止血的机制可能是增强血小板活化功能。吸收性氧化纤维素止血胶囊的止血机制还有待一步研究。

参考文献：

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Study on the hemostasis effect of medical absorbable hemostatic fibre capsules

ZHONG Guangyong1,3，GUO Peili2,SONG Yanping3*,ZHAO Lintao3

(1.Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712046，China;2.Shaanxi Chaoqun Pharmaceuticals Company，Xi′an 710018，China；3.Pharmacology Laboratory of Shaanxi Institute of Traditional Chinese Medicine，Xi′an 710003，China)

Abstract:ObjectiveTo study the hemostasis effect and hemostatic mechanism of medical absorbable hemostatic fibre capsules. MethodsThe hemostasis effect was evaluated through mouse blood coagulation, tail hemostasia model and platelet aggregation in rats；and the hemostatic mechanism was studied through platelet activation experiment. ResultsThe time of mice coagulation and bleeding in vitro in different dosages group was significantly less than that in the control group (P<0.05, P<0.01). The concentration of platelet aggregation in the high-and middle-dosage group from 1 to 5 minutes was significantly higher than that in the control group (P<0.05, P<0.01). The platelet positive expression rate of CD62P in the high and middle dosage group was significantly higher than that in the control group (P<0.05，P<0.01). ConclusionThe medical absorbable hemostatic fibre capsules show certain hemostasis effect, and may shorten the coagulation and bleeding time and increase the degree of platelet aggregation, and the hemostatic mechanism may be related to enhancing the platelet activation function.

Key words:hemostasia capsules；bleeding time；clotting time；platelet aggregation；platelet activation

(收稿日期：2015-09-11)

中图分类号：R285.5

文献标志码：

文章编号：1004-2407(2016)03-0274-03

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.03.016

*通信作者：宋延平，男，研究员

作者简介：仲光勇，男，在读硕士研究生