Caveolin—1在胃癌中的表达及其临床意义

唐雷

[摘要] 目的 探讨基因蛋白Caveolin-1与胃癌侵袭及转移的关系。 方法 整群选取采用在该院2011年1月—2015年1月间手术切除胃组织存档蜡块57例，组织学类型、分级和分期等均参考世界卫生组织分级系统（2011），临床分期，I期9例，II期15例，III期28例，IV期5例。伴淋巴结转移的39例，无腋窝淋巴转移的18例。应用FCM（流式细胞免疫法）检测Caveolin-1在57例胃癌组织中的相关表达， 以荧光指数（Fluorescence Idex， FI）表示结果，取因其它良性胃部病变而手术切除的正常胃组织12例作为对照。 结果Caveolin-1基因蛋白在III，IV期胃癌中的FI值0.53±0.27，明显低于I，II期的胃癌FI=0.91±0.31，差异有统计学意义（t=2.3782，P=0.0297<0.05）；Caveolin-1基因蛋白在有淋巴转移的胃癌组织中平均FI值为0.51±0.21明显低于无淋巴转移的胃癌FI=0.94±0.27，差异有统计学意义（t=2.4563，P=0.0294<0.05）。结论 胃癌组织中Caveolin-1的低表达可能促进了胃癌的侵袭和转移，提示Caveolin-1可作为胃癌诊断的一个有效指标并有助于胃癌的预后判断。

[关键词] 胃癌；Caveolin-1；侵袭及转移；流式细胞术

[中图分类号] R735 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2016）02（b）-0052-03

[Abstract] Objective To discuss the relationship between Caveolin-1 gene protein and invasion and metastasis of gastric cancer. Methods 57 cases of gastric tissue archived wax blocks of surgical resection in our hospital from January 2011 to January 2015 were adopted， the World Health Organization grading system （2011） was referred to histological types， grading and staging， 9 cases were in I stage， 15 cases were in II stage， 28 cases were in III stage， 5 cases were in IV stage， 39 cases were with lymphatic metastasis， 18 cases were without axillary lymph node metastases， the related expression of Caveolin-1 in 57 cases of gastric cancer tissues was detected by FCM （Flow cytometry immune method） ， the result was expressed by the fluorescence index（Fluorescence Idex， FI）， 12 cases of normal gastric tissues of surgical resection caused by other benign gastric lesions were selected as controls. Results FI values of Caveolin-1 gene protein in the III， IV stages of gastric cancer were obviously lower than those in the I， II stages of gastric cancer （0.53±0.27 vs 0.91±0.31）（t=2.3782，P=0.0297<0.05）， the difference was obvious with statistically significant； the average FI value of Caveolin-1 gene protein in the gastric cancer tissues with lymphatic metastasis was obviously lower than that in the gastric cancer tissues without lymphatic metastasis （0.51±0.21 vs 0.94±0.27）（t=2.4563，P=0.0294<0.05）， the difference was obvious with statistically significant. Conclusion The low expression of Caveolin-1 in gastric cancer tissues may promote the invasion and metastasis of gastric cancer， which reminds that Caveolin-1 can be used as an effective index in diagnosis of gastric cancer and contributes to the prognosis of gastric cancer.

[Key words] Gastric cancer； Caveolin-1； Invasion and metastasis； Flow cytometry

近年来研究[1-3]发现肿瘤的侵袭及转移无疑是影响胃癌患者预后的重要因素之一，而胃癌的发生、发展又是一个多基因、多因素共同作用的结果。对于与胃癌侵袭及转移过程中密切相关基因的研究是目前的一个研究热点。胞膜窖（Caveolae）的标记性蛋白Caveolin-1与肿瘤细胞的恶性转化、增殖、侵袭及转移相关密切，且对信号传导起着调控作用。该研究通过流式细胞术（FCM）检测2011年1月—2015年1月间手术切除的57例胃癌组织存档蜡块中Caveolin-1在胃癌侵袭及转移过程中的表达，评价其在胃癌侵袭及转移中的作用，分析其与胃癌的相关性，力图为胃癌转移机制的研究以及胃癌的诊断和临床预后判断提供一个有价值的思路，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

整群选取采用在该院手术切除胃组织存档蜡块57例，常规病理检查证实，患者术前均未接受过化疗。年龄在30～70岁，平均年龄在（58.5±10.3）岁，其中男性30例，女性27例。组织学类型、分级和分期等均参考世界卫生组织分级系统（2011）。临床分期，I期9例，II期15例，III期28例，IV期5例。伴淋巴结转移的39例，无腋窝淋巴转移的18例。取因其它良性胃部病变而手术切除的正常胃组织12例作为对照，年龄在28～69岁，平均年龄在（57.3±9.7）岁，其中男性7例，女性5例。

1.2 实验方法

1.2.1 单细胞悬液的制备 切取厚50 m的蜡块组织10片，置于10 mL试管中用二甲苯脱腊（置于37 ℃的恒温箱24 h）。100%、95%、70%及50%各20 min酒精水化后加5 mL蒸馏水，5 min后用眼科剪刀将组织剪碎，生理盐水冲洗后，300目铜钢网过滤制得混悬液，1000 r/min离心沉淀4 min，弃上清液，备测。

1.2.2 细胞免疫荧光标记 间接免疫荧光标记法，取100l的1×106/mL细胞，PBS液10 mL洗涤，1000 r/min离心2 min，弃上清夜；先后加入 1：50鼠抗人单克隆抗体Caveolin-1（一抗）和1：20羊抗鼠FITC-IgG工作液（二抗）工作液各100 L，室温孵育30 min，PBS液10 mL洗涤弃上清液；加入PBS100 L，500目铜网过滤后上机检测。

1.2.3 采取正常胃组织对照、PBS代替一抗阴性对照、分别加入一抗和二抗的阳性对照及FITC标记的小鼠IgG同型对照。

1.2.4 染色结果观察 免疫荧光染色涂片后，荧光显微镜观察，结果显示细胞发出黄绿色荧光。Caveolin-1基因蛋白的荧光多分布在胞膜或胞质，胞浆较少。

1.2.5 流式细胞术检测法 美国Beckman Coulter公司生产Epics-XLII型流式细胞仪，激发波长488nm，15mW氩离子激光器。应用Expo32ADC免疫荧光数据分析。

1.3 试剂

所有抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司。一抗：鼠抗人Caveolin-1单克隆抗体；二抗：羊抗鼠FITC-IgG（Code 111-095-003 115-095-003 Lot：61141）。

1.4 结果判定

以荧光指数（Fluorescence Idex， FI）表示结果，FI=样品蛋白表达的平均荧光强度（mode值）/正常对照样品平均荧光强度（mode值）。

1.5 统计方法

应用SPSS 16.0统计软件进行系统统计分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，进行 t 检验。

2 结果

2.1 Caveolin-1在胃癌中的表达

Caveolin-1基因蛋白在胃癌中的平均FI值为0.63±0.25明显低于正常胃组织，差异有统计学意义（FI=1.00±0.19，t=2.1567，P=0.0321<0.05），表明Caveolin-1低表达促进了胃癌的生长。

2.2 Caveolin-1在胃癌中的表达与淋巴转移的关系

Caveolin-1基因蛋白在有淋巴转移的胃癌组织中平均FI值为0.51±0.21明显低于无淋巴转移的胃癌FI=0.94±0.27，差异有统计学意义（t=2.4563，P=0.0294<0.05），表明Caveolin-1基因蛋白表达水平与胃癌有无淋巴转移相关。

2.3 Caveolin-1在胃癌中的表达与临床分期的关系

Caveolin-1基因蛋白在III，IV期胃癌组织中FI值为0.53±0.27，明显低于I，II期的胃癌FI=0.91±0.31，差异有统计学意义（t=2.3782，P=0.0297<0.05），表明Caveolin-1基因蛋白表达水平与胃癌的临床分期相关。

3 讨论

世界范围内胃癌是常见恶性肿瘤，发展中国家男女发病率分别居于人体恶性肿瘤的第2位和第4位，严重侵袭着人们的生命安全[4]。我国胃癌发生率是世界范围内最高的国家之一[5]，目前对胃癌的治疗已经从单纯化疗过渡到了分子靶向治疗[6-7]。寻找胃癌新的靶点将成为胃癌治疗新的研究方向。

胃癌预后所受到的影响因素很多，肿瘤细胞的转移及扩散是致死的主要原因。Caveolin-1是细胞膜的主要结构蛋白和标志蛋白，与肿瘤的分化、增殖、凋亡、侵袭及转移密切相关[1]。Caveolin-1在肿瘤发生过程中的机制尚不清楚，与多种恶性肿瘤相关[9-10]。

该研究结果显示Caveolin-1基因蛋白在胃癌中的表达明显低于正常胃组织，差异有统计学意义（t=2.1567，P=0.0321<0.05），表明Caveolin-1低表达促进了胃癌的生长，与黄陈[8]的研究结果相似，与刘铭[2]的研究结果不同。刘铭等对24例癌前病变和65例胃癌组织进行免疫组化分析，研究显示Caveolin-1在胃癌及癌前病变中的表达，差异无统计学意义（P>0.05）。Caveolin-1基因蛋白在有淋巴转移的胃癌组织中表达明显低于无淋巴转移的胃癌，差异有统计学意义（t=2.4563，P=0.0294<0.05），表明Caveolin-1基因蛋白表达水平与胃癌有无淋巴转移相关。Caveolin-1基因蛋白在III，IV期胃癌组织中FI值明显低于I，II期的胃癌差异有统计学意义（t=2.3782，P=0.0297<0.05），表明Caveolin-1基因蛋白表达水平与胃的临床分期相关，进一步证明Caveolin-1蛋白抑制肿瘤的生长及发展。黄陈[1]采用免疫组化法检测70例胃癌患者手术切除的癌组织和癌旁组织中Caveolin-1的表达水平，研究结果表明Caveolin-1在有淋巴结转移的胃癌中的表达低于无淋巴转移的胃癌，在III，IV期胃癌中的表达低于I，II期的胃癌，差异有统计学意义（P<0.05），结果表明Caveolin-1的表达水平与胃癌的临床分期及淋巴结转移密切相关，与该研究结果相似。而许文集等[3]的研究结果则显示caveolin-l在进展期及伴淋巴结转移的胃癌组中高于早期及无淋巴结转移的胃癌组（P<0.05），与该研究结果相反。这说明caveolin-l与胃癌的侵袭和转移的关系有待于进一步深入研究。

综上所述，该研究结果表明Caveolin-1与胃浸润及转移密切相关，评价其在胃癌侵袭及转移中的作用，分析其与胃癌的相关性，力图为胃癌转移机制的研究以及胃癌的诊断和临床预后判断提供一个有价值的思路。

[参考文献]

[1] 黄陈.Caveolin-1 与 E-cadherin表达与胃癌临床病理特征及EMT关系[J].临床与病理杂志， 2015，35（S1）：s32-33.

[2] 刘铭，李宏，张开立，等.胃癌组织caveolin-1和E-cadherin表达及相关性的研究[J].中国癌症杂志，2010，20（11）：806-811.

[3] 许文集，庄瑛瑛，陈玉丽，等.Caveolin-1在胃癌和癌前期变化中的表达及其意义[J].胃肠病学和肝病杂志，2010，19（3）：209-212.

[4] Ferlay J，Shin HR，Bray F，et a1.Estimates of worldwide burden of cancer in 2008：GLOBOCAN 2008[J].Int JCancer，2010，127（12）：2893-2917.

[5] Jemal A，Bray F，Center MM，et a1.Global cancer statistics[J].CA Cancer J Clin，201l，61（2）：69-90.

[6] Power DG，Kelsen DP，Shah MA.Advanced gastric cancer Slow but steady progress[J].Cancer treatment reviews，2010， 36（5）：384-392.

[7] Orian-Rousseau V.CD44，a therapeutic target for metastasising tumours[J].European Journal of Cancer，2010，46（7）：1271-1277.

[8] 袁碧英，易斌，鲁开智.Caveolin-1在肿瘤中的作用机制的研究进展[J]. 中国医学创新，2014，11（6）：129-131.

[9] 廖治，肖洪涛，瞿大成，等.CD44 分子与子宫内膜癌关系的研究进展[J].西部医学， 2009，21（6）：1027-1028.

[10] Fridolfsson HN，Patel HH. Caveolin and caveolae in age associated cardiovascular disease[J].J Geriatr Cardiol，2013（1）：66-74.

（收稿日期：2015-11-06）