食药用菌母种培养基胶囊的研制

殷乐　张桐语　杨昌天　宫敬利

摘要：本项目根据食药用菌企业菌种母种生产工艺，研究了一种能够简化生产流程，降低成本，自动化生产的食药用菌母种培养基胶囊，确定了母种培养基胶囊的组成成分及制作工艺。

关键词：食药用菌；母种培养基；胶囊

基金项目：吉林农业科技学院大学生科技创新科研项目项目（2015001）；吉林省教育厅“十二五”科学技术研究项目[吉教科合字（2012）第322号]

中图分类号：S646 文献标识码：A DOI编号：10.14025/j.cnki.jlny.2016.10.035

从20世纪80年代我国建立起独特的食用菌菌种技术体系，至21世纪初期，中国已成为世界上食用菌生产大国，年产量占世界总产量的70%以上。随着食药用菌需求量的增加，传统食药用菌菌种母种制作方法已落后食药用菌企业的发展。早在1999年，何培新等人就开始了食用菌母种培养基试剂化制备的研究，意图简化母种培养基的制备流程。由于大部分食药用菌菌丝生长对营养条件要求较高，目前食药用菌母种的生产仍采用传统煎煮制备方法。本项目由此出发，旨在利用现代分离提取技术所得产物，研制出一种适合食药用菌企业自动化生产的母种培养基胶囊。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试菌种黑木耳、香菇、灵芝菌种均由吉林农业科技学院食药用菌实验室保存。

1.1.2 培养基配方采用平板培养法在PDA培养基上将黑木耳、香菇、灵芝的菌种扩大培养，选用适合食药用菌生长的8种培养基进行试验，PDA培养基为对照，详见表1。

1.2 方法

1.2.1 培养基制备制备试管母种培养基和平板母种培养基，置于25℃恒温暗培养48小时，取无杂菌污染的培养基，备用。

1.2.2 接种培养方法参照张春霞等方法进行接种培养，菌丝生长状况、生长速度实验及显微性状观察试验采用平板培养法；菌丝萌发时间和满管时间试验采用试管培养法。

1.2.3 母种培养基胶囊制作工艺

1.2.3.1 培养基成分颗粒的制备节将培养基成分固体粉末制成颗粒剂，以改善粉末成分遇水易凝结成团，溶解性差的现象，结合培养基组成成分，确定颗粒剂制备的其它辅料为：2.6%CMC-Na，1%PVP，2.6%CMS-Na。采用等量递增混合法，将培养基成分与辅料混合均匀，用适量95%乙醇软材，制粒，烘干，过筛整粒，制备出培养基成分颗粒。

1.2.3.2 培养基胶囊的灌装选择市售00#无色透明淀粉硬胶囊壳，装入培养基成分颗粒，每粒胶囊可装入1.140克。

1.2.4 食药用菌母种培养基胶囊的检测应用将培养基胶囊放入18毫米×150毫米试管中，加入13毫升纯净水，121℃，30分钟高温灭菌，摆斜面冷却成母种培养基，接种，25℃恒温暗培养，观察菌丝的生长情况。

2 结果与分析

2.1 不同培养基中菌丝的生长状况及显微性状

黑木耳菌种从菌丝密度、显微性状等五方面比较试验组与CK组及试验组相互之间的差异。M3、M6、M8三组培养基中黑木耳菌丝稠密；M4、M6、M7、M8四组培养基中黑木耳菌丝颜色较浅、分枝少，其老化程度低，菌丝活性强（见表2）。

2.2 不同培养基中菌丝的生长速度（见表3）

9种培养培养黑木耳菌丝有显著性差异，培养基M6的生长速度最高，M8上菌丝的生长速度均值与之接近，M3次之。因此，适合黑木耳菌丝生长最好的培养基是M6，其次是M8、M3。表明黑木耳菌丝对培养基营养成分有较高的要求，以大豆蛋白胨、豆粞粉作为氮源，以葡萄糖、蔗糖作为碳源的培养基能使黑木耳菌丝较好的生长。

2.3 不同培养基中菌丝的萌发时间及满管时间

黑木耳菌丝在培养基M4、M5上的萌发时间最长，菌丝满管时间也是最长；9种培养基上菌丝满管时间差异明显，M3、M6、M7、M8培养基满管时间最短，M2、M1、CK培养基满管时间次之，见表4。

2.4 不同培养基中菌丝生长的均一性

食药用菌菌丝在母种培养基上不仅要求菌丝生长稠密、长势长速好，而且要求菌丝生长速度和长势均一。黑木耳菌丝生长速度和满管时间的方差分析见表4，菌丝在9种培养基上的生长速度方差差异较大，依次为cK→M6→M8→M7→M1→M2→M5→M4→M3。菌丝生长速度方差小，表明变异性小，说明培养基均一性。从表4可知，CK组培养基上菌丝生长均一性好，M6、M7培养基与之相近，说明M6、M7培养基较为适合黑木耳菌种生长。

2.5 不同食药用菌在胶囊培养基上的生长状况

黑木耳、香菇、灵芝三种食药用菌在J6、J8培养基上菌丝分布情况及菌丝密度差异较大（表5），J6、J8培养基其碳源成分不同，在制粒时，蔗糖黏合性较葡萄糖好；在胶囊溶解中，J8培养基胶囊颗粒较J6培养基胶囊颗粒分布均匀，造成两种胶囊培养基菌丝生长状况差异。

3 结论与讨论

香菇易生长的食用菌，黑木耳、灵芝是生长条件要求高的食药用菌，其三者菌种在18胶囊培养基上均表现出了良好的生长状况，反映出J8胶囊培养基适合大部分食药用菌菌种母种培养。J8胶囊培养基组成成分为（70粒00#胶囊）：大豆蛋白胨7.5克，蔗糖20.0克，酵母粉2.0克，KH₂PO₄3.0克，MgS041.5克，琼脂20.0克，CMC-Na1.5克，PVP0.6克，CMS-Na1.5克。

胶囊培养基采用颗粒制剂的工艺制成，在工业化生产中，采用制粒机、胶囊自动灌装机等现有工业生产设备就可实现自动化生产。片剂、丸剂等其它剂型是否更加适合母种培养基的制作，还要进一步探究。培养基胶囊颗粒剂的制作工艺，还可以进一步优化。

胶囊培养基适用于黑木耳、灵芝等大部分食药用菌母种培养基的制作，是否存在食药用菌菌种生长不适宜的情况，还需进一步的研究。黑木耳、香菇、灵芝三种食药用菌在胶囊培养基上生长状况良好，对于实际生产中，以此母种制成的原种及栽培种生长状况是否有影响，还需进一步研究。