不同区域小油桐种质差异与ISSR分子标记分析

于咏

摘 要 随着社会的进步和经济的不断发展，我国的技术方面发生了很大变化。因此对于小油桐的研究有了很大的进展，对于小油桐的种质差异进行了生物研究，与ISSR分子标记相结合，进而引出小油桐种质差异与地域的关系，研究小油桐种质差异是否与地域有关。就不同地域的小油桐进行了研究，观察导致小油桐发生种质差异的原因，分别从不同的地区引进小油桐，结果显示：小油桐的种质差异与地理位置没有必然的联系，

关键词 小油桐；区域种质差异；ISSR分子标记

中图分类号：S794.3 文献标志码：B 文章编号：1673-890X（2016）15--02

对于小油桐产生种质差异的原因有多种，其中认为地域是一方面的原因。小油桐原产地是在美洲，但在我国的云南、广西、海南等地均有大面积的种植，当然在其他地区也有少数的种植[1，2]。小油桐种子的含油率是非常高的，且含有丰富的蛋白质，最重要的是生长速度快，发芽率高，这使小油桐的存活率很高。此外，小油桐是一种环保的植物，目前我国的原油是非常紧缺的，因此小油桐是理想的生产生物柴油的能源植物。

1 不同区域小油桐种质资源的收集

本文通过对不同地区的小油桐进行研究，并通过进行ISSR分子标记得出小油桐产生种质差异的原因。根据种植面积的不同，收集的小油桐种子主要来自我国的台湾、云南、贵州农科院、江苏沐阳、江西九江、湖北咸丰6个地区，见表1。此外，还有来自贵州、福建、重庆以及云南的小油桐树苗，分别对这些小油桐种子和小油桐树苗进行注册，主要是用来进行ISSR分子标记，其中注册见表2。

对于来自不同地区的小油桐种子及小油桐树苗进行了收集，并进行了编号，其目的主要是收集小油桐基因资源，选取有代表性的地区，而且该地区种植大面积的小油桐，在收集的过程中，要减少其他方面带来的影响，这样才会使结果更加准确，减少误差。要研究影响小油桐种质差异是否与地域有关，需要做到的是保证其他条件相同，只考虑不同地域的小油桐，通过比较小油桐的种子形态特征、颗粒质量以及含油率的测试，对小油桐种质资源进行ISSR分子标记等，从而更好地得出小油桐与地域的关系。通过研究得出适合小油桐生长的环境，为以后小油桐的开发利用奠下基础，这样既能培育出高品质的小油桐，又能为国家带来能源物质，还对我们国家的环保有着重要贡献。

2 小油桐种质资源的ISSR分子标记

2.1 小油桐种质的检查与观测

需要对于收集的小油桐种子进行一定的处理，看看种子是否出现发霉或发芽等情况，对于出现上述情况的种子将不能使用，应及时摒弃，否则会给实验结果带来影响，影响小油桐的最后测量结果，对于油桐的处理首先做的是利用天平进行各取小油桐百粒质量[3]，然后对小油桐进行去皮，根据种子的质量以及种仁的质量得出小油桐种子的出仁率，对于小油桐种子的含油率可以使用粗脂肪测定方法进行测定，最后得出小油桐种子的出油率，在对小油桐种子进行观测时，要全面考虑各方面的原因，要及时处理可能会影响结果的问题。小油桐对于我国的发展有着非常重要的作用，利用它可以生产生物柴油，也可用来进行生物防治，当然还可以进行环保，可以使我国的资源产生非常大的效益，可以预测，在未来一段时间内，它将会得到更广泛的应用，将会用在生活的方方面面，这对我们的生活是非常有利的。

2.2 小油桐种质资源的ISSR分子标记

利用ISSR分子对小油桐种质资源进行分子标记，进行标记的引物会出现不同的序列，当然扩增的条带也不相同，对小油桐种质资源进行的ISSR分子标记主要分为DNA提取和ISSR的PCR扩增。首先需要做的就是提取小油桐的基因组总DNA，对得到的多条ISSR引物进行筛选，最后得到几条带清晰，并重复性非常好的引物，对于PCR技术需要使用酶、缓冲液、引物、模板和PCR反应程序等，最后需要用到的是电泳，对于生物电泳需要严格控制温度，温度或高或低都会给结果带来很大的误差，最后在凝胶成像仪上观察照相，根据呈现出来的像进行分析，在电泳图上每一条带作为一个标记，代表一个结合反应的位点，按照同一个水平位置扩增条带的出现与否进行统计，然后分别进行标记，在进行标记的过程中，会出现各种各样的问题，因此需要及时处理在进行标记的过程中出现的各种问题，并减少误差。但是在实验的过程中会出现各种各样的误差，有些误差是不可避免的，但是有些误差是可以避免的，我们要尽量避免那些不必要的误差，这样才能保证结果的准确性，才能得到准确的结果。

3 对小油桐进行ISSR分子标记的结果与分析

3.1 小油桐种子形态以及百粒质量和出仁率分析

从不同的地区收集的小油桐种子在形态上差别不大，但是种子在大小上存在一定的差异。从外形上看，云南引进的小油桐种子较大，贵州引进的小油桐种子最小，其余的居中，对从不同地域收集的种子进行了纵横径测量，其中最长的是云南引进的种子，最小的是贵州引进的小油桐种子，其余的都比较相近，从横测量结果看，类似于纵径，从百粒质量方面来说云南的小油桐种子最重，同样出油率也是最高的[4]，但是从台湾引进的小油桐种子出油率最低，这与台湾种保存时间有关。综上所述，可以发现云南的小油桐种子不仅种子较大，而且出油率也是非常高的，贵州种种子比较小，台湾种出油率比较低，除了与保存时间有关之外，还与温度有关，可以看出小油桐的种质差异与地域存在一定的差异，但是不能判断小油桐与不同地域有必然的联系，当然在进行ISSR标记的过程中，会出现误差，因此结果还会存在一定的误差，不能完全判断小油桐与地域之间一定存在某种联系。所以，要正确分析出现的问题以及研究的结果。最后结果得出：从我们收集的6种小油桐种子外观来看：形态差别不大，但是个体差别较大，云南收集的小油桐种子性状最佳，可以在合适的地区进行推广，可以进行大面积的种植，这样有利于我国小油桐的生产和利用。

3.2 小油桐ISSR分子标记结果的分析

至今为止，ISSR分子标记技术已经应用于很多的方面，主要是对遗传多样性进行分析，并取得了很好的结果，用8条ISSR引物对收集的小油桐进行PCR扩增技术，在所用的引物中，其中有3条不能扩增出明显的多态性条带，其余的5条引物可以，可以从得到结果看：可以明显鉴别出来自台湾、贵州以及重庆的小油桐种子，其中来自贵州的种子有着明显的不同，说明我国不同地域种植的小油桐种子可能出自相近的种源，与所在的地理位置之间没有很大的联系，从结果可以推测出云南小油桐可能来自不同的地区，也可能是云南小油桐来自国外。以后还需要更多的进行分析测试，同样建立多个示范种植基地，这样不仅可以相互参照，还有利于选出品种较好的小油桐，根据不同的需要进行不同的改良；同时，要多方面考虑可能会出现的问题，遇到问题时，要及时解决不可推脱。根据小油桐本身的特性，可以知道小油桐是极具潜质的能源物质，此外，小油桐还是经济作物，小油桐可以用来生产生物柴油，这是非常重要的。

此外，小油桐也可以进行水土防治以及生物防治，有利于环保，除了这些，小油桐还有很多的优点，我们要利用这些优点，可以结合具有优良特性的小油桐进行改良，通过示范种植，达到改良小油桐性状的目的，在示范种植期间，要定期关注小油桐的生长状态，对于不同的小油桐种质资源进行不同的划分，尽最大可能的培育出具有高油、高效的小油桐；同时，生产出具有不同用途的优良品种，

4 结语

在我国，小油桐的覆盖面积非常大，因此形成了丰富的生物资源。小油桐是极具潜质的经济作物和能源产物，小油桐的用处非常广泛，利用小油桐可以生产生物柴油，这会增加我国紧缺的能源物质，此外，小油桐还可以药物研制、生物防治、环保等。目前，小油桐已经应用于我国很多的领域，本文通过对不同地区采集的小油桐种质资源ISSR标记的分析，可以为以后的小油桐培育打下一定的基础，改良出能够进行生物防治及高级净化等不同用途的优良品种。

参考文献

[1]徐伟.油桐属植物SSR分子标记的开发和种质遗传多样性的研究[D].扬州：扬州大学，2012.

[2]向青.川渝地区油桐种质资源评价和核心种质的初步构建[D].雅安：四川农业大学，2012.

[3]朱炳耀，杨志敏，庄志鸿，等.不同区域小油桐种质差异与ISSR分子标记研究[J].中南林业科技大学学报，2013，4（15）：68-69.

[4]贾宝光.油桐SSR分子标记的开发与遗传多样性的研究[D].长沙：中南林业科技大学，2015.

（责任编辑：刘昀）