多合一真菌毒素免疫亲和柱的制备及其应用

杨婷婷 吕轶 张东升 唐晔 袁艺 张海涛 汪海峰

摘 要 以rProtein A-琼脂糖凝胶为载体，同时偶联抗黄曲霉素B1（AFB1）、玉米赤霉烯酮（ZEN）和脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）单抗， 制备了AFB1-ZEN-DON三合一免疫亲和柱，并对非特异性吸附、柱空白、柱容量、柱效及样品加标回收率等指标进行评价。结果表明，0.25 mL胶对应的柱容量分别为：AFB1 295 ng，ZEN 905 ng，DON 2342 ng；柱空白为0；rProtein A-琼脂糖凝胶（0.25 mL胶）对3种毒素的非特异吸附率均低于8%，3种毒素不同浓度的平均柱回收分别为97.4%、98.0%和98.4%。通过优化条件，选择80%甲醇-水（80∶20， V/V）为提取溶剂，PBST稀释； FAPAS质控样本经不同批次三合一亲和柱净化后测定结果接近靶心值。制备的三合一免疫亲和柱能满足食品及饲料样品的前处理，可替代常规单一亲和柱，为多种毒素的一步富集、净化、检测奠定基础。

关键词 黄曲霉毒素B1； 玉米赤霉烯酮； 脱氧雪腐镰刀菌烯醇； 定向偶联； 免疫亲和柱