全自动血凝分析仪Sysmex CS-5100的性能验证与评价

张巧云，彭　华，梁委军

(广西医科大学第四附属医院暨柳州市工人医院医学检验科，柳州545005)



全自动血凝分析仪Sysmex CS-5100的性能验证与评价

张巧云，彭华，梁委军

(广西医科大学第四附属医院暨柳州市工人医院医学检验科，柳州545005)

【摘要】目的对全自动血凝分析仪Sysmex CS-5100的性能进行验证与评价。方法用高低浓度混合血浆验证批内精密度，用高低浓度质控品验证日间精密度，用高浓度混合血浆分别按100%、80%、60%、40%、20%、10%、5%的比例稀释后对仪器进行线性验证，用接近预期检测限的低/高浓度血浆样本来验证可报告范围，通过检测定值质控品和仪器比对来验证正确度，用正常体检血浆验证参考区间，用高低浓度血浆标本验证携带污染率。结果Sysmex CS-5100检测PT、APTT、FIB批内CV<3.0%；TT、D-二聚体、FDP批内CV<4.0%；PT、APTT、FIB日间CV<5.0%；TT、D-二聚体、FDP日间CV<6.0%；FIB、D-二聚体、FDP的可报告范围分别是：0.21～24.6 g/L，0.06～89.6 mg/L，0.09～2001.28 μg/ml；各项目相对偏差均在10.5%以内；95%以上样本处于引用参考区间内，携带污染率均<2.5%。结论Sysmex CS-5100全自动血凝分析仪性能良好，可用于检测临床样本。

【关键词】Sysmex CS-5100；血凝分析仪；性能验证

ISO15189医学实验室质量和能力的专用要求明确指出必须对仪器进行性能验证，新引进的仪器须通过性能验证方可用于临床检测。全自动血凝分析仪Sysmex CS-5100是一款新仪器，引进该仪器的医学实验室还不是很多，对其性能验证的相关资料很少。本文介绍了一种性能验证方法，对验证结果进行阐述，并给出了结论，以期为其他医学实验室进行该仪器的性能验证提供参考依据。

1材料与方法

1.1仪器与试剂日本希森美康公司(Sysmex)生产的CS-5100全自动血凝分析仪。日本Sysmex配套试剂和质控品：凝血酶时间(Test Thrombin Reagent，TT)，LOT：504477；活化部分凝血活酶时间(Action-APTT),LOT：547177；凝血酶原时间(Thromborel S，PT),LOT：545578；纤维蛋白原(Thrombin Reagent，FIB)，LOT：538079；D-二聚体(INNOVANCE D-Dimer，D-二聚体):Reagent LOT：560181/Diluent LOT:560280/Buffer LOT：560382/Supplement LOT：560479；CLEAN-Ⅰ,LOT：A4156；CLEAN-Ⅱ,LOT：A4014；质控1(Dade ci-Trol 1),LOT：528157；质控2(Dade ci-Trol 3),LOT：548438；质控3(D-二聚体低浓度质控),LOT：560774；质控4(D-二聚体高浓度质控),LOT：560675；日本积水医疗株式会社生产的纤维蛋白/纤维蛋白原降解产物试剂(Nanopia P-FDP)和质控品：FDP缓冲液，LOT：815RFL；FDP胶乳液，LOT：817RFL；质控5(FDP低浓度质控),LOT：805RKK；质控6(FDP高浓度质控),LOT：805RKK。

1.2标本来自本院正常体检者和患者血浆。空腹抽血1.8 ml，0.109 mol/L枸橼酸钠1∶9抗凝。其中用于参考区间验证的体检个体需满足以下条件：无饮酒、吸烟史，血压正常，未服用药物，近期无住院、手术及输血史，无系统性疾病，女性未在妊娠期或哺乳期，无家族遗传性疾病。

1.3方法

1.3.1批内精密度验证每个项目取2个浓度水平(包括正常低值、异常高值)的临床样本各1支，每支样本重复检测11次，计算后10次检测结果的算术平均值和标准差，计算变异系数(CV)。异常样本的浓度水平要求大于仪器检测结果参考区间中位值的2倍；FIB异常样本的浓度大于6.0 g/L或小于1.5 g/L。

1.3.2日间精密度按说明书要求复溶质控1、质控3、D-二聚体质控品和FDP质控品，并各分装20支，共20组，-20℃冷冻保存，每次取一组置室温解冻后上机检测，每天检测4次，每次间隔2个小时，共检测5天，得到20组数据，分别计算各项目20次检测结果的算术平均值和标准差，计算CV。

1.3.3线性选取一份接近预期上限的高值样本(H)，分别按100%、80%、60%、40%、20%、10%、5%的比例进行稀释，每个稀释度重复测定2次，计算均值。将实测值与理论值作比较，并计算回归方程 y=bx+a，及相关系数(R2)。

1.3.4可报告范围[1]取接近预期检测限的低/高浓度血浆样本，分别按照Sysmex CS-5100仪器设置的浓缩/稀释倍数进行检测，每个浓缩/稀释度连续检测2次，计算2次检测结果的算术平均值作为实测值，并计算回收率,回收率(%)=实测值/理论值×100%。

1.3.5最小检测限[1]取接近预期的接近最小检测限的低浓度血浆样本，连续检测10次，计算10次检测结果的算术平均值和标准差，计算CV。

1.3.6准确度使用5份配套质控品分别进行单次检测，计算每份检测结果与靶值(厂家参考值)的相对偏差。

1.3.7仪器之间结果的比对[1]各项目选用患者标本20份，其中包含正常、异常各10份，也覆盖黄疸、脂血和溶血标本。分别用Sysmex CS5100和Sysmex CA7000对每份标本的相应项目各检测1次，比较两组数据的相对偏倚(%)，统计相对偏倚符合要求的例数(PT、APTT:正常≤6%，异常≤10%;FIB、TT:正常≤7%，异常≤10%;D-二聚体、FDP:正常≤10%，异常≤10%)，计算比对通过率(%)。其中Syemex CA7000定期校准和维护保养，每天监测室内质控，2014全年室间质评结果合格，以此为靶仪器。

1.3.8参考区间验证[1]选择10名正常男性和10名正常女性新鲜血浆标本检测，统计各参考个体检测值，与引用的参考区间比较，处于引用区间内的样本为有效样本，并计算有效样本比率(%)=参考个体落在引用区间的个数/总的参考个体数×100%。

1.3.9携带污染率验证

1.3.9.1高值样本对低值样本的污染将低值样本置样本架1和3位置，高值样本置于2位置，每个样本分别测定3次，记录结果：N1、N2、N3、A1、A2、A3、N4、N5、N6。按以下公式计算：k1=[N4-Mean(N1，N2，N3)]/Mean(N1，N2，N3)。

1.3.9.2低值样本对高值样本的污染将高值样本置样本架1和3位置，低值样本置于2位置，每个样本分别测定3次，记录结果：A1、A2、A3、N1、N2、N3、A4、A5、A6。按以下公式计算：k2=[A4-Mean(A1，A2，A3)]/Mean(A1，A2，A3)。

2结果

2.1批内精密度经实验验证批内精密度PT、APTT、FIB均满足CLIA’88的质量要求，TT、D-二聚体、FDP均满足试剂厂家的质量要求，验证结果见表1。

2.2日间精密度经实验验证日间精密度PT、APTT、FIB均满足CLIA’88的质量要求，TT、D-二聚体、FDP均满足试剂厂家的质量要求，验证结果见表2。

2.3线性运用线性回归方程对实测值与理论值进行直线拟合，斜率均在(1±0.05)范围内，且各项均满足R2≥0.95，各项目线性良好,验证结果见图1A～C。

表1　CS-5100批内精密度验证结果

表2　CS-5100日间精密度验证结果

A:FIB线性验证;B:D-二聚体线性验证;C:FDP线性验证。图1CS-5100线性验证结果

2.4可报告范围试剂说明书及相关资料介绍样本经稀释后实际检测值与理论值的偏差应满足:FIB≤20%，回收率应在80%～120%之间[2]，D-二聚体、FDP≤15%，回收率应在85%～115%之间，据此验证FIB、D-二聚体、FDP的最大稀释倍数分别是4倍、20倍、16倍，其中FIB的最大浓缩倍数为2倍。

2.5最小检测限最小检测限 D-二聚体、FDP的低值浓度的样本重复检测10次，CV≤20.0%，二者最小检测限分别为：0.06 mg/L FEU，0.09 μg/ml。

2.6准确度各批号质控品的实测值和参考靶值的相对偏差(%)满足PT≤15%，APTT≤15%，FIB≤20%，D-二聚体≤20%，FDP≤20%均满足我国卫生行业标准要求，验证结果见表3。

2.7仪器之间结果的比对PT、APTT、FIB、TT、D-二聚体、FDP各项目比对通过率分别为：95%、100%、90%、90%、90%、90%，均≥80%,比对通过。

2.8参考区间验证PT、APTT、FIB、TT、D-二聚体、FDP各项目有效样本比率分别是：100%、100%、95%、100%、100%、100%，均大于90%，满足(NCCLS)C28-A2的要求，当前参考区间可用。

2.9携带污染率验证PT、APTT、FIB、D-二聚体、FDP高值对低值的携带污染率分别为：0.3%、1.64%、1.11%、1.56%、2.38%，低值对高值的携带污染率分别为：1.26%、0.95%、1.53%、2.35%、0.6%，均<2.5%，满足要求，仪器自动清洁效果较好。

表3　CS-5100准确度验证结果

3讨论

本实验对Sysmex CS-5100的性能验证是按照国际血液学标准化委员会(ICSH)制定的评价内容，参照我国卫生行业标准和CLIA’88有关凝血项目的质量要求，以及有关项目试剂厂家的性能参数来制定判断标准和实验步骤。

PT、APTT、FIB精密度均能满足CLIA’88的质量要求(批内精密度<1/4 CLIA’88规定的最大允许误差，日间精密<1/3 CLIA’88规定的最大允许误差)，TT、D-二聚体、FDP能满足试剂厂家的质量要求，Sysmex CS-5100精密度符合要求。本实验中FIB的病理浓度只有一个高浓度水平，有报道FIB在低浓度水平CV>5.0%[3]，故后续应进一步验证低浓度水平的批内精密度。此外，采用凝固法检测的项目影响因素较多[4]，故实验过程中质控品和血浆的复溶及保存方法应相同，复溶后尽快上机检测，以减少人为因素造成的结果偏差。

FIB、D-二聚体、FDP的线性范围分别是：FIB 0.62～6.15 g/L，D-二聚体 0.22～4.48 mg/L FEU，FDP 6.25～125.08 μg/ml，与试剂说明书基本相符。其中试剂说明书介绍FDP的低值线性范围可以达到2.5 μg/ml，可考虑分别用浓度接近低值浓度水平和高值浓度水平的血浆配比稀释以达到线性范围的浓度。本实验中FIB、D-二聚体、FDP的临床可报告范围(CRR)分别是：0.21～24.6 g/L、0.06～89.6 mg/L、0.09～2001.28 μg/ml，可覆盖临床大多数样本。其中，FIB的可报告范围基本全部覆盖临床样本，故未验证其最小检测限。在一些动静脉血栓患者的溶栓治疗过程中，溶栓效果好的患者FDP、D-二聚体明显上升[5]，准确测定FIB、D-二聚体、FDP在溶栓治疗过程中可以判断疾病发展、预测出血风险，具有重要的监测价值[6，7]。故验证其最大稀释倍数，精确检测高浓度水平样本，对临床有重要意义。此外，本实验由于仪器参数设置的限制，D-二聚体在20～64倍之间的稀释倍数没有得到验证，应进一步验证。

根据NCCLS颁布的EP15-A,正确度的验证采用了两种简便方案来验证,即分别用检测规定靶值的质控品和通过仪器比对来验证[1]。Sysmex CA-7000和Sysmex CS-5100两台仪器检测原理基本相同，已有报道二者结果的相关性良好[8，9],本实验仅从两台仪器的结果偏倚进行分析，以验证新进仪器结果的可靠性。同一临床实验室应使用检测原理相同的血凝分析仪，否则极有可能出现检测结果一致性不佳，对临床造成困惑，也不符合《医疗机构临床实验室管理办法》的要求[10]。

Sysmex CA-7000与Sysmex CS-5100的检测系统相近，检验服务对象相同，且分析前和分析后各因素均一致，故本实验中参考区间的验证属于具有可比性的分析系统之间参考区间的转移。按照CLSI EP9-A2文件要求，用20个健康参考个体进行验证，PT、APTT、FIB、TT、D-二聚体、FDP各项目20个参考值均未超出2例的观测值在原始的参考区间外，二者参考区间可通用[1]。另外，两台仪器检测系统大致相同，且参考区间一致，结果可比，故可以用同一个PT的Normal值，在实际工作中可以继续跟踪验证二者INR有无差异。

携带污染率是具体的量化的携带污染，其值越小说明仪器检测过程样本相互影响越小，本实验中各项目的携带污染率均小于2.5%，证明Sysmex CS-5100有较好的自洁系统，为检测结果的准确性提供保障。

本实验初步确定Sysmex CS-5100全自动血凝分析仪有较好的批内精密度和日间精密度，线性良好，准确度和仪器比对合格，参考区间与Sysmex CA-7000具有通用性，仪器自洁系统较好，故可以用于检测临床样本。此外，本实验未进行干扰试验的验证，需要进一步试验验证。

参考文献

[1] 杨有业，张秀明.临床检验方法评价[M].北京:人民卫生出版社,2009:136-251.

[2] 简正伟，胡意，万腊根，等.CA-7000全自动血凝仪性能评价的探讨[J].实验与检验医学，2012,30(6):548-551，554.

[3] Geens T,Vertessen F,Malfait R,et al.Validation of the Sysmex CS5100 coagulation analyzer and comparison to the Stago STA-R analyzer for roution coagulation parameters[J].International Journal of Laboratory Hematology,2015,37(3):372-381.

[4] 陈国，梁荣伟.比对试验分析凝血四项检测的影响因素[J].国际检验医学杂志，2012,33(19):2369-2370.

[5] 张露远，张炎，周金芳，等.不同溶栓效果患者纤维蛋白原及D-二聚体的动态变化研究[J].海南医学，2014，25(2):203-205.

[6] 王曙强.心肌梗死患者溶栓治疗疗效与D-二聚体水平的关系[J].临床和实验医学杂志，2008，7(11):17-18.

[7] 吴玉竹，胡秀学，潘俊峰.Fib和FDP监测在LDVT溶栓治疗中的意义[J].国际检验医学杂志，2013,34(10):1242-1243.

[8] 闫宏斌，郑善銮，郝晓柯.SYSMEX CS5100血凝分析仪性能评估及凝血六项参考区间的调整[J].检验医学，2014,29(9):964-968.

[9] Franz Ratzinger,Klaus G,et al.Evaluation of the automated coagulation analyzer CS-5100 and its utility in high throughput laboratories[J].Clin Chem Lab Med，2014,52(8):1193-1202.

[10] 张芹，欧阳红梅，甸自金，等.2种全自动血凝分析仪凝血四项检测结果的比对研究[J].国际检验医学杂志，2013，34(2):205-206.

(编辑：潘明志)

Performance verification and evaluation of Sysmex CS-5100 automatic coagulation analyzer

ZHANGQiaoyun,PENGHua,LIANGWeijun

(DepartmentofClinicalLaboratory,TheFourthAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity—LiuzhouWorker’sHospital,Liuzhou545005,China)

【Abstract】ObjectiveTo verify and evaluate the performance of Sysmex CS-5100 automatic coagulation analyzer.MethodsIn-run precision was verified by high/low concentration mixed blood plasma, between-day precision was verified by high/low concentration quality control sample, high concentrations of mixed plasma was used to verify the linear with the dilution ratio of 100%, 80%, 60%, 40%, 20%, 10% and 5%, respectively. High/low concentration close to expected detection limit was used to verify reportable range, accuracy was verified by detecting fixed value quality control sample and equipment comparison, normal physical examination plasma was carried on to verify reference range, and high/low concentration blood plasma was used to verify contaminative rate. Results The in-run precision of PT, APTT and FIB detection were all less than 3.0%, TT, D-Dimer, FDP detection were all less than 4.0%. The between-day precision of PT, APTT and FIB detection were all less than 5.0%, and TT, D-Dimer, FDP detection were all less than 6.0%. The reportable range of FIB, D-Dimer, FDP were 0.21～24.6 g/L, 0.06～89.6 mg/L and 0.09～2001.28 μg/mL, respectively.The bias of each items were within 10.5%, more than 95% of the sample in quoting reference range, contaminative rate was all<2.5%.ConclusionSysmex CS-5100 show a good performance,and can be used for detection of clinical samples.

【Key words】Sysmex CS-5100 show a good performance, so it can be used for detection of clinical samples

(收稿日期：2015-11-27修回日期：2016-02-26)

中图分类号：R318.6；TH776

文献标识码：A

DOI:10.3969/j.issn.1003-1383.2016.01.021

作者简介：张巧云，女，初级技师，医学学士，主要从事医学检验研究与工作。E-mail：zhangqiaoyun1984@126.com