E-选择素在大肠癌组织肿瘤细胞中的表达及其临床病理意义

黄　琴，黄炳臣，陈家兴，黄　芳，黄照权，谢　亮，龙艳丹，罗春英

(右江民族医学院1.2011级临床医学本科，2.临床医学院，3.2012级临床医学本科，

4.广西高校桂西地区高发病防治研究重点实验室，百色 533000)



E-选择素在大肠癌组织肿瘤细胞中的表达及其临床病理意义

黄琴1，黄炳臣2，陈家兴3，黄芳3，黄照权2，谢亮3，龙艳丹3，罗春英4▲

(右江民族医学院1.2011级临床医学本科，2.临床医学院，3.2012级临床医学本科，

4.广西高校桂西地区高发病防治研究重点实验室，百色 533000)

【摘要】目的探讨E-选择素蛋白在大肠癌组织肿瘤细胞中的表达及其临床病理意义。方法运用免疫组织化学法，采用E-选择素抗体检测116例大肠癌组织和57例癌旁正常肠黏膜组织E-选择素的表达情况，分析比较E-选择素在大肠癌肿瘤细胞和正常肠黏膜中的表达差异及其临床病理意义。结果E-选择素在大肠癌肿瘤细胞、血管内皮细胞均有表达，其在肿瘤细胞中阳性表达率(38.8%，45/116)明显高于癌旁正常肠黏膜腺体组织上皮细胞E-选择素的阳性表达率(5.3%，3/57)，两者差异有统计学意义(χ2=21.4335，P<0.001)。但肿瘤细胞E-选择素阳性率在不同肿瘤直径、分化程度、浸润深度和有无淋巴结转移间差异无统计学意义(40.3% vs 37.0%、37.0% vs 42.9%、31.4% vs 44.6%、32.7% vs 43.8%，P均>0.05)。结论大肠癌组织肿瘤细胞表达E-选择素，但肿瘤细胞的这一分子特征在不同生物学行为的大肠癌病例间无显著差异。

【关键词】E-选择素；大肠癌；免疫组织化学

近十年来，我国大肠癌的发病率和死亡率呈逐年上升趋势，严重威胁人类健康[1]。近年研究发现，E-选择素是黏附分子受体，能介导肿瘤细胞与血管内皮细胞之间的相互作用，从而影响肿瘤的生物学行为，在肿瘤的侵袭转移中起着非常重要的作用[2]。也有文献报道E-选择素在结直肠癌肿瘤患者血清中检测水平较高，与该肿瘤的恶性生物学行为及预后关系密切[3]。为探讨E-选择素在大肠癌肿瘤组织中的表达情况及其临床意义，我们采用免疫组织化学法检测116例大肠癌组织和57例癌旁正常肠黏膜组织E-选择素蛋白的表达情况，分析E-选择素在大肠癌组织中癌细胞的表达情况及其临床病理意义。

1材料与方法

1.1材料选取右江民族医学院附属医院2011年1月～2012年1月间，病理确诊为大肠癌的手术切除标本116例和癌旁正常肠黏膜组织57例，所有标本经10%中性福尔马林固定、石蜡包埋。所有病例术前均未接受放、化疗或免疫治疗，116例病例中男89例，女27例，年龄22～92岁，平均(56.7±4.9)岁；≥60岁58例，<60岁58例；肿瘤直径<5 cm的62例，≥5 cm的54例；高分化腺癌81例，中-低分化腺癌35例；肿瘤浸润肌层51例，浸润至浆膜层65例；淋巴结转移52例，无淋巴结转移 64例。

1.2试剂及方法E-选择素单克隆抗体购于R&D Systems公司，二抗、DAB 染色剂购于北京中杉金桥生物技术有限公司。采用免疫组化En Vision两步法检测，其主要操作步骤：(1)石蜡切片，脱蜡至水。(2)抗原修复，采用枸橼酸缓冲液高压抗原修复，高压锅喷气2 min，放置冷却至室温。(3)3%H2O2室温孵育10 min阻断内源性过氧化酶活性。(4)切片滴加非免疫牛血清室温下存放10 min，以封闭非特异性抗原反应。(5)滴加 25 mg/L鼠抗人E-选择素单克隆抗体，4 ℃下孵育过夜，然后用PBS缓冲液冲洗3次，每次3 min。(6)每张切片滴加二抗多聚复合物，室温下孵育15 min，PBS冲洗3次，每次3 min。(7)DAB显色、苏木素复染及中性树脂封片。用已知阳性切片作阳性对照，以0.1 mol/L PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3结果判断光镜下组织细胞结构清晰，在细胞胞浆、胞膜中出现棕黄色颗粒，且染色明显高于背景，判读为阳性。根据病变区域阳性细胞所占百分比记分：随机选取5个高倍视野，分别计数100个细胞，阳性细胞计数26%～50%记为1分，51%～75%记为2分，>75%记为3分。根据病变区域的普通染色强度记分:1分：无着色或淡黄色；2分：棕黄色；3分：明显着色为棕褐色。综合细胞着色强度及阳性细胞数判定阳性强度和阳性率，取两项评分的乘积为最终综合评分，评分1～3分判定为阴性表达， 4～9分判定为阳性表达[4]。

1.4统计学方法采用SPSS 17.0统计学软件进行统计学分析，两样本间率的比较采用四格表资料的χ2检验或Fisher精确概率法，相关分析采用列联表资料的χ2检验,检验水准：α=0.05。

2结果

2.1E-选择素在大肠癌组织和癌旁正常肠黏膜组织的表达E-选择素阳性信号定位于细胞质和/或细胞膜，呈棕黄色颗粒，其在肿瘤细胞、血管内皮细胞均有表达(图1A、B)。E-选择素在肿瘤细胞中阳性表达率(38.8%，45/116)明显高于癌旁正常肠黏膜腺体中的阳性表达率(5.3%，3/57)，差异有统计学意义(χ2=21.4335，P<0.001)。

2.2大肠癌组织中肿瘤细胞E-选择素蛋白表达及其与大肠癌患者临床病理特征的关系应用单因素χ2检验分析，肿瘤细胞E-选择素阳性率在不同肿瘤直径、分化程度、浸润深度和有无淋巴结转移间差异无统计学意义，且E-选择素表达与患者性别、年龄无关(P>0.05)。见表1。

A:在中分化腺癌组织中肿瘤和血管呈阳性;B:在腺癌组织肿瘤细胞中呈阳性。 图1 E-选择素在大肠癌组织中的阳性表达(EnVision两步法:×200)

表1　E-选择素在大肠癌组织中肿瘤细胞的表达情况及其与临床病理特征的关系(n,%)

3讨论

E-选择素是黏附分子选择素家族成员之一，在炎症反应、血液凝固、免疫、识别、肿瘤的浸润和转移中起重要的作用[4]。静息状态下E-选择素仅在内皮细胞表达且含量甚微。内皮细胞受炎性因子、IL-1、肿瘤坏死因子、细菌脂多糖等刺激后，E-选择素作为诱导性黏附分子与其配体结合后介导细胞黏附和组织特异性招募，从而促进炎症的发展和肿瘤的转移[5～7]。Ye CL等[4]研究发现结肠癌原发灶及转移灶邻近的小血管内皮细胞表面表达E-选择素，为癌细胞分泌的刺激因子所诱导，表达程度与血管和癌灶的距离呈负相关，且发现E-选择素的表达在转移灶强于原发灶。一般认为，肿瘤细胞激活内皮细胞表达的E-选择素能特异性识别肿瘤细胞表面选择素配体并与之结合，从而实现肿瘤细胞与血管内皮细胞的识别和黏附，在肿瘤转移中发挥重要作用。Liu FR等[8]发现西咪替丁可以通过抑制E-选择素受体sLe-X，阻碍胃癌细胞与血管内皮细胞的黏附，从而抑制肿瘤的转移。Min TJ等[9]研究发现吗啡缓释剂和LPS合用可以稀释血管内皮细胞表达的E-选择素，从而抑制肿瘤的转移。

本研究发现，在大肠癌组织中，E-选择素不仅在血管内皮细胞表达，而且在肿瘤细胞也有表达，阳性表达率为38.8%(45/116)，高于癌旁正常肠黏膜组织腺上皮细胞E-选择素的阳性表达率(5.3%，3/57)，两者差异显著。提示大肠癌组织中肿瘤细胞表达E-选择素是不可忽视的分子特征。进一步分析发现肿瘤细胞表达E-选择素在不同患者的年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、浸润深度和有无淋巴道转移病例间的差异无显著性。张勇超[10]研究报道血清可溶性E-选择素水平与肿瘤部位及组织学分型也无明显相关。而安萍等人[11]检测结直肠癌患者可溶性E-选择素血清水平，发现E-选择素检测的特异性和敏感性高于CA19-9、CEA、CA724等传统的消化道肿瘤标志物。张梁等人[3]报道随着临床分期的上升，E-选择素水平显著升高，其水平与淋巴结转移和Dukes分期呈正相关。关于大肠癌组织中癌细胞表达的E-选择素确切的临床病理意义有待进一步探索研究。

综上所述，E-选择素是一种表达在内皮细胞表面的细胞黏附分子，但在大肠癌组织肿瘤细胞中有较明显的表达，其表达在不同患者年龄、性别、肿瘤直径大小、分化程度、浸润深度和有无淋巴结转移病例间差异无显著性。关于肿瘤组织中癌细胞表达的E-选择素对肿瘤和机体的影响、意义和作用机制需要进一步实验研究和探讨，为预测大肠癌肿瘤的生物学行为和防治提供新思路和方法。

参考文献

[1] 陈琼，刘志才，程兰平，等. 2003～2007年中国结直肠癌发病与死亡分析[J].中国肿瘤，2012，21(3): 179-182.

[2] 周萍，成玉霞， 张贵慧，等. E-选择素及其配体SLeX介导大肠癌早期黏附的观察[J]．中华肿瘤防治杂志，2010，17(16):1273-1276，1279．

[3] 张梁，黄涵，周娜，等.结直肠癌患者血清可溶性 E-选择素及细胞黏附分子-1水平及临床意义[J].医学检验，2010, 25(8):606-608.

[4] Ye CL, Kiriyama K, Mistuoka C, et al. Expression of E-selectin on endothelial cells of small veins in human colorectal cancer[J].Int J Cancer,1995,61(4):455-460.

[5] 蔡慧云，赵菲，安萍.胃癌患者血清可溶性 E选择素的表达及临床意义[J].实用医学杂志，2010，26(4):588-590.

[6] 王庆，张长乐．E-选择素与消化道肿瘤关系的研究进展[J/CD]．中华临床医师杂志：电子版，2012，6(24):8270-8272．

[7] 史梅英，赵志英.E-选择素与肿瘤关系的研究进展[J].内蒙古医学杂志，2011，43(8):945-947.

[8] Liu FR，Jiang CG，Li YS，et al．Cimetidine inhibits the adhesion of gastric cancer cells expressing high levels of sialyl Lewis x in human vascular endothelial cells by blocking E-selectin expression[J]. Int J Mol Med,2011,27(4):537-544．

[9] Min TJ, Park SH, Ji YH, et al．Morphine attenuates endothelial cell adhesion molecules induced by the supernatant of LPS-stimulated colon cancer cells[J].J Korean Med,2011,26(6):747-752．

[10] 张勇超.胃癌患者血清可溶性E-选择素检测的临床意义[J].中国肿瘤临床，2010，37(7): 402-404.

[11] 安萍，蔡惠芸，齐洪峰，等.结直肠癌患者血清可溶性E选择素表达及临床意义的研究[J].华北国防医药，2008，20(3):12-14.

(编辑：潘明志)

Expression of E-selectin protein in tumor cells of the colorectal cancer tissue and its clinical pathological significance

HUANGQin1,HUANGBingchen1,CHENJiaxing1,HUANGFang1,HUANGZhaoquan1,XIELiang1,LONGYandan1,LUOChunying2▲

(1.UndergraduatesofClinicalMedicineinGrade2011, 2.ClinicalMedicineCollege, 3.UndergraduatesofClinicalMedicineinGrade2012,YoujiangMedicalUniversityforNationalities;4.KeyLaboratoryofControlandPreventionofHighIncidenceofDiseaseinWesternGuangxiamongGuangxiUniversities,Baise533000,China)

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression of E-selectin protein in tumor cells of the colorectal cancer tissue and its clinical pathological significance. MethodsThe protein expressions of the E-selectin in 116 cases of colorectal cancer tissues and 57 cases of normal intestinal mucosa tissue adjacent to carcinoma were detected by immunohistochemistry. Meanwhile, differences of expression and clinical pathological significance of E-selectin in tumor cells of the colorectal cancer tissue and normal intestinal mucosa were analyzed and compared. Results The protein of the E-selectin expressed not only in vascular endothelial cells but also in colorectal cancer cells. The positive expression rates of E-selectin(38.8%, 45/116) in colorectal cancer cells was apparently higher than that(5.3%，3/57)in normal mucosa adjacent to carcinoma, so difference was statistically significant (χ2=21.4335,P<0.001). However, differences of E-selectin in intestinal colorectal cancer cells and different tumor diameter, differentiation degree, infiltration depth and with or without lymph node metastasis was not statistically significant(40.3% vs 37.0%, 37.0% vs 42.9%, 31.4% vs 44.6% and 32.7% vs 43.8%, P all >0.05).ConclusionTumor cells of colorectal cancer can express E-selectin, but this molecular characteristic is not significantly different among different colorectal cancer cases with different biological behavior.

【Key words】E-selectin; colorectal cancer; immunohistochemistry

(收稿日期：2016-01-06修回日期：2016-02-26)

中图分类号：R735.3+4

文献标识码：A

DOI:10.3969/j.issn.1003-1383.2016.01.002

作者简介：黄琴，女，本科在读。E-mail：969554744@qq.com▲通信作者：罗春英。E-mail:chun2005008@163.com

基金项目：广西自然科学基金资助项目(2012GXNSFBA053121)；广西壮族自治区级大学生创新创业训练计划立项项目(201410599017)；广西高校重点实验室开放课题(gxzdsysyy2015204)