CD147在先天性肾盂输尿管连接部梗阻组织中的表达及意义

齐灿，胡岩，马立新，郭付臣，赵学强，苑博，岳丹(河北省儿童医院，石家庄05000；北京铁路局石家庄铁路疾病控制所；天津医科大学)



CD147在先天性肾盂输尿管连接部梗阻组织中的表达及意义

齐灿1，胡岩1，马立新2，郭付臣1，赵学强1，苑博3，岳丹3(1河北省儿童医院，石家庄050030；2北京铁路局石家庄铁路疾病控制所；3天津医科大学)

摘要：目的探讨CD147在先天性肾盂输尿管连接部梗阻(UPJO)发病中的作用。方法选择50例单纯UPJO患儿手术切除的肾盂输尿管连接部狭窄处组织为观察组，因肾实质肿瘤或肾外伤术中切除的肾盂输尿管连接部正常组织12例为对照组。采用Western blot法检测两组CD147蛋白表达，采用qRT-PCR法检测两组CD147 mRNA表达。结果对照组、观察组CD147蛋白表达量分别为0.10±0.03、0.38±0.04，观察组CD147蛋白表达量高于对照组(P<0.05)。对照组、观察组CD147 mRNA相对表达量分别为1.00±0.18、1.63±0.12，观察组CD147 mRNA表达量高于对照组(P<0.01)。结论UPJO组织中CD147表达增高，CD147可能通过促进肾盂输尿管连接部组织纤维化参与UPJO的发病过程。

关键词：CD147基因；肾盂输尿管连接部梗阻；先天性肾积水；纤维化

先天性肾积水是小儿泌尿外科的常见疾病，病因较多，其中先天性肾盂输尿管连接部梗阻(UPJO)是常见原因[1,2]。研究发现，肾盂输尿管连接部纤维化在UPJO的发病中具有重要作用，肌细胞间纤维化增生可阻断肌细胞间的电活动传导，影响输尿管收缩舒张功能，导致梗阻[3]。CD147分子为细胞外基质金属蛋白酶诱导因子，广泛参与组织纤维化、炎症反应、肿瘤发生、免疫等过程[4,5]。研究发现，CD147在肝和肺组织纤维化中均发挥重要作用[4～7]。但CD147在UPJO发病中的作用尚不明确。我们检测了50例UPJO患儿UPJO组织中CD147蛋白及mRNA的表达，探讨CD147在UPJO发生发展中的作用机制。

1资料与方法

1.1临床资料选择2014年1～12月在我院行离断性肾盂成形术的50例单纯UPJO患儿的肾盂输尿管连接部狭窄处组织为观察组，其中男42例、女8例，年龄(3.02±0.21)岁， 均经影像学及术后病理检查确诊。患儿术前均未接受任何相关治疗。排除输尿管息肉、输尿管瓣膜等原因所致的肾积水及其他段狭窄所致的肾积水。选择因肾实质肿瘤或肾外伤术中切除的肾盂输尿管连接部正常组织12例为对照组，其中男9例、女3例，年龄(5.02±0.61)岁。两组性别、年龄差异无统计学意义。

1.2CD147蛋白表达检测采用Western blot法。将两组标本组织超声裂解，提取总蛋白。取等量蛋白样品经SDS-PAGE电泳后转印于PVDF膜上，用脱脂奶粉室温下脱色，摇床上摇动封闭1 h，加入CD147一抗过夜。次日TBST洗膜后加二抗。将ECL发光液中A液和B液各取0.5 mL混合，立即将膜覆盖在ECL发光液上，显影、定影。应用Kodak检测系统观察并照相。经Quantity One软件分析蛋白条带灰度值，从而得出蛋白相对表达量，进一步进行统计学分析，以α-tubulin作为内参照。

1.3CD147 mRNA表达检测采用qRT-PCR法。取两组标本，采用TRIzol一步法抽提总RNA，合成cDNA。采用TaKaRa公司的SYBR Premix Ex TaqTM试剂盒进行PCR反应，总反应体系为20 μL，引物设计采用Primer 6.0软件，由上海生工生物工程有限公司合成。CD147特异性引物序列：上游5′-ACTCCTCACCTGCTCCTTGA-3′，下游5′-GCCTCCA-TGTTCAGGTTCTC-3′；GAPDH内参照序列：上游5′-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3′，下游5′-TGGTGA-AGACGCCAGTGGA-3′。CD147 mRNA相对表达量采用2-ΔΔCT的方法计算。

2结果

2.1两组CD147蛋白表达比较对照组、观察组CD147蛋白表达量分别为0.10±0.03、0.38±0.04，观察组CD147蛋白表达量高于对照组(P<0.05)。见图1。

图1　两组CD147蛋白表达情况(Western blot法)

2.2两组CD147 mRNA表达比较对照组、观察组CD147 mRNA相对表达量分别为1.00±0.18、1.63±0.12，观察组CD147 mRNA相对表达量高于对照组(P<0.01)。

3讨论

UPJO是导致先天性肾积水最重要的原因之一，发病率为0.13%～0.16%，男性多于女性。在新生儿中，约2/3的UPJO病变发生于左侧，双侧病变的发病率为10%～40%[1,8]。目前对UPJO的发病机制尚不明确。研究发现，纤维结缔组织增生可引起相应输尿管组织的不正常收缩，从而导致狭窄性小儿肾积水[3,9]。UPJO部位肌细胞间大量胶原纤维沉积增生后，螺旋状排列的肌细胞可被纵行排列的纤维组织和肌束取代，使肌细胞互相分离，不能传递来自起搏细胞的电活动传导，影响了其正常收缩与舒张功能，导致输尿管梗阻，引起肾积水，随着积水逐渐加重，最终导致肾功能受损[3]。

CD147属于免疫超家族成员之一，基因定位于19p13，其编码区由269个氨基酸残端组成，广泛表达于多种组织与细胞中，参与组织纤维化、胚胎发育、生精过程、神经系统成熟、肿瘤侵袭、动脉粥样硬化等多种生理、病理过程[10,11]。研究发现，CD147可通过TGF-β/Smads信号通路调控肝及肺组织纤维化。张大伟等[6]研究发现，转染CD147基因使其在细胞中过表达后，肝纤维化相关分子转化生长因子β1(TGF-β1) mRNA表达升高。耿杰杰等[7]研究发现，在小鼠肺间质纤维化中，CD147能促进M1型巨噬细胞诱导Th1细胞分化，进而产生多种细胞因子如TGF-β1等，参与肺组织纤维化过程。近年研究发现，TGF-β1信号通路在UPJO发生发展中发挥重要作用，UPJO组织中TGF-β1表达高于正常患儿[12,13]。因此，CD147可能通过导致肾盂输尿管连接部组织纤维化参与UPJO的发病过程，其机制可能与TGF-β/Smads信号通路有关。本研究发现，观察组CD147蛋白及mRNA表达量均高于对照组，提示CD147在UPJO组织中表达增高，可能在UPJO的发病过程中发挥重要作用，其机制可能与其促进肾盂输尿管连接部组织纤维化有关。

综上所述，UPJO组织中CD147表达增高，CD147可能通过促进肾盂输尿管连接部组织纤维化参与UPJO的发病过程。

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(收稿日期：2015-09-24)

中图分类号：R726.9；R364.3

文献标志码：B

文章编号：1002-266X(2016)14-0068-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.14.025

通信作者：胡岩(E-mail: docteryanhu@126.com)

基金项目：河北省医学科学重点研究计划项目(20150554)。