干式生化膜片的制备及应用

＊董国华

（云南工艺美术学校 云南 650000）

干式生化膜片的制备及应用

＊董国华

（云南工艺美术学校 云南 650000）

本文提出了一种干式生化分析方法，可以针对血液中的葡萄糖、二氧化碳结合力以及尿酸含量进行快速检测，并就干式生化膜片的制备和应用情况进行了研究和讨论，希望能够为临床检验提供科学的方法。

干式；生化膜片；制备；应用

伴随着社会的持续发展，检验医学在许多领域中都得到了广泛应用，而作为一种非常重要的现场快速检测，干化学检测技术经过长期的发展和演变，已经逐渐成为临床检验中的常规性方法。不过从我国相关产业的发展情况分析，与国家发达国家存在着很大的而差距，除了简单的干化学分析仪和尿液试纸，其他的仪器设备和试剂载体都需要依赖进口，严重影响了技术水平的提高。对此，本文提出了一种有效的多层膜生化干片制备方法，可以针对多个指标进行快速检测，希望可以在一定程度上推动干化学技术的普及和应用。

1.实验部分

(1)仪器与试剂

在实验中，需要用到的仪器设备较多，这里对其进行整理后，在表1中列出。

表1 实验仪器列表（部分）

实验主要是针对二氧化碳结合力（CO2-CP）、葡萄糖（GLU）以及尿酸（UA）试剂干片的制备，相应的测定试剂盒生产厂商为长春汇力生物技术有限公司，同时还需要准备相应的膜材料，包括Grade17 Chr、Grade2、Grade40以及NLB-045、NLW-80等，最好准备好标准血清。

(2)实验方法

首先，需要从载水量、通透性以及流体扩散的速度，对膜材料进行合理选择，为了保证相关参数的真实性和准确性，需要进行多次测量，然后取平均值。其次，需要做好干片的制备，采用逐次滴加的方法，对于不同的干片类型，需要明确相应的参数值，不能一概而论。例如，在对CO2-CP干片进行制备时，应该将干燥温度控制在37℃，分五次加入40μL的试剂；在对UA干片进行制备时，需要将干燥温度控制在25℃，分八次加入40μL的试剂；在对GLU干片进行制备时，需要将干燥温度控制在30℃，分六次加入40μL的试剂。然后，将三种标准液依照各自的浓度梯度，逐一滴加到干片上，待其显色后，进行拍照保存，结合PS软件，可以获得标准色阶。最后，应该利用干式生化分析仪，对三种标准溶液与其各自干片反应后的反射光相对强度进测量分析，形成相应的函数曲线，为浓度的测定提供依据。

2.结果与讨论

(1)高分子膜材料的筛选

对准备好的各种高分子膜材料进行分析，从载水量、通透性以及流体扩散的速度三个方面，总结出其各自的性能。通常来讲，较高的载水量是基本前提，在这个前提下，通透性越好，流体扩散速度越快，则制备出的干片灵敏度越高，反应也越迅速。因此，结合不同高峰自膜材料的性能，选择层析滤纸作为反应层，以NLW-100作为扩散层，进行干片的制备。

(2)干色的标准色阶

结合PS软件处理，得到三种干片的标准色阶图（图1），图片清晰地展示出，制备出的三种不同的干片存在着比较明显的色差，而且显色比较均匀，基本上能够满足实际需求。

图1 干片标准色阶图

(3)干式生化分析法的标准曲线

采用本文提到的方法进行干片制备时，标准曲线的纵坐标设定为反射光的强度，横坐标则是待测指标的浓度，CO2-CP、GLU以及UA三种标准溶液的浓度依次为26、5．5、400，单位为μmol/L，在对相关指标进行检测时，选择的波长为580、490和580，单位为nm，将测量温度统一控制在37℃，检测时间依次为60s、60s、20s。最终得到了标准曲线如图2所示。

图2 干式生化分析法测定得到的标准曲线

在进行标准曲线的构建时，必须注意，检测样本应该选择标准品，结合检测结果，建立起反射光强度和标准品浓度之间的函数关系。在本文的试验中，对于干片的检测采用的是反射光度法，因此得到的标准曲线表现为对数曲线。

(4)方法学评价

①相对标准偏差和加标回收率：选择阴性血清作为样品，利用全自动生化分析仪，开展相应的加标回收实验，可以得到加标回收率以及相对标准偏差的数值，如表2所示。结合干式生化分析法，最终得到的CO2-CP的加标回收率为101%-105%，RSD为3．67%-4．99%，GLU的加标回收率为102%-104%，RSD为3．8%-4．96%，UA的加标回收率为101%-104%，RSD为3．14%-4．61%，对照相关标准和要求，判断该方法具有良好的可行性。

表2 加标回收率与相对标准偏差

②稳定性：利用全自动生化分析仪，测定血清作为样本，在第1天，第15天和第30天分别检测一次，通过对检测结果的对比分析，针对制备出的干式生化膜片的稳定性进行分析，以30d为期限。结合相应的检测分析，发现三种干片（CO2-CP、GLU以及UA）的浓度分别为25．37mmol/ L、4．78mmol/L、0．325mmol/L，其变异系数分别为4．8%、3．7%和4．0%，小于5%的允许值，表明采用本文提出的方法制作的干片可以在一个月内保持稳定。

③重复性：重复性主要包括了批次内的重复性和批次间的重复性，结合本文提到的方法，从结果的可靠性和准确性考虑，分别针对高值和低值的标准血清进行测定，重复20次取平均值，然后以此为依据，对相关参数进行分析和计算，最终计算结果如表3所示。结合表中的数据可以看出，测量得到的批次内和批次间的变异系数都不超过5%，同样处于允许误差范围内。

表3 重复性实验结果

④方法学比较：为了验证干化学分析法的适用性和有效性，对干化学法得到的数据结果与全自动生化分析仪检测到的相关数据进行对比分析，从结果的准确性考虑，每一个样品都进行五次检测，取平均值。在得到各种参数数值后，于标准曲线中，将对应不同项目的反射光相对强度输入进去，能够对样品的浓度数值进行明确，以函数方程计算，最终得到浓度均值。与之相比，如果是利用全自动生化分析仪，则在对样品的三相指标进行测定时，选择的波长分别为：CO2-CP，546nm；GLU，510nm；UA，505nm，将反应温度统一为37℃，加样量依次为5μL、3μL和8μL。对比数据如图3所示。

图3 干化学法与临床检验法测定结果对比

干化学法本身属于一种半定量的检测方法，在实际应用中，其本身具备操作简单，效率高等优点，不过其检测结果并不能保证较高的准确性，与大型的精密设备相比仍然略有不足。结合上述分析可以看出，虽然检测结果的精密度相对较差，干化学法检测的结果大体上与全自动生化分析仪得到了结果是一致的，其相关系数值达到了0．99以上，表明在实际应用中可以起到良好的效果。

3.结论

总而言之，与传统方法相比，干式生化分析方法具有操作简单，样品需求少，检测速度快等特点，在战场、医院以及一些边远的山区具有良好的实用效果，稍加培训就可以自主操作，不需要专业的医护人员。就目前而言，本文提到的方法与常规方法具有较好的相关性，应用前景广阔，而且伴随着技术的逐渐成熟，可以进一步对成本进行控制。在实验环节，选择了技术相对成熟的检测试剂盒，由于试剂盒本身在生产环节已经经过了抗干扰处理，因此基本上不会与检测项目之外的物质发生反应，保证了实验结果的可靠性。

董国华（1965～），男，云南工艺美术学校，研究方向：应用化学。

(责任编辑牛玉娟）

Preparation and Application of Dry-type Biochemical Membrane

Dong Guohua
（Yunnan School of Fine Arts,Yunnan , 650000）

This paper puts forward one dry-type of biochemical analysis method, which can take rapid detection of the glucose in the blood, carbon dioxide binding force and uric acid content, besides, it takes research and discussion of the preparation and application situation of drytype of biochemical membrane, hoping to provide scientific methods for clinical examination.

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