非洲猪瘟实验室诊断方法研究进展

苏娇 吕春 聂翠凤/内蒙古巴彦淖尔市杭锦后旗疫控中心



非洲猪瘟实验室诊断方法研究进展

苏娇 吕春 聂翠凤/内蒙古巴彦淖尔市杭锦后旗疫控中心

非洲猪瘟是各主要养猪国家最担心发生的猪疫病之一，因为它可以引起免疫抑制，容易造成很高的死亡率，可达100%，目前应对该病尚无有效的治疗方法或疫苗。据报道，与我国相邻的俄罗斯等国家不断有该疫情的暴发，该疫情已影响到俄罗斯国土面积的三分之一以上，这给我国动物疫病防控工作带来了很大的威胁。由此可见，有效的实验室诊断方法在非洲猪瘟防控中显得尤为重要。本文就非洲猪瘟的实验室诊断方法研究进展进行了综述。

一、非洲猪瘟抗体检测——酶联免疫吸附试验

酶联免疫吸附试验应用于血清抗体的检测，具有操作方便，特异性较好，灵敏度高，适用于大批量样品的检测。国外Perez Filgueira DM等人采取了不同地区的猪血清样品进行试验，该试验表明间接酶联免疫吸附试验敏感性高，能够检测到非洲猪瘟病毒早期感染的样品，可以用于早期的特异性抗体检测。Vidal MI等人建立了固相酶联免疫吸附试验，其检测血清样品的敏感性达0.05 mg/ml。Hutchings GH等人建立了间接夹心酶联免疫吸附

试验，试验表明其敏感性高于单抗酶联免疫吸附试验。我们国内也有人以VP73纯化蛋白为包被抗原，建立了间接酶联免疫吸附试验来检测非洲猪瘟病毒血清抗体，与商品化的阻断酶联免疫吸附试验相比，其具有较好的敏感性和特异性。目前主要是间接酶联免疫吸附试验和竞争或阻断酶联免疫吸附试验来检测非洲猪瘟病毒血清抗体，西班牙某公司已经研制出阻断酶联免疫吸附试验试剂盒，并且已经商品化，也是世界动物卫生组织指定的参考试剂盒，该试剂盒的敏感性和特异性均较好，已被很多国家使用。

二、非洲猪瘟病原学检测

（一）PCR方法

PCR已经广泛的应用于疾病诊断和科学研究中，其具有简单快速、灵敏度高和特异性强的优点。PCR技术无需病毒分离培养，可以直接检测到组织或体液中的病毒，也可以同时检测同一病原不同株或不同病原的检测，为疫病检测提供了有效的技术支撑。

国外Agǜero M等人设计了p72蛋白编码区的引物，建立了检测非洲猪瘟的PCR诊断方法，该试验方法可用于非洲猪瘟的快速诊断，也可用于监控非洲猪瘟病毒的发生，以便及时采取有效的应急措施，同时因为PCR诊断方法快速、有效，被世界动物卫生组织列为非洲猪瘟病毒的参照诊断方法。Basto AP等人设计了两对引物，建立了检测非洲猪瘟的巢式PCR方法，该诊断方法与病毒分离和常规PCR相比，此方法更加敏感，可用于非洲猪瘟病毒的流行地区。实时荧光定量PCR克服了传统PCR扩增产物后处理和易污染的缺点，它是利用荧光信号，对整个扩增过程进行实时监测的技术。King DP等人以非洲猪瘟病毒p72为目的基因，设计了相应的引物和探针序列，建立了实时荧光定量PCR检测非洲猪瘟的诊断方法，该方法更加简便、快速和灵敏。也有相关人士表示，使用实时荧光定量PCR检测感染猪，耗时不足2 h。国内的陈静静等人建立了双重荧光定量PCR，可同时检测古典猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒，只需一步即可完成，可作为鉴别两种病毒的诊断方法。

（二）环介导等温扩增技术

环介导等温扩增技术操作简便，反应时间短，成本低廉，检测成本远低于荧光定量PCR，无需特殊仪器设备，整个实验只需水浴锅或金属恒温仪，适用于基层检疫部门，具有更高的实用推广价值。James HE等人使用环介导等温扩增法检测非洲猪瘟病毒，结果表明该方法与实时荧光定量PCR检测组织和血液样品的结果一致。杨吉飞等人建立了环介导恒温扩增快速检测非洲猪瘟病毒，试验结果表明所建立的诊断方法可有效地用于非洲猪瘟的快速诊断和防控。

三、小结

目前，实验室诊断是监测和控制非洲猪瘟暴发行之有效的办法，因为当前尚无有效的药物治疗或疫苗进行防控。酶联免疫吸附试验适用于检测感染猪的低毒力或中等毒力的非洲猪瘟病毒抗体，可用作大规模血清样品的筛选，同时也适用于根除计划。PCR诊断技术需具备PCR仪或实时荧光定量PCR仪，可用于非洲猪瘟的疫情监测情况。而环介导等温扩增技术检测非洲猪瘟有待于进一步完善，为临床快速诊断提供一定的技术支撑。

参考文献（略）