酶联免疫法做抗体检测时应注意的事项

酶联免疫法做抗体检测时应注意的事项

近几年来，随着养殖业的不断发展，畜禽抗体水平的检测越来越受到广大养殖户的重视。作为兽医实验室工作人员，笔者结合自己的工作实践，现将酶联免疫法做抗体检测时应注意的事项总结如下：

1　试验前应注意的事项

1.1试验前应先检查试剂盒是否过期，试剂盒内的试剂是否因为瓶盖松动、破裂等因素造成污染或变质。如有以上现象则本试剂盒不能用。

1.2由于试剂盒是在2℃～8℃下保存的，所以整套试剂在使用前应平衡至室温。室温为22℃～25℃。

1.3检查样本血清是否保存完好，是否溶血或污染。若因保存不好发生变质或样本血清本身就因为采集不当而发生溶血或污染则可能影响检测结果，检测意义就不大了。

1.4做试验前应先对样本血清进行编号和标记，使其与反应板上的编号一一对应。一般一个反应板一次最多可做90份样本血清，这样就可能涉及到多个养殖户，所以我们要对样本进行编号和标记，使其与养殖户的畜禽一一对应起来，以便对试验结果进行分析。

2　试验过程中应注意的事项

2.1做试验时一定要设定阳性对照孔、阴性对照孔和空白对照孔，以便确定试验是否有效。

2.2每次加样时要更换滴头，以免造成交叉污染。特别是在加样本血清时，一定要加一个样本血清换一次滴头。

2.3每次加样所用的时间应尽量缩短，以避免因加样时间过长而出现的前后加样反应时间不一致导致结果出现误差。

2.4在温育反应时，温育30 min误差应控制在±2 min以内，温育10 min误差应控制在±1 min以内，避免因反应时间缩短或延长而造成整体显色降低或升高。

2.5每次洗板时，不管是手洗还是洗板机洗，洗完后都要把反应板拍干。

2.6每次试验温育反应所用的封板膜不能重复使用，试剂瓶盖也不能交叉使用，以免造成交叉污染，从而影响试验数据的准确性。

2.7试验中所用的终止液属于强腐蚀性物质，一定要做好个人防护，避免其掉到身体或衣物上。

2.8在使用酶标仪前，一定要先把酶标仪的开关打开，检查系统是否能够正常运行。并且在检测数据前要预热30 min。

3　试验完成后应注意的事项

3.1试验完成后，应先根据试剂盒说明书上提供的指标，对应试验数据判定试验是否有效。（使用单波长测定时，各孔OD值应先减去空白对照孔OD值，再进行结果分析。）如未达到指标，则试验无效需要重做。

3.2试验完成后，试剂开封如未用完，反应板条应和干燥剂一起放入自封袋内密封2℃～8℃保存，其它液体组份使用后瓶盖拧紧置2℃～8℃保存。开封的试剂盒应在1周内用完。

3.3试验结束后，在确定本次试验有效的情况下，根据前的面编号对各个养殖户畜禽的抗体水平进行分析。对分析结果和原始数据做好记录并保存，以备以后查询。

3.4不同物种的试剂盒不能用于其它物种样品的检测，不同批号的试剂盒中的组份不能混用。

3.5试验结束后，所有样本、洗弃液和各种废弃物都应按传染物做好无害化处理。

054200河北省内丘县农业局魏永杰