柱后衍生法测定食用油中黄曲霉毒素B1含量的研究

◎赵丽燕

（浙江华才检测技术有限公司，浙江 诸暨 311800）

柱后衍生法测定食用油中黄曲霉毒素B1含量的研究

◎赵丽燕

（浙江华才检测技术有限公司，浙江 诸暨 311800）

通过使用柱后衍生系统，建立柱后碘衍生法测定食用油中黄曲霉毒素B1含量的方法。结果表明：黄曲霉毒素B1在0.5～55.0 ng/mL浓度范围内具有良好的线性相关性，相关系数为0.999；对黄曲霉毒素B1浓度0.4、2.0、20.0 ng/mL的标准品进行6次平行分析，重复性结果良好，回收率范围为85.8%～106.2%，方法检出限为0.050 μg/kg。

食用油；黄曲霉毒素B1；柱后衍生；荧光检测

黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物，具有极强的毒性和致癌性，可引发动物患肝癌、肾癌、胃癌等。其中以黄曲霉毒素B1最为多见，其毒性和致癌性也最强。目前，生产食用油的不合格企业多为小规模的加工厂，均采用半精炼工艺，生产量较小，主要以散装形式零售供应附近居民。造成不合格的原因，主要是这些企业没有严格按规定进行原料进货把关，食品安全主体责任不落实。花生在生长、贮存过程中由于天气湿热发霉，黄曲霉菌生长繁殖产生黄曲霉毒素。一些企业对购进的花生原料未能严格筛选和检测，部分霉变花生被用于食用油生产，导致黄曲霉毒素超标。由于黄曲霉毒素在水溶液中会发生荧光猝灭，色谱中B1和G1两种异构体荧光强度很弱，需进行衍生化。而柱后衍生法具有灵敏度高的特性，适合食用油中黄曲霉毒素B1含量的日常检测。

1 试验部分

1.1 试剂与仪器

1.1.1 试剂

甲醇;乙腈;苯;纯水;黄曲霉毒素B1储备液1.02 mg／L;免疫亲和柱。

1.1.2 仪器

岛津LC-20A液相配荧光检测器;柱后衍生系统。

1.2 分析条件

流动相:A-水，B-甲醇，55∶45;流速:1.0 mL／min。

色谱柱:C-18（4.6 mm×250.0 mm，5 μm）;柱温:40 ℃。

衍生溶液:0.05%碘溶液（取0.5 g碘单质，加入100 mL甲醇，用纯水稀释至1 000 mL）;衍生流速:0.3 mL／min;衍生温度:70 ℃;检测波长:Ex＝350 nm，Em＝450 nm;进样体积:10 μL。

1.3 样品处理

1.3.1 黄曲霉毒素B1标准溶液的配制

取不同体积的黄曲霉毒素B1储备液，用乙腈和苯（v／v，2∶98）稀释，配制成浓度为0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8、25.6 ng／mL和51.2 ng／mL的标准系列溶液，

储存于棕色小瓶中，于4 ℃冰箱中存放。

1.3.2 试样的制备

参考国家标准GB／T 18979-2003《食品中黄曲霉毒素的测定-免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法》中植物油脂样品前处理净化方法进行制备。

2 结果与讨论

2.1 黄曲霉毒素B1标准谱图及标准曲线黄曲霉毒素B1标样色谱图如图1所示。由图2可以看出在0.4～51.2 ng／mL浓度范围内，黄曲霉毒素B1线性相关性良好，相关系数为0.999，线性方程为Y＝（22 249.9）X+（-2 335.31）。

2.2 基质加标实验

按照1.3.2所述步骤处理花生油，检测某品牌花生油中的黄曲霉毒素B1含量。图3为某品牌花生油样品空白色谱图，可以看出该样品并未检出黄曲霉毒素B1;图4为空白样品加标2.000 μg／kg的色谱图，基质并未干扰到目标峰，目标物具有较好的信号响应。实际样品加标不同浓度标样计算样品回收率结果见表1。由3倍信噪比和10倍信噪比分别计算方法检出限和定量限，检出限为0.045 μg／kg，定量限为0.150 μg／kg。

表1 实际样品加标不同浓度回收率结果(n＝3)

图1 黄曲霉毒素B1标样1.6 ng/mL的色谱图

图2 黄曲霉毒素B1的校准曲线

图3 空白样品色谱图

图4 空白样品加标2.000 μg/kg色谱图

2.3 实际样品分析

将该方法应用于实际食用油中黄曲霉毒素B1检测，检出1份食用油中含有黄曲霉毒素B1，含量为32.000 μg／kg（见图5）。

3 结论

用柱后碘衍生测定食用油中黄曲霉毒素B1含量测定的方法，黄曲霉毒素B1在0.5～55.0 ng／mL浓度范围内具有良好的线性相关性，相关系数为0.999，方法检出限为0.050 μg／kg，定量限为0.150 μg／kg。实际样品加标浓度0.200 μg／kg和2.000 μg／kg，回收率范围为85.0%～110.0%。该方法具有灵敏度高和重复性好等优点。

图5 实际样品检测色谱图结果

[1]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.GB／T23212-2008，牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的测定液相色谱-荧光检测法[S].北京:中国标准出版社，2008.

[2]中华人民共和国卫生部，中国国家标准化管理委员会.GB／T5009.23-2006，食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定[S].北京:中国标准出版社，2006.

Determination of Aflatoxin B1in Edible Oil by Post Column Derivatization

Zhao Liyan
（Zhejiang Huacai Detection Technology Co., Ltd., Zhejiang Zhuji 311800, China）

Determination of aflatoxin B1in edible oil by post column derivatization with post column derivatization,. The results showed that the aflatoxin B1has good linear correlation in the concentration range of 0.5～55 ng/mL, the correlation coefficient was 0.999; The results of six parallel analysis of the concentration of 0.4, 2, 20 ng/mL of a fl atoxin B1standard was good, recovery rate was 85.8% to 106.2%. The detection limit was 0.050 μ g/kg.

Edible oil; A flatoxin B1; Post column derivatization; Fluorescence detection

TS207.3