姜状三七水提物的止血镇痛作用和急性毒性反应研究

吴其国，符德欢，毛小明，胡叶青，高 丽*

(1.安庆医药高等专科学校，安徽安庆246052；2.云南省药物研究所，云南昆明650111)



姜状三七水提物的止血镇痛作用和急性毒性反应研究

吴其国1，符德欢2，毛小明1，胡叶青1，高 丽2*

(1.安庆医药高等专科学校，安徽安庆246052；2.云南省药物研究所，云南昆明650111)

摘要[目的]观察姜状三七的止血镇痛作用及急性毒性反应，为姜状三七的临床应用与开发提供参考。[方法]用水回流提取姜状三七，经浓缩干燥后得干浸膏粉，用前配制；镇痛作用采用小鼠醋酸扭体法，止血作用采用小鼠断尾法和毛细管法；并用其最大给药浓度的药液进行小鼠灌胃给药，连续观察14 d，记录小鼠毒性反应情况。[结果]与对照组比较，姜状三七中(2.58 g/kg)、低(0.64 g/kg)剂量组明显减少小鼠的扭体次数，具有良好的镇痛作用；姜状三七高(5.16 g/kg)、中(2.58 g/kg)、低(0.64 g/kg)剂量组均可明显缩短小鼠的出血时间和凝血时间，具有良好的止血作用；对小鼠灌服最大给药浓度(90 g/kg)，相当于50 kg成人用量的1 000倍，未出现毒性反应。[结论]姜状三七有镇痛止血作用，且其毒性小，用药范围广。

关键词姜状三七；止血；镇痛；急性毒性

The Analgesic Hemostatic Action and Acute Toxicity Reaction of Water Extracts fromPanaxzingiberensis

WU Qi-guo1,FU De-huan2, MAO Xiao-ming1,GAO li2*et al(1. Anqing Medical College, Anqing, Anhui 246052; 2. Yunnan Institute of Material Medica, Kunming, Yunnan 650111)

Abstract[Objective] To observe the analgesic hemostatic action and acute toxicity reaction of water extracts fromPanaxzingiberensis, and to provide references for the clinical application and development ofP.zingiberensis. [Method] Water reflux extraction ofP.zingiberensiswas carried out. Dry extracts powder was obtained after concentration and drying. Analgesic effect was researched by acetic acid writhing method; hemostasis was researched by tail cutting method and capillary tube method. Mouse intragastric administration was carried out by the maximum concentration. After continuous observation for 14 d, toxic reaction of mice was recorded. [Result] Compared with control group, writhing times of mice reduced significantly in middle (2.58 g/kg) and low (0.64 g/kg) dosage groups ofP.zingiberensis, which had relatively good analgesic effects. Bleeding time and blood coagulation time significantly shortened in high (5.16 g/kg), middle (2.58 g/kg) and low (0.64 g/kg) dosage groups ofP.zingiberensis, which had relatively good hemostasis effects. The maximum administration concentration (90 g/kg) was equal to 1000 times of the dosage of 50 kg human adult. And there was no toxic reaction. [Conclusion]P.zingiberensishas analgesic hemostatic effect, with slight toxicity and wide application range.

Key wordsPanaxzingiberensis; Hemostasis; Analgesia; Acute toxicity

姜状三七为五加科人参属植物姜状三七PanaxzingiberensisC.Y.Wu et K.W.Feng的根及根茎，味苦，性温，具有散瘀、止血、定痛之功，用于跌打损伤、内伤出血、产后血晕、恶露不下、虚伤、咳嗽、贫血等[1]，为云南特有药用植物[2]。据文献报道，其主要含有三萜皂苷，含量较高[3]。姜状三七资源多以栽培为主，其生长年限及产量均较三七好，在民间有将其替代三七使用。目前在姜状三七药理方面的研究尚属空白，为了更好地开发利用该资源，笔者对其止血镇痛作用药效和急性毒性反应进行初步系统的研究，为姜状三七药效学研究和临床安全用药提供理论基础和科学依据。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1供试品。试验药材采于金平，为栽培品。经中国科学院昆明植物研究所陶德定副研究员鉴定为五加科人参属植物姜状三七PanaxzingiberensisC.Y.Wu et K.W.Feng的根及根茎，植物标本收藏于云南省药物研究所标本室。称取药材350 g，依次分别加8倍量、8倍量和5倍量水经回流提取1 h、1 h和30 min，合并提取液，经浓缩后，放入真空干燥箱中干燥，得干浸膏粉151 g。使用前配制到所需浓度。

1.1.2对照药。阿司匹林，拜耳医药保健有限公司，国药准字j20080078，批号20110810；安络血(肾上腺色腙片)，江苏亚邦爱普森药业有限公司，批号20100918；云南白药，云南白药集团股份有限公司，批号20090524。

1.1.3试验动物。 SPF级昆明种小鼠，雌雄各半，体重(20±2)g，由昆明医学院实验动物中心提供，合格证号SCXK(滇)2005008。饲料批号SCXK(滇)2005009。

1.2试验方法

1.2.1镇痛试验。取昆明种小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，每组10只。按表1中的剂量灌胃给药，每天1次，连续给药3 d，于末次给药30 min后，腹腔注射新配制的0.6%醋酸溶液，0.2 mL/只。观察并记录30 min内小鼠的扭体次数[4]，按下列公式计算给药组的抑制率：抑制率=(对照组扭体次数-给药组扭体次数)/对照组扭体次数×100%。

1.2.2止血试验。

1.2.2.1 对小鼠凝血时间的影响。取小鼠70只，雌雄各半，称重、标记，随机分为6组，分组情况和给药剂量见表2。空白对照组给予等体积0.9%氯化钠溶液，其他各组给予相应的药物。每天灌胃给药1次，连续7 d。末次给药30 min后，按毛细玻管法进行凝血时间测定，即用毛细玻管插入小鼠内眦眼球后静脉丛取血，以达5 cm血柱为止，每隔30 s折断毛细玻管一小截，检查有无血凝丝出现；记录从毛细玻管采血到出现血凝丝的时间，即为凝血时间[5]。

1.2.2.2对小鼠出血时间的影响。取小鼠50只，雌雄各半，分组及给药剂量见表3。每天灌胃给药1次，连续7 d。末次给药后60 min，采用断尾法进行出血时间测定，即将小鼠固定，露鼠尾于外，用利剪将小鼠尾尖3 mm处横断，待血液自行溢出开始计时，每隔30 s用滤纸吸去血滴一次，直至血流自然停止(滤纸吸时无血)为止，即为出血时间[6]。

1.2.3急性毒性试验。姜状三七在民间大多以煎汤内服，或入丸散，或浸酒，还有研末敷作外用[1]。所以有必要对其口服给药的安全性进行评价。在该试验中，采用姜状三七小鼠经口给药急性毒性试验对其急性毒性进行考察。

1.2.3.1预试验。 取合格昆明种小鼠16只，雌雄各半，按体重与性别随即分为4组，每组4只。试验前禁食不禁水12 h。供试药以生理盐水按等比例稀释得到，系数为0.8，最大给药量以生药给药量(90 g/kg)开始给药，共得供试药的4个剂量组。5组小鼠分别经口给药，给药体积为0.04 mL/g。给药后即刻观察，持续40 min。以后每天上午、下午各观察一次，连续14 d，观察动物饮食、外观、行为、分泌物、排泄物、死亡情况及中毒反应症状及其起始时间、严重程度、持续时间、是否可逆及恢复时间、体重变化等。观察可见，给药组所有小鼠均活动减少，4 h后恢复正常；待第2天进食正常，活动也正常。因在大剂量下，无动物死亡，难以测出半数致死量LD50，故进行最大耐受量的测定。

1.2.3.2最大耐受量的测定。取合格昆明种小鼠40只，雌雄各半，按体重和性别随即分为试验组和空白对照组，试验前禁食不禁水12 h，试验组给药剂量以生药量计(90 g/kg)，给药体积为0.04 mL/g。空白对照组给予等体积的生理盐水。给药后连续观察14 d，每天上午、下午各观察一次。观察动物状态并记录动物的体重变化。第14天处死，解剖小鼠，肉眼观察其主要脏器的外观[7]。计算给药后小鼠的最大耐受量倍数，小鼠的最大耐受量倍数=每只小鼠的耐受药量/小鼠的平均体重(20 g)×成人的平均体重(50 000 g)/成人每日用量(倍)[8]。

2结果与分析

2.1镇痛试验表1显示，与模型组相比，姜状三七低、中剂量组的扭体次数具有显著性差异，而姜状三七高剂量组无显著性差异，各组呈现出不同的抑制效应，说明姜状三七中、低剂量时具有良好的镇痛作用。姜状三七对小鼠的镇痛作用随着剂量的加大而减弱，在该试验中高、中、低剂量组小鼠的扭体次数基本相同，相互之间差别不是很大，因此高剂量组虽然无显著性差异，但也有较好的镇痛作用。

表1　姜状三七提取物对小鼠镇痛作用的影响

注：*、**分别表示与模型组比较P<0.05、P<0.01。

Note：Compared with model group，*and**indicatedP<0.05 andP<0.01，respectively.

2.2止血试验由表2~3可见，姜状三七高、中、低剂量组的凝血时间均具有极显著性差异(P<0.01)，即姜状三七高、中、低剂量组均可明显缩短小鼠的凝血时间；姜状三七中、低剂量组的出血时间均具有显著性差异(P<0.05)，姜状三七高剂量组具有极显著性差异(P<0.05)，即姜状三七高、中、低剂量组均可明显缩短小鼠的出血时间，说明姜状三七高、中、低剂量组均有止血作用。

2.3急性毒性试验姜状三七水提液的最大给药量为90 g/kg，按成人(50 kg)的用量为3～6 g[1]，取中间值4.5 g计算，姜状三七的最大给药量为成人用量的1 000倍。由表4可见，给药2周后，姜状三七对小鼠的体重无影响；小鼠灌药第2天后行为活动无异常，小鼠未见活动减少、蜷缩、松毛等现象，鼻、眼、口腔未见分泌物，小鼠组织器官经解剖可见心、肝、脾、肺、肾等组织的颜色正常，组织器官及腹腔均未见异常和肿物。试验结果表明，该药材的临床用药安全范围大。

表2　姜状三七对小鼠凝血时间的影响

注：*、**分别表示与生理盐水组比较P<0.05、P<0.01。

Note：Compared with normal saline group， * and ** indicatedP<0.05 andP<0.01，respectively.

表3　姜状三七对小鼠出血时间的影响

注：*、**分别表示与生理盐水组比较P<0.05、P<0.01。

Note：Compared with normal saline group， * and ** indicatedP<0.05 andP<0.01，respectively.

表4姜状三七小鼠经口给药急性毒性试验动物体重变化(n=20)

Table 4Changes of mice body weight in acute toxicity test after administered orally

给药天数Administrationdays∥d体重Bodyweight∥g试验组Testgroup对照组Controlgroup020.33±2.0121.46±2.17221.23±2.3822.48±2.17422.35±3.2123.82±3.20623.59±3.5124.64±3.47823.74±4.1123.97±3.821025.32±4.4924.74±4.381226.58±5.0825.94±3.511426.40±5.1526.09±4.24

3小结与讨论

该试验通过对姜状三七水提物的止血镇痛作用研究，结果表明，姜状三七水提物可以明显减少小鼠的扭体次数、缩短小鼠的出血时间和凝血时间，具有明显的镇痛止血作用；其急性毒性反应研究表明，姜状三七水提物的毒性小、用药范围广。

由于三七的镇痛作用主要是与其中的三七总皂苷(PNS)有关[9]，所以推测姜状三七的镇痛作用很有可能也与其中含有的三七皂苷类成分有关，具体是何种成分影响还有待药理学的进一步研究。在血液系统中，凝血时间主要与各种凝血因子的含量和活性有关，而出血时间与毛细血管功能、组织因子、血小板数量和功能等因素有关。作用于机体止血过程的任何一个环节，均有利于血液凝固而起到止血效果[10]。因此，究竟是什么原因引起的止血效果还有待进一步研究。通过对姜状三七水提物小鼠灌胃给药的急性毒性试验，为临床用药的安全性提供试验依据。

药用植物资源是我国一项重要的稀缺资源，对药用植物资源的开发利用也是近年来炙手可热的话题，但由于人们对药用植物资源的认识不够、技术有限等问题，使得药用植物资源浪费破坏比较严重，尤其是如三七这一类的名贵中药材资源。姜状三七在民间以三七同等功效应用，是云南特有药用植物资源，目前对其研究较少，该试验通过对其药效及毒理研究，为姜状三七资源的开发利用提供参考。

参考文献

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[2] 邱斌，吴其国，李学芳，等.云南特有药用植物姜状三七的生药学研究[J].云南中医学院学报，2014，37(2)：34.

[3] 吴征镒.新华本草纲要：第三册[M].上海：上海科学技术出版社，1990：229.

[4] 颜昌云，周萍，吴建新，等.吉祥戒毒液的镇痛作用和急性毒性反应研究[J].中国药物滥用防治杂志，2010，16(4)：210.

[5] 彭智聪，张少文，刘勇，等.卷柏炒炭后对止血作用的影响[J].中国中药杂志，2000，25(2)：89.

[6] 陶勇，梁颖.不同粒度三七止血凝血作用比较研究[J].亚太传统医药，2010，6(5)：36-37.

[7] 中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南(药学、药理学、毒理学)[M].中华人民共和国卫生部药政管理局，1994：203-204.

[8] 陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1993：112-119.

[9] CICERO A F，VITALE G，SAVION G，et al.Panaxnotoginseng(Burk)effects fibrinogen and lipid plasma lever in rats fed on a high-fat diet[J].Phytother Res，2003，17(2)：174-178.

[10] 陈如泉.血证证治与现代研究[M].武汉：湖北科学技术出版社，1990：373.

收稿日期2015-12-28

作者简介吴其国(1986-)，男，安徽安庆人，助教，硕士，从事中药新剂型方面的研究。*通讯作者，正高级工程师，硕士生导师，从事中药材鉴定与中药资源开发方面的研究。

基金项目云南省应用基础研究计划重点项目(2011FB133)。

中图分类号S 567.23+6

文献标识码A

文章编号0517-6611(2016)03-138-03