猪病诊断和防治过程中PCR技术的应用

杨显荣 吉林省德惠市肉品管理办公室 130300

猪病诊断和防治过程中PCR技术的应用

杨显荣 吉林省德惠市肉品管理办公室 130300

近些年，猪病发生的几率越来越高，且病症也越来越严重，这使得养猪业的发展也受到极大的影响。在猪病的诊断与防治中，最重要的就是精确快速地找到导致猪病发生的病原菌，这样才能根据病原菌的种类，采取有针对性的措施来加以应对。故开发一种能够迅速对猪病进行诊断的技术就变得十分重要，而应用PCR技术则能很好地满足这一要求。

1　PCR技术概况

在猪病诊断与防治中，PCR技术主要有三个优点：一是操作简便，二是具有高速度的扩增效果，三是具有较高的特异性。目的基因在PCR技术下，能够在非常短的时间内被快速扩增，从而达到检测微量基因的目的。同时在PCR技术中，特异性会受到靶序列两头的引物—寡核苷酸所影响。由于PCR技术的不断发展，目前PCR技术在传统基础上又不断衍生出了几类新型的技术，例如PCR多重技术、PCR荧光定量技术，以及RT-PCR技术，这些技术在检测动物疫病方面具有非常重要的意义和作用。

2　猪病诊断和防治过程中PCR技术的应用

（1）检测单一病毒—猪圆环病毒。实验人员按照基因储存库中猪圆环病毒的基因序列ORF2来对扩增引物进行设计，并利用该病毒的临床分离基因来作为模板基因，然后对反应条件进行适当的筛选，从而形成一种能够对猪圆环病度2型进行检测的PCR方法。结果表明，用这一方法对猪圆环病毒2型扩增基因以后，得到目的基因的片段长度为559bp，而在相等条件下，对其他能够引起类似猪病的感染病毒进行检测发现，其实验的结果均呈阴性，说明此种检测方法具有非常好的特异性。同时通过实验发现，经检测的30个临床病料，总共81份，其结果具有非常高的准确率，这说明PCR检测方法具有较好的可行性，因此能够为猪场养殖提供准确的防疫依据。

（2）检测单一病毒—猪瘟病毒。在众多猪病中，猪瘟具有非常严重的危害，而且会给养猪业的经济效益造成非常大的损失。目前，尽管国内相关部门已经采取了多种措施来对猪瘟进行预防和控制，但是结果都很不理想。而随着PCR技术的应用，人们根据设计引物的不同，建立了RT-PCR技术来对猪瘟进行检测，结果表明，其能够对猪瘟病毒的核酸序列进行扩增，而且这一扩增具有明显的特异性，同时检测结果的可靠性也非常高，因此能够对猪瘟进行快速诊断和防治。

（3）检测单一病毒—呼吸与繁殖综合症。此类猪病主要发生于母猪，进而传染给仔猪。这种病症不仅会对母猪的繁殖造成影响，同时还会对仔猪的存活率及免疫功能造成较大的影响。因此可以运用快速诊断的结果来对该病进行有效的防治。实验人员利用聚合酶中的链式反应来对这一病症进行了检测，而且经过不断研究和试验，最终建立了该病症的检测方法PCR法。使用该种检测方法的注意事项为：首先，若RNA是从陈旧的样品中进行提取的，则容易发生降解反应，而在电泳实验中，新鲜的样品则会有三条明显的RNA，而且外形也相对完整。其次是在RNA在提取以后，进行cDNA反转录后，在－20℃时经历1周，就会出现降解反应。

（4）检测混合病毒。多重PCR技术主要指的是将两种以上的引物加到一个反应系统里面，与一般的PCR技术进行对比发现，这一技术能够对两种或者两种以上的猪病病菌进行同时检测，并且还能获得非常准确的检测结果，同时反应的速度非常快，而且非常灵敏，因此具有非常好的应用效果。在对猪病进行检测和防治的过程中，经常会遇到两种或者两种以上病毒混合感染的情况，而且长期以来大量的兽医都只是利用以往的经验来进行诊断和治疗，因此极易错过最佳的治疗时机。而应用PCR技术进行猪病的诊断和防治就变得非常有价值。

3　总结

综上所述，目前针对猪病中容易引起病症的病毒及病原体等，实验人员设计了5种PCR技术检测方法，主要是应对猪瘟、呼吸与繁殖综合症及脑炎等，因为这几种病症常常混合在一起对猪体进行感染。采用多重PCR能够产生的扩增产物主要有三种，即263bp、380bp和508bp，而且检测的灵敏性比传统的检测技术要高出数倍，这说明多重PCR技术在进行猪病诊断和防治过程中具有非常高的灵敏性和特异性。