胸腺肽α1对维持性血液透析患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞及IL-2水平的影响

孟洁，覃学勇

(南方医科大学附属柳州医院肾内科，广西 柳州 545007)

胸腺肽α1对维持性血液透析患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞及IL-2水平的影响

孟洁，覃学勇

(南方医科大学附属柳州医院肾内科，广西 柳州 545007)

目的 探讨使用胸腺肽α1对糖尿病终末期肾病维持性血液透析(血透)患者外周血T淋巴细胞亚群、自然杀伤(NK)细胞及白细胞介素-2(IL-2)水平的影响。方法选取2011年7月至2015年6月在我院血透中心行规律维持性血透患者71例，使用随机数表法完全随机化分为A组36例和B组35例，A组加用胸腺肽α1皮下注射，每次1.6 mg，每周2次，共用4周；B组不使用胸腺肽α1；C组40例为健康体检者。应用流式细胞术分别检测试验第一天和一个月时A、B两组外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞水平，同时ELISA法检测其外周血血清IL-2水平。C组各指标则均为第一天检测。结果糖尿病终末期肾病维持性血透患者细胞免疫功能及IL-2水平较正常人显著降低，两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；A组患者治疗后的外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值及NK细胞明显高于治疗前[CD3+(%)：(51.51±9.22)vs(72.51±10.22)；CD4+(%)：(26.85±4.21)vs(37.15±6.21)；CD4+/CD8+：(0.70±0.11)vs (1.63±0.23)；NK细胞(%)：(26.56±6.82)vs(36.21±5.32)]，而CD8+水平明显低于治疗前[(38.24±7.54)%vs(24.26±5.51)%，外周血血清IL-2水平明显升高[(15.83±1.82)pg/mL vs(46.23±1.16)pg/mL]，差异均有统计学意义（P＜0.05）；B组患者治疗前后的T淋巴细胞亚群、NK细胞及血清IL-2水平比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论胸腺肽α1可提高糖尿病终末期肾病维持性血透患者细胞免疫功能，可能对其感染性疾病的防治有一定临床意义。

胸腺肽α1；2型糖尿病；血液透析；免疫功能

糖尿病终末期肾病主要治疗手段为维持性血透，该类患者由于尿毒症毒素蓄积、营养不良等原因导致的免疫功能紊乱严重影响了其生存率和生存质量[1-2]。维持性血透患者医院感染率达到了惊人的41.15%，明显高于普通人群[3]。于文慧等[4]研究发现血液中的尿毒症毒素积蓄对T淋巴细胞免疫功能的抑制可能引起了维持性血透患者机体免疫功能紊乱。胸腺肽α1可明显提高人体免疫力，目前已广泛应用于肿瘤的治疗[5]。本研究观察使用胸腺肽α1对糖尿病终末期肾病维持性血透患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞及IL-2水平的影响，以期对临床起到一定的借鉴意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2011年7月至2015年6月在我院血透中心行维持性血透患者71例，病因均为2型糖尿病肾病所致终末期肾功能衰竭(血肌酐≥532 μmol/L)，按随机数表法分为A组和B组，A组36例，男性23例，女性13例，平均年龄(58±13.6)岁；B组35例，男性20例，女性15例，平均年龄(60±14.9)岁；另选择同期体检健康志愿者40例为对照组，其中男性21例，女性19例，平均年龄(59±12.3)岁。A、B两组患者均接受维持性血透治疗6个月以上。入选标准：研究期间无严重细菌、病毒感染，血压控制稳定，既往无血液病、恶性肿瘤、肝病、精神疾病及严重心脑血管疾病史，无手术、放疗、化疗病史、未使用其他免疫抑制剂，且无输血史。三组受检者的年龄及性别构成比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法 B组规律维持性血透，常规口服钙离子拮抗剂等降压药物控制血压及注射重组人促红细胞生成素，补钙、降磷等治疗；A组在上述治疗基础上加用胸腺肽α1(注射用胸腺法新，成都地奥九泓制药厂，规格1.6 mg/支，皮下注射，每周2次，共用4周)。两组血透患者均透析3次/每周，每次约4 h。

1.2.2 外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞测定 分别在入组后第一天胸腺肽α1治疗前、治疗结束后1 d早晨空腹采集全血5 mL，2 000 r/min高速离心5 min后收集上清约1.0 mL，各取0.5 mL分为两管，流式细胞术检测其T淋巴细胞亚群及NK细胞水平。

1.2.3 ELISA法检测外周血血清IL-2水平 取上述各对象留取的1管血清0.5 mL，检测过程严格按照说明书操作。其中IL-2试剂盒(ELISA)(RapidBio Lab公司，美国)、Multiskan MK3酶标仪(Thermo Electron Corporation公司，美国)。

1.3 统计学方法 应用SPSS19.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，两组间比较采用t检验，两组数据间的相关关系用双变量相关分析方法，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞及血清IL-2水平 结果提示糖尿病终末期肾病维持性血透患者细胞免疫功能及IL-2水平较正常人明显降低(见表1)。A组治疗后外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值、NK细胞及血清IL-2水平均较治疗前显著升高，而CD8+则较治疗前显著降低(均P＜0.05)，B组两次检测各指标差异均无统计学意义(P＞0.05)(见表2)。各观察对象均未出现明显胸腺肽α1药物相关不良反应。

2.2 T淋巴细胞亚群、NK细胞与血清IL-2水平的相关性 对A组各指标进行相关分析显示，T淋巴细胞亚群中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值、NK细胞与血清IL-2水平分别呈高度正相关(CD3+与血清IL-2水平r=0.67，P=0.00；CD4+与血清IL-2水平r=0.58，P= 0.00；CD4+/CD8+比值与血清IL-2水平r=0.59，P=0.00；NK细胞与血清IL-2水平r=0.68，P=0.00)，而CD8+与血清IL-2水平呈高度负相关(r=-0.57，P=0.00)。

表1 维持性血透组和对照组外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞及血清IL-2水平比较(±s)

表1 维持性血透组和对照组外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞及血清IL-2水平比较(±s)

组别维持性血透组(n=71)对照组(n=40) t值P值CD3+(%) 50.51±10.21 71.20±9.12 0.20 0.01 CD4+(%) 25.65±4.27 41.11±5.81 0.16 0.00 CD8+(%) 36.20±6.84 22.37±6.80 2.57 0.01 CD4+/CD8+0.63±0.10 1.34±0.25 0.41 0.01 NK细胞(%) 26.28±6.52 34.70±6.91 0.43 0.02 IL-2(pg/mL) 16.03±2.85 26.23±1.16 0.22 0.01

表2 胸腺肽α1对血透患者T淋巴细胞亚群、NK细胞及血清IL-2水平的影响(%，±s)

表2 胸腺肽α1对血透患者T淋巴细胞亚群、NK细胞及血清IL-2水平的影响(%，±s)

组别A组(n=36) B组(n=35)时间第一天一个月t值P值第一天一个月t值P值CD3+(%) 51.51±9.22 72.51±10.22 0.14 0.00 51.47±7.42 56.51±8.12 0.26 0.15 CD4+(%) 26.85±4.21 37.15±6.21 0.19 0.01 25.81±5.22 29.35±6.21 0.15 0.18 CD8+(%) 38.24±7.54 24.26±5.51 3.24 0.00 38.51±6.14 36.25±7.31 1.63 0.21 CD4+/CD8+0.70±0.11 1.63±0.23 0.25 0.00 0.69±0.08 1.01±0.11 0.31 0.26 NK细胞(%) 26.56±6.82 36.21±5.32 2.91 0.01 26.21±5.81 29.83±4.43 2.76 0.35 IL-2(pg/mL) 15.83±1.82 46.23±1.16 0.11 0.00 16.03±1.52 15.93±1.26 1.21 0.23

3 讨 论

目前糖尿病终末期肾病是维持性血透的主要原因，解晓琴等[6]研究发现糖尿病肾病病人血液中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值水平下降，CD8+水平升高，由此认为其细胞免疫功能低下，临床上应采取措施提高该类患者免疫功能。而维持性血透患者受多种因素影响也存在免疫缺陷[7]。感染已成为仅次于心血管并发症的、我国血透患者第二位死亡原因[8]，因此防治感染对延长此类患者生存率及改善预后至关重要，细胞免疫治疗对其意义重大。

T淋巴细胞及其亚群(CD3+、CD4+及CD8+)能够直接反映机体细胞免疫的状态。CD4+/CD8+比值正常情况下介于1.4～2.0之间，当其比值＞2.0或＜1.4时则表明细胞免疫功能紊乱。有研究认为慢性肾衰竭患者CD4+/CD8+比值升高对其免疫功能是有益的[9]。而IL-2能够诱导细胞毒性T淋巴细胞、NK细胞分化，促进NK细胞分泌γ-干扰素等细胞因子，并可增强细胞毒性T淋巴细胞穿孔素基因的表达，提高机体特异性免疫应答能力[10]。本研究发现糖尿病终末期肾病长期维持性血透患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值、NK细胞及血清IL-2水平明显降低，CD8+水平升高，提示其机体细胞免疫功能低下，与文献报道一致[6，11]。

作为一种广泛使用的免疫调节剂，胸腺肽α1能诱导CD3+、CD4+T淋巴细胞分化，增加T淋巴细胞分泌干扰素、IL-2和IL-3及上调T细胞淋巴因子受体的表达，也能促进前NK细胞的分化成熟、增强其杀伤作用，从而增强机体免疫功能[12]。本研究发现糖尿病终末期肾病维持性血透患者经胸腺肽α1治疗后外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值及NK细胞水平显著升高，而CD8+水平则显著降低，同时IL-2水平明显升高，且IL-2水平与CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值及NK细胞呈明显正相关，与CD8+水平呈高度负相关，表明胸腺肽α1提高了糖尿病终末期肾病维持性血透患者机体细胞免疫功能，增强了其机体抗感染能力。

本研究结果显示，通过胸腺肽α1免疫调节，糖尿病终末期肾病维持性血透患者机体细胞免疫功能得到显著改善，鉴于免疫功能对于该类患者临床意义重大，临床上可考虑适当应用胸腺肽α1，以提高此类患者机体细胞免疫功能、增强其抗感染能力，从而改善生存率、提高生活质量。

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Impact of thymosin α1on cellular immune function and serum IL-2 of patients with maintained hemodialysis.

MENG Jie,QIN Xue-yong.Department of Nephrology,the Affiliated Liuzhou Hospital of Southern Medical University, Liuzhou 545007,Guangxi,CHINA

ObjectiveTo observe the impact of thymosin α1on cellular immune function and serum IL-2 of patients with maintained hemodialysis.MethodsA total of 71 cases of patients with end-stage renal disease,who underwent maintained hemodialysis in our hospital from July 2011 to June 2015,were randomly divided into group A(36 cases with 1 cycle of treatment of thymosin α1)and group B(35 cases without treatment of thymosin α1),and 40 cases of healthy persons were chosen as the group C.Group A appiled thymosin α1(subcutaneous injection,1.6 mg each time,2 times a week,a total of 4 weeks),while group B didn't.Peripheral blood T lymphocyte subsets and NK cells were detected by flow cytometry at the first day and after one month of treatment.Serum IL-2 was identified by ELISA(enzyme linked immune-sorbent assay).ResultsThe cellular immune function and IL-2 level in patients with maintained hemodialysis were significantly lower than the healthy people(P＜0.05).In group A,Peripheral blood CD3+,CD4+,CD4+/CD8+ratio,NK cells and serum IL-2 of after treatment were significantly higher than before treatment[CD3+(%): (51.51±9.22)vs(72.51±10.22),CD4+(%):(26.85±4.21)vs(37.15±6.21),CD4+/CD8+ratio:(0.70±0.11)vs(1.63±0.23), NK cells(%):(26.56±6.82)vs(36.21±5.32),IL-2(pg/mL):(15.83±1.82)vs(46.23±1.16),P＜0.05],while CD8+of after treatment was significantly lower than before treatment[(38.24±7.54)%vs(24.26±5.51)%,P＜0.05].There were no significant changes in T lymphocyte subsets,NK cells and serum IL-2 in group B(P＞0.05).ConclusionThymosin α1can improve cellular immune function and serum IL-2 level of patients with maintained hemodialysis.So it may has enhance the ability of patient's resistance to infectious diseases.

Thymosin α1;Type 2 diabetes mellitus;Hematodialysis;Immune function

R459.5

A

1003—6350（2016）10—1599—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.10.017

2015-12-07)

孟洁。E-mail：allllyy@163.com