贵州矮马和西南马3种病毒性疫病的血清学分析

2016-03-01邓显佑王嘉福冉雪琴田松军魏小红

贵州农业科学 2016年3期

薛艳，邓显佑，王嘉福，冉雪琴，田松军，魏小红

(1.贵州大学农业生物工程研究院，贵州贵阳 550025； 2.贵州大学生命科学学院，贵州贵阳 550025； 3.贵州大学动物科学学院，贵州贵阳 550025； 4.贵州省紫云县畜牧兽医局，贵州紫云 550800)

薛艳1，2，邓显佑1，2，王嘉福1，2，冉雪琴3*，田松军4，魏小红4

为探明2012—2013年贵州省紫云县马匹大量死亡的病因，为其科学防治提供参考，采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)方法对当地养殖的贵州矮马、西南马进行马传染性贫血病毒(Equine Infectious Anemia virus，EIAV)、马动脉炎病毒(Equine arteritis virus，EAV)和马疱疹病毒I型(Equine herpesvirus type-1，EHV-1)3种病毒的抗体水平检测，并与伊犁马进行比较。结果表明：3个马群中均未检测到EIAV抗体，EHV-1抗体阳性率达98.15%～100%；与伊犁马相比，贵州矮马和西南马EAV抗体的阳性率较高，分别为48.15%和19.35%，并与2个马群的血液理化指标存在一定相关性。紫云县贵州矮马和西南马存在较高比例的EAV感染，马驹和虚弱马匹感染EAV后死亡率较高，因此推测EAV可能是导致马匹死亡的原因之一。

贵州矮马；西南马；伊犁马；马传染性贫血病毒；马动脉炎病毒；马疱疹病毒I型

马传染性贫血病(Equine Infectious Anemia，EIA)简称马传贫，由马传染性贫血病毒(Equine Infectious Anemia virus，EIAV)引起。EIAV为单股正链RNA病毒，隶属于逆转录病毒科、慢病毒亚属[1]。该病急性暴发时常引起大量的马匹死亡[2]，主要临床症状表现为反复发烧、血小板减少、贫血、黄疸、心脏衰弱、体重持续下降和躯体末端水肿等[3]。马属动物感染EIAV将终生携带病毒，并具有传染性。EIAV主要通过吸血昆虫(特别是蚊子)或药物注射传播[4]。EIA的发生曾给世界养马业造成巨大的经济损失，现在仍然是马属动物疾病的重点检查项目。世界动物卫生组织(Office International Des Epizooties，OIE)把EIA列为B类动物疫病，我国列其为二类动物疫病[5]。

马疱疹病毒I型(Equine herpes virus type-1，EHV-1)普遍存在于全球马属动物中，是马属动物呼吸道疾病(马鼻肺炎)、生殖系统疾病(流产、新生儿疾病)和神经系统疾病(equine herpesvirus myeloencephalopathy，EHM)3大综合征的主要病原体[6]。EHV-1主要经呼吸道分泌物或被污染的用具传播。大部分马匹感染EHV-1后先进入潜伏期，病毒在体内被激活后，可传染给其他马属动物[7]。临床症状主要表现为头部和上呼吸道黏膜卡他性炎症、白细胞减少、后肢共济失调、妊娠母马易流产；新生马驹发生肺炎或脑脊髓炎[8]。《国际动物卫生法典》把马鼻肺炎列入法定报告疾病名录[9]。我国农业部把EHV-1定为二类动物传染病，国家质量监督检验检疫局列其为出入境马属动物必检的疫病之一[8]。

马病毒性动脉炎(Equine viral arteritis，EVA)又称马传染性动脉炎，是危害马属动物的重大疾病之一。其病原体为马动脉炎病毒(Equine arteritis virus，EAV)，属于套式病毒目(Nidoviales)、动脉炎病毒科(Arteriviridae)、动脉炎病毒属(Arterivirus)，为线性单股正链RNA病毒[10]。56℃ 30 min可被灭活，4℃可存活1个月，-20℃可存活数年[11]。EVA临床症状成年马表现为流感样症状且四肢水肿、孕马流产，小马驹出现间质性肺炎。主要通过呼吸系统和生殖系统传染，流产病马的胎盘、胎液、胎儿也会成为传染源，长期携带EAV的种马可通过精子传播[12]。世界动物卫生组织把EVA列为B类传染病，我国农业部列其为禁止入境的二类动物传染病，并作为马属动物出入境的法定检疫项目[11]。

贵州矮马主要分布于贵州省黔南、黔西南等偏远山区，是经过长期人工培育和自然近交形成的珍贵遗传资源，是目前全球仅存的少数天然矮马品种之一[13]。当前贵州矮马的种群数量较少，而且缺乏计划免疫。2012—2013年，紫云县贵州矮马保种场出现马匹死亡，造成了较大的经济损失，病死马的临床症状以呼吸道疾病为主，部分患马出现四肢水肿，病因不明[14]。为此，笔者等采用ELISA方法对可能的病原(EIAV、EAV、EHV-1)进行血浆抗体水平检测，并与采自新疆的伊犁马样品进行对比研究，以探明此次疫病的病因，为其科学防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 血液样品采集

108份贵州矮马和31份西南马血液样品采集于贵州省安顺市紫云县火花乡，37份伊犁马的血液样品采集于新疆伊犁哈萨克自治州昭苏县种马场，所有采样马匹均未注射相关疫苗。静脉无菌采血，3 000 r/min离心30 min，收集血浆，-80℃保存备用。

1.2 主要试剂

马传染性贫血病毒ELISA抗体检测试剂盒(EQUINE INFECTIOUS ANEMIA VIRUS ANTIBODY TEST KIT，ELISA)购于美国VMRD公司，产品批号为290-1；马动脉炎病毒间接ELISA抗体检测试剂盒(INGEZIM ARTERITIS 2.0 14.EA2.K.1)和马疱疹病毒I型间接ELISA抗体检测试剂盒(INGEZIM RINONEUMONITIS 14.HVE.K1)均购自西班牙INGENASA公司，产品编号分别为140714和050524。

1.3 EIAV、EHV-1和EAV的抗体检测及理化指标测定

EIAV、EHV-1和EAV抗体的检测参照试剂盒说明书进行，每个样品重复3次。血液理化指标的测定由贵阳市某医院完成。采用SPSS v11.7中的相关分析方法对抗体水平与血液理化指标进行关联分析。

2 结果与分析

从表1看出，EIAV抗体所有样品均为阴性；贵州矮马、西南马和伊犁马的EHV-1抗体阳性率分别为98.15%、100%和100%；贵州矮马、西南马和伊犁马的EAV抗体阳性率分别为48.15%、19.35%和10.81%。

表1 3个马群EIAV、EHV-1和EAV的感染情况

表2 EAV抗体水平与贵州矮马和西南马血液理化指标之间的相关系数

Table 2 Correlation coefficient between antibody level against EAV and blood physiological-biochemical indexes of Guizhou pony and Southwest horse

生理指标Physiologicalindexes相关系数Correlationcoefficient生化指标Biochemicalindexes相关系数Correlationcoefficient白细胞数WBC-0．09直接胆红素DBIL0．39红细胞数RBC-0．30谷丙转氨酶ALT0．27血红蛋白量HGB-0．31谷草转氨酶AST-0．26血小板数PLT-0．52乳酸脱氢酶LDH-0．08淋巴细胞数LYM-0．41肌酸激酶CK0．10中间细胞数MON0．42α⁃羟丁酸脱氢酶α⁃HBDH-0．01中性细胞数GRA0．26γ⁃谷氨酰转移酶γ⁃GT-0．08总胆红素TBIL0．39

注：相关系数绝对值在0～0.2为不相关，在0.2～0.5为弱相关，-为负相关。

Note：There is no correlation, weak correlation and negative correlation when the absolute value of the correlation coefficient is 0～0.2, 0.2～0.5 and respectively.

由于贵州矮马和西南马均未检测到EIAV抗体阳性样品，且EHV-1抗体水平接近100%，变化很小，故只对EAV抗体水平与样品血液理化指标进行关联分析。EAV抗体水平与血液的中性细胞数、中间细胞数、总胆红素、直接胆红素和谷丙转氨酶呈弱正相关，与血液红细胞数、血红蛋白量、淋巴细胞数和谷草转氨酶呈弱负相关，与血小板数呈强负相关，与其余指标不相关(表2)。

3 结论与讨论

3.1 马传染性贫血病

测定结果表明，贵州矮马和西南马的EIAV抗体水平均为阴性，与安徽[15]、新疆[16]等地的检测结果相同，也与2012年农业部公布的数据[17]相符，表明贵州当地没有马传染性贫血病毒感染。

3.2 马疱疹病毒I型

贵州矮马、西南马和伊犁马的EHV-1抗体阳性率分别为98.15%、100%和100%，几乎全部马匹都受到EHV-1感染。马鼻肺炎最早发现于美国，之后在40多个国家或地区都有发现，普遍发生于世界各地，阳性率一般都在30%以上，最高达90%[18]，与本测定结果相似。EHV-1是马鼻肺炎的主要病原体之一，首先感染并破坏呼吸道上皮细胞，引发马鼻肺炎症状。本病传播蔓延迅速，通常可在3～4个月内使80%～100%的马匹感染[16]。2011—2012年新疆地区6个县市的1 484匹马中，最低感染率为1.99%，最高感染率为52.69%[19]；52匹新西兰马中EHV-1抗体阳性率为21.15%[18]。克罗地亚地区曾发生马鼻肺炎疫情，发病率达100%，但死亡率仅为6.67%[20]。表明，EHV-1的感染率虽然较高，但是死亡率很低，而且感染后的马匹痊愈后对EHV-1有一定的免疫力[21]。贵州矮马、西南马和伊犁马的EHV-1抗体水平较高，可能与样品采于春季有关，不是紫云地区贵州矮马和西南马大量死亡的原因之一。

3.3 马病毒性动脉炎病

测定结果表明，贵州矮马的EAV抗体阳性率最高，为48.15%；西南马次之，为19.35%；伊犁马最低，为10.81%。西南马EAV抗体的阳性率与华南地区赛马(26%)[22]较为接近，贵州矮马和西南马的EAV阳性率均明显高于东北和西北地区役用马的动脉炎阳性率(8%左右)[22]。贵州矮马、西南马和伊犁马的阳性率均明显低于2013年美国和加拿大地区(99.8%)[23]。EAV抗体水平与血液的中性细胞数、中间细胞数、总胆红素、直接胆红素和谷丙转氨酶呈弱正相关，与血液红细胞数、血红蛋白、血小板数、淋巴细胞数和谷草转氨酶呈负相关。因为，病毒或细菌感染常导致中性细胞数、中间细胞数增加[24]。贵州矮马和西南马血液中淋巴细胞数量下降，可能与病毒侵害宿主的淋巴细胞有关，血小板数量减少可能与机体的免疫损伤有关。另外，贵州矮马、西南马2个马群中病毒抗体呈阳性样品的红细胞数目和血红蛋白浓度下降，提示病毒对红细胞有损伤作用，溶血后过多的血红蛋白在肝脏中降解，引起血浆中直接胆红素增加，谷丙转氨酶含量增加则提示感染后马匹的肝功能也受到了一定影响[21]。这些血液学变化和肝功能受损无疑为其他病原菌的入侵提供了更多的可能性。

贵州矮马和西南马群中EAV的感染率较高，造成机体的抵抗力下降，可能是继发性感染的原因之一。另外，马驹和虚弱马匹感染EAV后的死亡率较高[25-26]。由此推测，马病毒性动脉炎可能是紫云地区贵州矮马和西南马大量死亡的原因之一。

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(责任编辑：冯卫)

Serological Analysis of Three Viral Epidemic Diseases in Guizhou Pony and Southwest Horse

XUE Yan1，2， DENG Xianyou1，2， WANG Jiafu1，2， RAN Xueqin3*， TIAN Songjun4， WEI Xiaohong4

(1.InstituteofAgriculturalBioengineering,GuizhouUniversity,Guiyang,Guizhou550025; 2.CollegeofLifeSciences,GuizhouUniversity,Guiyang,Guizhou550025; 3.CollegeofAnimalScience,GuizhouUniversity,Guiyang,Guizhou550025; 4.ZiyunBureauofanimalhusbandryandVeterinary,Ziyun,Guizhou550800,China)

The level of antibody against EIAV, EAV and EHV-1 in populations of Guizhou pony, Southwest horse and Yili Horse was detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to explore the pathogenesis causing mass mortality of horses in Ziyun County, Guizhou during 2012～2013 and to provide a reference for scientific control. Results: EIAV antibody is not detected in three horse populations and the positive rate of EHV-1 antibody of three horse populations is up to 98.15%～100%. The positive rate of EAV antibody in Guizhou Pony and Southwest Horse is 48.15% and 19.35% respectively, higher than Yili Horse. There is a certain correlation between EAV antibody level and blood physiological-biochemical indexes in Guizhou Pony and Southwest Horse. The high proportion of EAV infection in Guizhou Pony and Southwest Horse in Ziyun County results in high mortality of colts and weak horses infected with EAV. In conclusion, EAV may be one of reasons to cause horse death.

Guizhou pony; Southwest horse; Yili horse; equine infectious anemia virus (EIAV); equine arteritis virus (EAV); equine herpes virus-1 (EHV-1)

2015-10-08； 2016-01-21修回

贵州省农业攻关项目“贵州矮马养殖关键技术研究与集成示范”[黔科合NY字(2012)3009]，“贵州矮马品种资源保存与选育”[黔科合NY字(2009)3068]；贵州省农业动植物育种专项“紫云矮马的选育”(黔农育专字2009-021号)；贵州省科技创新人才团队建设专项“贵州省动物遗传育种与生物技术科技创新人才团队”(黔科合人才团队2009-4006)；贵州大学“本科教学工程”项目“基础兽医学教学团队”(BKJX2012007)

薛艳(1987-)，女，在读硕士，研究方向：应用微生物学。E-mail：992909131@qq.com

*通讯作者：冉雪琴(1967-)，女，教授，从事动物生理与分子生物学研究。E-mail：as.xqran@gzu.edu.cn

1001-3601(2016)03-0125-0109-04

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