痰热清对产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的体外抑制作用研究



痰热清对产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的体外抑制作用研究

宋远瑛

(湖北中医药大学临床医学院 中医内科,湖北 武汉430065)

呼吸道感染是临床常见疾病，致病菌包括肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌(Kpn)等[1]。近年来，关于Kpn导致的院内感染的报道越来越多，β-内酰胺酶类广谱抗生素在临床的广泛应用使Kpn的耐药也在增加，会使Kpn产生ESBLs，限制了青霉素及头孢类抗生素的临床应用，使病情迁延不愈，并使患者的治疗成本增加，因而寻找抗产ESBLs肺炎克雷伯菌的有效方案，临床意义重大。而随着对祖国医学的研究逐步深入，在临床治疗上有许多优势等待发现。痰热清为中药制剂，有清热解毒之效，使患者的机体免疫力得到提高，在呼吸道感染的治疗上有着很好的效果[2，3]。本次研究中，根据CLSI(美国临床与实验室标准化机构)介绍使用的肉汤稀释法，在体外对产ESBLs肺炎克雷伯菌行抑菌试验，观察单用痰热清及特治星(哌拉西林/他唑巴坦)联合痰热清两者的抑制效果，予以报道。

1资料和方法

1.1一般资料

送检标本来源于在2014年1月-2014年8月期间，取自我院患者送至检验科进行检验的痰标本。分离出产ESBLS肺炎克雷伯菌株，质控菌购买自上海复祥生物公司，为Kpn ATCC 700603；特治星注射液购买自美国惠氏制药有限公司(批准文号 H20030315，规格：哌拉西林4 000 mg与三唑巴坦500 mg)；痰热清购买自上海凯宝药业公司(国药准字Z20030054，规格：每支装10 ml)；BPX-162型电热恒温培养箱(上海博讯实业公司)；生物安全柜(上海中庸检验设备公司)；Vitek 2 Compact 全自动微生物分析系统(上海欢奥科技公司生产)。

1.2方法

1.2.1分离和鉴定产ESBLs肺炎克雷伯菌严格遵守《全国临床检验规程》的要求及标准对痰标本进行培养、分离。应用Vitek 2 Compact 全自动微生物分析系统鉴定和筛选菌株，确认时根据CLSI(美国临床与实验室标准化机构)指导的纸片扩散法。

1.2.2试验分组分为5个处理组，A组为痰热清浓度对倍稀释；B组为痰热清浓度递减；C组为特治星用药组；D组为痰热清与特治星联合应用组，各自分为10小组，使用对倍稀释法，间隔8 h后应用特治星；E组为痰热清与特治星联合应用组，各自分为10小组，使用浓度递减法，间隔8 h后应用特治星。

1.2.3试验方法上述各组均在35℃温箱培养，在24 h后测定各组痰热清及特治星的MIC值(最小抑菌浓度)。不同处理组痰热清浓度与特治星浓度，详见表1、表2。

2结果

2.1各处理组的试验表现

在A组中，第1管未生长出细菌，第2-10管表现均浑浊；B组中，第1-4管未生长出细菌，第5-10管表现均浑浊；C组中，第1-6管未生长出细菌，第7-10管表现均浑浊；D组中，1小组中第1-2管未生长出细菌，第3-10管表现均浑浊,2-10小组中第1管均未生长出细菌，后9管表现浑浊；E组中，1小组中第1-6管未生长出细菌，第7-10管表现均浑浊,2-4小组中第1-5管未生长出细菌，第6-10管表现均浑浊,5小组中第1-3管未生长出细菌，第4-10管表现均浑浊，6-10组中第1-2管未生长出细菌，第3-10管表现均浑浊。

表1　不同处理组痰热清的浓度情况(μl/ml)

表2　不同处理组特治星的浓度情况(μg/ml)

2.2抑制试验结果

对产ESBLs肺炎克雷伯杆菌的最小抑菌浓度上，痰热清为750 μl/ml，特治星为28.125 μg/ml，在应用痰热清8 h后，痰热清浓度达到450 μl/ml以上，特治星的用药剂量可以下降至5.625以下，详见图1。

3讨论

痰热清为中药制剂，内含金银花、熊胆粉、连翘、黄芪等中药材。因其具有镇静止咳、解除痉挛、解毒清热、平喘祛痰之效，并具有调节免疫力及抵抗致病菌入侵的作用，广泛应用于小儿支气管肺炎、老年COPD等常见呼吸内科疾病的治疗[4]。对于鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌等引起的肺炎，在给予常规西药抗生素治疗的基础上，联合应用痰热清能够起到更好的疗效，缩短患者的住院时间[5,6]。该方中金银花具有清血解毒、宣肺解表之效，山羊角、熊胆粉具有明目平肝、解热抗菌之效，连翘能够起到散结疏风，解毒清热的效果，黄芪能够凉血解毒、散热除湿。现代药理表明，痰热清的抗菌、解热和抗炎效果显著，对多种呼吸道病毒株培养细胞病变，能产生较好的抑制作用[7,8]；对多种细菌菌株成长有抑制作用，减少耐药菌的生成[9]。在对于耐药菌的治疗上，痰热清具有许多药理作用等待一线研究人员发现。

图1　联合应用痰热清与特治星后的抑菌曲线效果图

在本次研究中，对产ESBLs肺炎克雷伯杆菌的最小抑菌弄浓度上，痰热清为750 μl/ml，特治星为28.125 μg/ml，在应用痰热清8 h后，痰热清浓度达到450 μl/ml以上，特治星的用药剂量可以下降至5.625以下。并且我们发现，与痰热清与特治星同时应用比较，在两者间隔8 h先后给药可以显著使用药量减少，并且显著的升高抑菌疗效。据曹小利等[10]报道，痰热清能够对细菌间传播R质粒有效的进行阻断，减少因R质粒所引起的细菌耐药。痰热清还能够对细菌的外排泵起到抑制作用，减少耐药基因的扩增及表达，并能够影响耐药菌的代谢，另外痰热清对机体免疫力的调节，可以显著减少耐药菌的生成和繁殖[11]。因而对ESBLs肺炎克雷伯杆菌具有极佳的抑菌效果。

参考文献：

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[9]裴学勇,刘晶晶.肺炎克雷伯杆菌所致社区获得性肺炎死亡1例[J].中国危重病急救医学,2012,24(10):623.

[10]曹小利,徐学静,张之烽，等.头孢西丁不敏感肺炎克雷伯杆菌临床分离株的耐药性及β内酰胺酶的流行性分析[J].中国临床药理学杂志,2014,20(10):919.

[11]Li W,Xing L,Fang L et al.Application of near infrared spectroscopy for rapid analysis of intermediates of Tanreqing injection.[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2010,53(3):350.

文章编号：1007-4287(2016)01-0087-03

(收稿日期：2015-02-22)