MicroRNA在恶性胸腹膜腔积液中的表达及诊断意义

吴照宇

MicroRNA在恶性胸腹膜腔积液中的表达及诊断意义

吴照宇

作者单位：810001 青海大学附属医院介入科现教学科研部

【摘要】目的探讨MicroRNA分子在恶性胸腹膜腔积液中的表达，为恶性肿瘤的判断和治疗提供指导。方法随机选择60例胸腹腔积液标本，根据病理学结果分为4组，分别为良性胸腔积液组(A组)、恶性胸腔积液组(B组)、良性腹水组(C组)和恶性腹水组(D组)，每组各15例标本，采用荧光定量RT-PCR法监测MicroRNA在良、恶性胸腹膜积液中的表达。结果A组15例标本中MicroRNA表达均为阴性，B组13例阳性(86.7%)，C组1例阳性(6.7%)，D组14例阳性(93.3%)。结论MicroRNA在恶性胸腹膜腔积液中具有较高的表达水平，MicroRNA有望作为分子标志物用于恶性肿瘤的诊断。

【关键词】MicroRNA；恶性胸腹膜腔积液；分子标志物

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:033～034)

恶性胸腹膜腔积液主要包括恶性胸腔积液和腹腔积液，是多种恶性肿瘤晚期一种常见的并发症。目前临床上确诊恶性胸腹膜腔积液主要依靠细胞学检测，但细胞学诊断的准确率只有50%~70%，约5%~10% 的恶性胸腔积液未发现明显的病灶[1-2]。MicroRNA又称微小RNA，是一类普遍存在于细胞中的非编码小分子RNA，它可以抑制mRNA的翻译或降解mRNA，发挥对蛋白表达的调节作用[3]。近年来人们不断探索发现，MicroRNA作为一种小分子在肿瘤的发生发展中起着重要的作用，而且它具有很好的组织特异性，可作为恶性肿瘤诊断的分子标志物[4-5]。本文通过采用荧光定量RT-PCR方法检测我院60例胸腹腔积液标本中MicroRNA的表达水平，探索这类小分子与恶性肿瘤间的关系，为肿瘤的尽早诊断奠定基础。

1材料与方法

1.1　对象

随机选择于2011年3月至2012年3月在我院治疗的60例患者的胸腹膜腔积液标本，根据病理学检查结果，分为30例良性胸腹膜腔积液标本和30例恶性胸腹膜腔积液标本。30例良性标本包括5例肺结核，11例充血性心力衰竭，8例肺栓塞，5例肝硬化和1例慢性肾炎，男性17例，女性13例，年龄为18~58岁，平均年龄为(41.7±2.3)岁；30例恶性标本包括14例肺癌，7例乳腺癌，6例胃癌，2例淋巴瘤和1例卵巢癌，男性15例，女性15例，年龄为21~62岁，平均年龄为(42.6±1.9)岁。

1.2　方法

60例胸腹腔积液标本，根据病理学结果分为4组，分别为良性胸腔积液组(A组)、恶性胸腔积液组(B组)、良性腹水组(C组)和恶性腹水组(D组)，每组各15例标本，采用荧光定量RT-PCR法检测MicroRNA在良、恶性胸腹膜积液中的表达。

1.3　荧光定量RT-PCR法

4组患者分别采用常规方法行胸腔穿刺或腹部穿刺抽取胸腔或腹腔积液100 mL，按照既定方法提取RNA后在-70 ℃环境中保存，经紫外分光光度计分析和变性琼脂糖凝胶电泳法确定RNA质量。向反应体系中加入1 μg RNA，1μg dNTP，补充焦碳酸二乙酯、水至10 μl，70 ℃孵化3 min后加入逆转录酶1 μl，37 ℃反应60 min，即得cDNA溶液，于-80 ℃保存备用。使用Real-time PCR仪分析该基因序列的表达，所用试剂为TagMan MicroRNAAssay试剂盒，U6作为内参。

1.4　统计学处理

2结果

2.1　MicroRNA在A组和B组标本中的表达

A组和B组标本均为胸腔积液，荧光定量RT-PCR法 结果显示，A组15例良性胸腔积液标本中MicroRNA表达均呈阴性，阳性表达率为0，B组15例恶性胸腔积液标本中有13例为阳性，表达率为86.7%，两组标本的表达率具有显著性差异，P<0.05,两组标本的男女比例、平均年龄无显著性差异。B组Micro RNA表达为阳性的样本中，7例肺癌，4例乳腺癌和2例淋巴瘤，两组患者基本信息及病历资料对比见表1。

表1　A组和B组样本对比

2.2　MicroRNA在C组和D组标本中的表达

C组和D组标本均为腹腔积液，在C组15例良性标本中，只有1例MicroRNA为阳性，表达率为6.7%，为肝硬化患者;D组有14例为阳性，表达率为93.3%，包括7例肺癌，3例乳腺癌和4例胃癌，两组标本中MicroRNA表达率有显著性差异，P<0.05，见表2。

表2　C组和D组标本对比

3　讨论

临床上引起胸腹膜腔积液的因素是多方面的，例如非恶性疾病中的感染(肺结核)、心衰、肝硬化等，这一类疾病引起的胸腔、腹腔积液多是良性的，还有一些是由恶性恶性肿瘤引起的，例如肺癌、淋巴瘤、肝癌、消化道癌症等，这一类积液多属于恶性胸腹膜腔积液[3-6]。目前临床上诊断良性和恶性胸膜腔积液的手段主要包括影像学检查(如X线平片、CT、B超等)和细胞学检查，近几年来一些肿瘤标志物分子不断被人们发现和研究，例如胸液癌胚抗原CEA、乳酸脱氢酶LDH等[7]，以及新兴的检查方法，例如端粒酶检测[8]、DNA倍体分析等也被证实可以辅助诊断良性、恶性胸腹膜腔积液，但仍处于基础研究阶段。

本文通过比较15例良性和15例恶性胸腔积液标本以及15例良性和15例恶性腹腔积液标本的MicroRNA表达率，证实胸腹腔积液的性质与MicroRNA表达率有极强的相关性，为MicroRNA指导下个性化腔内药物治疗奠定理论基础。良性胸腹膜腔积液的MicroRNA平均表达率为3.3%，而恶性的表达率为90%，因此MicroRNA的表达对于诊断良性、恶性胸腹膜腔积液具有较高的特异性和敏感性[9-10]。

另一方面，本文也证实了MicroRNA表达与恶性肿瘤之间的相关性，B组标本的MicroRNA表达率为86.7%，13例标本分别为7例肺癌病例，4例乳腺癌病例和2例淋巴瘤病例，D组标本的表达率为表达率为93.3%，包括7例肺癌病例，3例乳腺癌病例和4例胃癌病例。近年来关于MicroRNA与癌症相关的研究不断开展，绝大多数的研究都认为[11]，MicroRNA对于恶性肿瘤的诊断具有极高的特异性和敏感性。

MicroRNA对于胸腹膜腔积液性质的判断和恶性肿瘤早期的诊断具有极好的特异性，尤其是后者的意义非同一般，尽早的确诊意味着及时的治疗，这正是临床诊断迫切需要的分子标志物。

参考文献

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(编辑：甘艳)

Expression and Diagnostic Significance of MicroRNA in Malignant Pleural Effusion

WUZhaoyu.AffiliatedHospitalofQinghaiUniversity,Xining,810001.

【Abstract】ObjectiveTo explore the expression of MicroRNA in malignant pleural effusion,and provide guidance for the judgment and treatment of malignancy.Methods60 cases of abdominal effusion specimens were randomly divided into 4 groups according to the pathological results,benign pleural effusion group (group A),malignant pleural effusion (group B),benign ascites group (group C) and malignant ascites (group D),15 specimens in each group,and the expression of MicroRNA in benign and malignant pleural effusion were monitored using fluorescence quantitative RT-PCR.ResultsThe expression of MicroRNA in group A were all negative,13 cases positive (86.7%) in group B,1 case positive (6.7%) in group C,14 cases positive (93.3%) in group D.ConclusionThe expression of MicroRNA expression is higher in malignant pleural effusions,and MicroRNA is expected as a molecular marker for the diagnosis of malignancy.

【Key words】MicroRNA；Malignant pleural effusion；Molecular marker

中图分类号：R730.43

文献标识码：A

文章编号：1001-5930(2016)01-0033-02

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.01.010

基金项目：青海省卫生和计划生育委员会卫生计生科研指导性计划课题

收稿日期(2015-02-09修回日期 2015-07-10)