5种中草药对凡纳滨对虾生长和抗病力的影响
2016-02-26黄永春陈辉辉涂晨凌于慧娟
黄永春， 陈辉辉， 涂晨凌， 于慧娟
(1.集美大学水产学院，福建厦门 361021；2.福建省海洋渔业资源与生态环境重点实验室,福建厦门 361021)
5种中草药对凡纳滨对虾生长和抗病力的影响
黄永春1，2， 陈辉辉1， 涂晨凌1， 于慧娟1
(1.集美大学水产学院，福建厦门 361021；2.福建省海洋渔业资源与生态环境重点实验室,福建厦门 361021)
凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)俗称南美白对虾，是世界三大养殖虾类品种之一。由于生长迅速、抗逆性强、出肉率高、耐高密度和低盐度养殖，使得该种虾养殖产量占虾类总产量的80%以上，已成为我国主要的对虾养殖品种。随着虾养殖规模的不断扩大、集约化程度的提高以及虾生存环境的恶化，疾病的危害程度越来越大。特别是对虾白斑综合症病毒 (White spot syndrome virus,WSSV)是迄今为止危害最为严重的一种对虾病毒，感染虾7～10 d内死亡率可达80%～100%[1]。养殖生产上使用抗生素和其他化学类药物来防治，容易打破生物间相互依赖、相互制约的生态平衡，抑制有益藻类的繁殖给对虾健康养殖带来了严重后果。
中草药具有天然、高效、毒副作用小、不易产生抗药性等特点，且药中某些成分既有抗菌作用又有免疫作用，能改善机体的免疫状态和提高自身抗病能力，在水产养殖中的应用越来越受到关注[2-3]。目前，Kumaran T等[4]、Balasubramanian G等[5]、Yogeeswaran A等[6]和Balasubramanian等[7-8]研究发现采用中草药提取物投喂斑节对虾(Penaeusmonodon)可以显著增强其对 WSSV 侵染的抵抗力。郭志勋等[9]和阴晓丽等[10]研究发现番石榴(PsidiumguajavaL.)叶水提取物对WSSV 有一定的杀灭作用。另外，杨清华等[11]和吴俊文[12]研究表明在饲料中添加复方中草药投喂凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)可以提高对虾对 WSSV 的抗病能力。笔者将黄芩、黄芪、板蓝根、柴胡、茯苓和甘草5种中草药超微粉碎后分别以相同质量分数量加入到对虾基础饲料中，比较各种中草药在对虾抗WSSV的效果，为对虾健康养殖提供科学依据。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1中草药。5种中草药(黄芪、板蓝根、柴胡、甘草和茯苓)干燥超微粉碎后分别以质量分数的1.5%加入到基础饲料中。
1.1.2试验材料。从漳浦养虾场购买健康凡纳滨对虾2 000尾，体长(2.36±0.42)cm，体质量(0.35±0.11)g。
1.1.3试验饲料。试验用基础饲料组成为优质鱼粉、虾壳粉、面粉、豆粕、酵母粉、多矿、多维、诱食剂等，在此基础上添加中草药制剂，添加量分别为1.5 g/kg。饲料主要营养水平为粗蛋白42.50%，粗脂肪6.5%，粗灰分10.2%，水分8.6%，钙2.2%，磷1.0%。
1.2方法
1.2.1生长试验。对虾经暂养7 d后，分为对照组和5个中草药组(黄芪、板蓝根、柴胡、甘草和茯苓)，每组3个重复，每个重复60尾对虾，放置在200 L实验桶中，适应 3 d后分别投喂基础饲料和5种添加中草药的试验饲料。日投喂量按体重的3%～5%，分3次(7：30、14：00、19:30)投喂，每天换水10%～15%，全程充氧，水温为(27.1±1.2) ℃，盐度为 28‰，养殖试验持续35 d。试验结束时，对每个桶中的对虾进行称重，并按照以下公式计算增重率、特定生长率、饲料系数和存活率：
增重率(WGR, %) = (Wt-Wo)/Wo×100
(1)
特定生长率(SGR, %/d) = (lnWt-lnWo)/t×100
(2)
饲料系数(FCR) =F/(Wt-Wo)
(3)
存活率(SR, %) =Nt/No×100
(4)
式中，Wt和Wo分别为鱼的终末体重(g)和初始体重(g)；t为试验天数(d)；Nt和No分别为t天后和初始鱼的尾数；F为t天内摄食的饲料量(g)。
1.2.2消化酶及血清免疫酶的活性测定。饲养满35 d后对试验对虾饥饿24 h，每桶随机抽取 10 尾(每组3桶)进行解剖，取肝胰脏组织立即投入-196 ℃液氮中，转移至实验室放置于-80 ℃冰箱中保存待测。
消化酶及免疫酶的活性测定将解冻后的肝胰腺称重，加入10倍体积(V/W)的预冷生理盐水，在冰水浴中匀浆5 min。采用低温高速离心机(4 ℃, 4 000 r/min, 20 min)对匀浆液进行离心，吸取上清，即为粗酶液。淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶活性及氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、过氧化物酶(POD)的活性和总蛋白(TP)含量均使用南京建成生物工程研究所生产的相应试剂盒测定。
1.2.3感染试验。试验结束后，每桶随机抽取 30 尾(每组3桶)，投喂经检测感染 WSSV的新鲜病虾，剁碎后按体重的5%～10%投喂，每天正常投喂、吸污、换水，定时检查虾的活动情况，及时收集、编号、保存(-80 ℃)死亡对虾，计算存活率。
1.3数据统计与分析采用 SPSS 11.5统计软件对数据进行统计与分析，先对试验数据进行单因素方差分析(ANOVA)，并进行 Duncan’s多重比较法分析平均数的差异显著性(P<0.05)。
2结果与分析
2.1中草药对凡纳滨对虾的生长、 成活率和饲料系数的影响由表1可知，不同中草药对凡纳滨对虾的生长、成活率和饲料系数的影响不同。从增重率来看，茯苓组>黄芪组>甘草组>柴胡组>板蓝根组>对照组，其中黄芪组与甘草组以及柴胡组、板蓝根组和对照组之间差异不显著(P>0.05)外，其他组差异显著(P<0.05)。各组特定生长率大小为茯苓组>黄芪组>甘草组>柴胡组>板蓝根组>对照组，其中黄芪组与甘草组以及柴胡组、板蓝根组和对照组之间差异不显著(P>0.05)外，其他组差异显著(P<0.05)。各组的饲料系数的大小为茯苓组<黄芪组<甘草组<柴胡组<板蓝根组<对照组，其中茯苓组、黄芪组和甘草组以及柴胡组、板蓝根组和对照组之间差异不显著(P>0.05)外，其他组差异显著(P<0.05)。各组凡纳滨对虾的成活率大小为板蓝根组>柴胡组>黄芪组>甘草组>茯苓组>对照组，除对照组之间差异不显著(P>0.05)，其他组差异显著(P<0.05)。
表1 中草药对凡纳滨对虾生长指标的影响
注：同列不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
Note: Different lowercases in the same column stand for significant differences(P<0.05).
2.2中草药对凡纳滨对虾消化酶活力的影响由表2可知，不同中草药对凡纳滨对虾肝胰腺消化酶活性的影响不同。从淀粉酶活性来看，各组淀粉酶活性大小为茯苓组>甘草组>黄芪组>板蓝根组>柴胡组>对照组，除茯苓组与其他组差异显著(P<0.05)外，黄芪组和甘草组以及柴胡组、板蓝根组和对照组之间差异不显著(P>0.05)。各组脂肪酶活性大小为甘草组>茯苓组>黄芪组>对照组>柴胡组>板蓝根组，其中茯苓组和甘草组以及黄芪组、柴胡组、板蓝根组和对照组之间差异不显著(P>0.05)外，其他组差异显著(P<0.05)。各组蛋白酶活性大小为茯苓组>黄芪组>甘草组>板蓝根组>对照组>柴胡组，其中黄芪组和甘草组以及柴胡组、板蓝根组和对照组之间差异不显著(P>0.05)，其他组差异显著(P<0.05)。
表2 中草药对凡纳滨对虾肝胰脏消化酶的影响
注：同列不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
Note: Different lowercases in the same column stand for significant differences(P<0.05).
2.3中草药对凡纳滨对虾非特性免疫指标的影响由表3可知，中草药影响凡纳滨对虾肝胰腺非特异性免疫力。从SOD活性来看，各组SOD活性大小顺序为板蓝根组>柴胡组>黄芪组>甘草组>茯苓组>对照组，其中板蓝根组、柴胡组、黄芪组和甘草组以及茯苓组和对照组之间差异不显著(P>0.05)，其他组差异显著(P<0.05)。各组AKP活性大小顺序为板蓝根组>甘草组>黄芪组>柴胡组>茯苓组>对照组，其中板蓝根组、甘草组、黄芪组和柴胡组之间差异不显著(P>0.05)，其他组差异显著(P<0.05)。各组ACP活性大小顺序为板蓝根组>甘草组>黄芪组>对照组>柴胡组>茯苓组，各组之间差异不显著(P>0.05)。各组POD活性大小顺序为板蓝根组>黄芪组>甘草组>柴胡组>茯苓组>对照组，其中板蓝根组、柴胡组、黄芪组和甘草组之间差异不显著(P>0.05)，其他组差异显著(P<0.05)。
表3 中草药对凡纳滨对虾肝脏非特异性免疫力的影响
注：同列不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
Note: Different lowercases in the same column stand for significant differences(P<0.05).
2.4中草药制剂对凡纳滨对虾抗病力的影响由表4可知，经过感染试验后，各组凡纳滨对虾的半致死时间大小为柴胡组>板蓝根组>黄芪组>甘草组>茯苓组>对照组，柴胡组、板蓝根组、黄芪组、甘草组和茯苓组半致死时间分别比对照组延长了35.50、34.17、29.87、29.34和4.47 h，其中板蓝根组、柴胡组、黄芪组和甘草组之间差异不显著(P>0.05)，其他组差异显著(P<0.05)。不同中草药对凡纳滨对虾抗WSSV的效果表现为柴胡组>黄芪组>板蓝根组>甘草组>茯苓组>对照组，柴胡组、黄芪组、板蓝根组、甘草组和茯苓组凡纳滨对虾的存活率与对照组相比分别提高5.36%、5.22%、5.04%、3.22%和1.25%，其中板蓝根组、柴胡组和黄芪组之间差异不显著(P>0.05)，其他组差异显著(P<0.05)。
表4中草药对凡纳滨对虾抗WSSV的影响
Table 4The effects of Chinese herbs on WSSV-resistance ofLitopenaeusvannamei
处理组Processinggroup半致死时间Medianlethaltime∥h存活率Survivalrate∥%对照组CK98.33±8.63b6.83±2.63d黄芪组A.membranaceusgroup128.20±6.57a12.05±3.52a板蓝根组I.indigoticagroup132.50±10.50a11.87±1.56a柴胡组B.chinensegroup133.83±12.33a12.19±1.86a甘草组G.uralensisgroup127.67±6.33a10.05±3.21b茯苓组W.cocosgroup102.80±10.25b8.08±2.65c
注：同列不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
Note: Different lowercases in the same column stand for significant differences(P<0.05).
3讨论与结论
中草药作为一种天然物质，具有来源广泛、价格低廉、不宜导致病原菌产生耐药性等优点。目前，已有200 余种中草药具有多种免疫活性且影响和调节动物机体的免疫功能[2]。中草药除含有药用功效的成分外，还含有蛋白质、多糖、脂类、微量元素、维生素等营养成分，因而中草药具有增强机体免疫力、调整机体新陈代谢、增强抗应激能力、抗菌抑菌、促消化吸收、促生长、杀虫驱虫等功能，适合作为免疫增强剂应用于水产养殖业[13-15]。
中草药黄芩(Astraogalusmembranaceusvar. mongholicus)含有黄芩多糖及甙类等多种微量有益物质，有增强机体免疫功能、促进生长的作用[15-16]；甘草(GlycyrrhizauralensisFisch)的主要成分是三萜类化合物(甘草酸、甘草次酸、甘草内酯等)、黄酮化合物(甘草素、甘草醇、甘草利酮、甘草查耳酮等)、糖类、生物碱类、香豆素类等，是一种补益中草药，具有抗炎、抗氧化、抗病毒和抗肿瘤等生理活性[17]，将黄芪和甘草添加到基础饲料中可以明显增强对虾的免疫性能。该试验中黄芪组和甘草组对虾的AKP、ACP、POD和SOD均表现出较高的活力。板蓝根(Radixisatidis)的有效成分为靛苷、靛红、靛蓝、葡萄糖芸香素、棕榈酸和氨基酸等，具有清热解毒、凉血等功效，对流感病毒、乙型脑炎病毒和腮腺炎病毒有抑制其感染和增殖的作用[18-19]；柴胡(Bupleurumchinense)的有效成分为皂苷、甾醇、挥发油、有机酸、黄酮、多糖等，柴胡具有镇静、止痛、降温、镇咳、抗炎、抗菌、保肝利胆、降血压、抗病毒、抗肿瘤等生理活性[20]。添加在基础饲料中投喂35 d后的攻毒感染试验表明，试验对虾比对照组存活率提高56.41%和55.20%。茯苓(Poria)含茯苓多糖、三萜类化合物茯苓素、茯苓聚糖分解酶、脂肪酶及蛋白酶等多种有益物质, 具有促进消化、吸收等功能[15，21]。该研究中茯苓组试验对虾肝胰腺消化酶(淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶)活性明显优于其他组。因此，不同中草药由于其有效成分不同，其发挥的功能也不同，就生长而言茯苓促生长作用较佳，黄芪、板蓝根、柴胡和甘草可以明显提高免疫力和抗病性能。张耀等[22]在饲料中添加中草药黄芪、黄岑(Radixscutellaria)、板兰根、茯苓、鱼腥草(Houttuyniacordata)等药用植物，发现可以通过改善动物肠道内环境，促进有益菌增殖，抑制有害菌的繁殖，从而提高营养物质的消化率；王芸等[23]用鱼腥草、黄芪、大黄(Rheumofficinale)、甘草和黄芩的水提取物按质量分数为2%添加在饲料中连续饲养28 d，发现黄芪、大黄和甘草能够促进凡纳滨对虾的生长及非特异性免疫功能，注射鳗弧菌攻毒试验的结果表明黄芪、大黄和甘草的累计死亡率均低于对照组，免疫保护率为 37%～46%；汤菊芬等[24]在饲料中添加黄芪、当归(Angelicasinensis)、陈皮(CitrusreticulataBlanco)、金银花(Lonicerajaponica)、板蓝根、连翘(Forsythiasuspensa)等6种中草药，结果表明试验组凡纳滨对虾的增重率、成活率、饲料系数、蛋白质效率、抗病力等指标均优于对照组。该研究结果与江湧等[25]、周歧存等[26]和叶建生等[27]中草药制剂对凡纳滨对虾生长和消化酶活性的影响的研究结果相同。
随着对虾养殖规模的不断扩大、集约化程度的提高以及虾生存环境的恶化，疾病的危害程度越来越大，给养虾生产造成了巨大损失，而使用抗生素和其他化学类药物来防治养殖病害，容易引发一系列环境问题和社会问题。为此，利用中草药这一绿色、环保药物和添加剂提高虾体自身非特异性免疫能力和抗病能力，减少渔药使用，生产绿色对虾产品，促进对虾可持续健康发展。该试验结果表明黄芪、板蓝根、柴胡、甘草和茯苓可以明显提高凡纳滨对虾的生长和抗病力，其中茯苓促生长较佳，而黄芪、板蓝根、柴胡和甘草可以明显提高免疫力和抗病性能。
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摘要[目的] 研究不同中草药对凡纳滨对虾生长和抗病的影响，为对虾的健康养殖提供科学依据。[方法] 将黄芪、板蓝根、柴胡、甘草和茯苓经超微粉碎后，分别添加1.5%到基础饲料中，饲喂凡纳滨对虾35 d， 研究其对凡纳滨对虾的生长、成活率、饲料系数、消化酶活力、非特性免疫指标及感染WSSV后的抗病力的影响。[结果] 各组凡纳滨对虾的增重率和特定生长率大小顺序均为茯苓组>黄芪组>甘草组>柴胡组>板蓝根组>对照组。各组饵料系数的大小顺序为茯苓组<黄芪组<甘草组<柴胡组<板蓝根组<对照组。各组对虾存活率的大小顺序为板蓝根组>柴胡组>甘草组>黄芪组>茯苓组>对照组。不同中草药对凡纳滨对虾肝胰腺消化酶活性的影响不同。各组淀粉酶大小顺序为茯苓组>甘草组>黄芪组>板蓝根组>柴胡组>对照组；各组脂肪酶大小顺序为甘草组>茯苓组>黄芪组>对照组>柴胡组>板蓝根组；各组蛋白酶大小顺序为茯苓组>黄芪组>甘草组>板蓝根组>对照组>柴胡组。5种中草药对凡纳滨对虾肝胰腺非特异性免疫力有影响，其中黄芪组和甘草组对虾的AKP、ACP、POD和SOD活力较高。感染WSSV后，各组凡纳滨对虾的半致死时间顺序为柴胡组>板蓝根组>黄芪组>甘草组>茯苓组>对照组，各组存活率大小顺序为柴胡组>黄芪组>板蓝根组>甘草组>茯苓组>对照组。[结论] 中草药制剂可以明显提高凡纳滨对虾的生长和抗病力。其中，茯苓的促生长作用较佳，而黄芪、板蓝根、柴胡和甘草可以明显提高其抗病力。
关键词中草药；凡纳滨对虾；生长；消化酶；免疫酶；WSSV
Effects of Five Species of Chinese Herbs on the Growth and Disease-resistance ofLitopenaeusvannamei
HUANG Yong-chun1,2，CHEN Hui-hui1, TU Chen-ling1et al (1.Fishery College of Jimei University, Xiamen, Fujian 361021; 2. Fujian Provincial Key Laboratory of Marine Fishery Resources and Eco-environment, Xiamen, Fujian 361021)
Abstract[Objective] To study the effects of different Chinese herb on the growth and disease-resistance ofLitopennausvannameiand provide scientific basis for the healthy culture ofL.vannamei. [Method] 1.5%Astraogalusmembranaceusvar. mongholicus,IsatisindigoticaFortune,Bupleurumchinense,GlycyrrhizauralensisFisch andWolfiporiacocoswere added in the basal diet after superfine comminution to feedL.vannameifor 35 d. Their effects on the growth, survival rate, feed coefficient, digestive enzyme activity, non-specific immune indices, and disease-resistance after infecting WSSV ofL.vannameiwere studied. [Result] The weight gain rate and specific growth rate orders ofL.vannameiin test groups wereW.cocosgroup>A.membranaceusgroup>G.uralensisgroup>B.chinensegroup>I.indigoticagroup>control group. The feed coefficient order ofL.vannameiin test groups wasW.cocosgroup
Key wordsChinese herbs;Litopenaeusvannamei; Growth; Digestive enzyme; Immune enzyme; WSSV
收稿日期2015-12-09
作者简介黄永春(1966- )男，福建长汀人，副教授，博士，从事水产健康养殖和良种选育研究。
基金项目福建省自然基金项目(2013J01139); 厦门市海洋经济创新发展区域示范项目(13PZY001SF25)。
中图分类号S 945.4+9
文献标识码A
文章编号0517-6611(2016)01-086-05
