影响不同组织常规制片质量的因素探讨

王记红　王晓兰



影响不同组织常规制片质量的因素探讨

王记红1王晓兰2

【摘要】本文主要根据经验及文献复习分析影响肝脏、胰腺、淋巴结、骨髓及皮肤组织病理常规制片的因素，探讨如何提高不同组织的制片质量。

【关键词】常规制片；质量；因素

Discussion on Factors Influencing Routine Section Quality of Difierent Tissues WANG Jihong1WANG Xiaolan2, 1 Department of Pathology, Luohe Medical College, Luohe 462002, China, 2 Department of Histology and Embryology [Abstract] The paper aimed to investigate how to improve routine section quality of difierent tissues by analyzing factors infiuencing routine section quality of liver, pancreatic gland, lymph node, bone marrow and skin tissue, on the basis of experiences and literature review.

[Key words]Routine section, Quality, Factor

石蜡切片是病理科常规技术之一，病理切片的质量直接影响临床病理诊断的准确性。因其制作过程复杂，步骤较多，每个环节出现问题都会影响切片的质量。因不同组织的结构特点不同，需有制片过程中不同程度的改变，以制作出高质量的组织切片。现根据日常工作经验及文献复习将影响肝脏、胰腺、淋巴结、骨髓及皮肤组织制片质量的因素分析如下。

1　肝脏

肝组织以实质细胞为主，间质细胞偏少，细胞间隙较大，且肝硬化时实质细胞与纤维组织共存，处理不恰当会引起组织切片变脆、裂隙增多、产生皱褶等问题[1]。肝组织制片过程中需注意：（1）缩短组织在无水乙醇及石蜡中的时间，可改善切片出现碎屑、褶皱等现象，而透明时间一般控制在50 min内，切片组织脆性明显改善[2]。（2）根据计数处理组织块的数量更换福尔马林、乙醇和二甲苯，可保证试剂纯度有效改善切片质量。且可通过固定后过水清除福尔马林产生的盐类结晶，保护后续试剂。（3）制作切片时蜡块冷冻温度不能过低，以-5℃为佳，否则蜡块过硬、切片过程中组织出现裂隙。

2　淋巴结

淋巴结细胞多、间质少，被覆致密纤维结缔组织包膜，这些特点使得淋巴结制片难度增加。淋巴结制片中要注意：（1）取材时避免挤压，否则组织结构和细胞形态会受到影响。（2）切片不宜太厚，2～3 μm为佳；刀片需锐利，最好用一次性刀片，这样切出的组织薄；烤片温度不宜过高，否则引起细胞变形[3-4]。（3）固定液多用10%缓冲福尔马林，也有应用B5固定液取得较好效果[5]，B5固定液沉淀蛋白但与蛋白结合不够紧密，需现用现配，还可致汞污染，需要特殊的处理（碘处理）。固定时间不得少于12 h，固定时间不足，易出现“灰染”或“发白”现象。（4）浸蜡温度过高组织易碎。（5）需根据切片厚度及苏木精染液的新旧程度调整染色时间，并在显微镜下严格控制分色程度，苏木素着色过深或过浅均影响细胞核内微细结构的观察。

3　骨髓

骨髓组织含大量钙盐，质硬，且含有一定量的脂肪，用常规石蜡切片技术制作易导致组织切片不完整、结构破坏及细胞模糊不清。骨髓组织制片中需注意：（1）固定12 h者切片质量较好。（2）脱钙及除酸：有研究显示用盐酸脱钙液脱钙1～2 h者切片完整、HE染色良好、核浆对比分明[6]。也有研究显示含有盐酸、甲醛、甲酸、氯化铝、冰乙酸和生理盐水的混合脱钙液脱钙效果较好[7]，该脱钙液有固定作用，且其中的冰醋酸能抵消甲醛引起的组织收缩和硬化，脱钙时间大约2～3 h，如室温较低，可在37℃恒温培养箱里加温。脱钙终止时间的确定传统用针刺法，也可用目测法，即浸在脱钙液中的骨髓组织一旦离开瓶底，处于悬浮状态即终止，该法避免了针刺对组织的破坏。除酸方法一般为流水冲洗，耗时长，有研究用1%氢氧化钠溶液处理5 min，再用流水冲洗10 min能有效去酸，且HE染色效果较好[8]。（3）包埋时使骨髓长轴与包埋框边缘呈45°，以减少切片阻力。展片的水温控制在48℃左右，水温较高容易散开。（4）骨髓切片HE染色时间应适当延长。也有研究认为骨髓HE染色并不理想，应用改良的苏术素-Giemsa-伊红（HE）染色结果可清晰显示骨髓各类细胞[9]。

4　皮肤

皮肤组织结构复杂，质韧，且各层组织致密度也不同，按常规技术制作的切片常出现褶皱、厚薄不均、真皮组织松散、或浅层组织碎裂等问题。皮肤组织制片需注意：（1）可用10%缓冲福尔马林、FAA固定液及Bouin固定液。FAA固定液中的冰醋酸可抵消甲醛对组织的硬化作用；Bouin固定液中的苦味酸对皮肤有软化作用，可降低组织硬度[10]；（2）为避免表皮脱水后变硬、脆，且保证皮下组织及真皮充分脱水，可延长组织在95%乙醇中的时间，而适当缩短在无水乙醇的时间。（3）包埋、摊片及切片：包埋时石蜡温度应与组织温度相近，包埋后快速冷却以形成一个整体，防止组织与周围石蜡脱裂。为避免组织在摊片时破碎可先在30%酒精中漂片，因酒精张力低，然后在温水中摊片。包埋时表皮与切面垂直，切片时表皮在上，速度均匀，不能太快，以防出现皱褶、碎裂等现象[11]。（4）因皮肤表层细胞核较多，故可适当延长染色时间。

如上所述，要想做出高质量的病理常规切片不仅要考虑到影响制片的普遍因素：是否及时固定、取材大小、脱水和透明的时间、试剂的更换及环境温度等，还要注意不同组织的特殊性，根据不同组织的结构特点在反复实践的基础上做出适当调整以做出优质的组织切片。

参考文献

[1] 董伟，俞花，冼志红，等． 肝脏组织脱水流程及试剂更换改进方法[J]． 临床与实验病理学杂志，2014，30（9）：1060-1062．

[2]王德田，董建强． 实用现代病理学技术[M]． 北京：中国协和医科大学出版社，2012：218-220．

[3]唐源，李俸媛，刘卫平． 淋巴结常规制片技术体会[J]． 临床与实验病理学杂志，2008，24（2）：235- 236．

[4]游庆朋． 提高常规活检淋巴结制片质量的方法探讨[J]． 中国误诊学杂志，2007，7（3）：508-509．

[5]蔡琼珍． 提高淋巴结组织切片质量的体会[J]． 广东医学院学报，2006，23（6）：695-696．

[6]朱小兰，张威，骆新兰，等． 216例骨髓脱钙时间的探讨[J]． 临床与实验病理学杂志，2003，19（6）：663．

[7]吕荣，南耘，胡蕴玉． 骨切片固定液和脱钙剂的筛选及效果观察[J]． 临床与实验病理学杂志，1992，8（3）：228-229．

[8]甘启焕，杨清绪，沈琴，等． 提高骨髓石蜡切片质量的几点体会[J]． 临床与实验病理学杂志，2011，27（1）：107-108．

[9]胥维勇． 骨髓活检组织石蜡切片制作的改进及特殊染色的应用[J]． 临床与实验病理学杂志，1994，10（3）：233-234．

[10]王珏，汤显斌，刘涛． 皮肤切片制作时组织标本的处理方法[J]．山西医科大学学报，2007，38（5）：451．

[11]田玉旺，李琳，朱红艳，等． 提高皮肤组织制片质量的技术探讨[J]． 诊断病理学杂志，2012（4）：314-315．

综述的格式和写法

综述一般都包括题名、著者、摘要、关键词、正文、参考文献几部分。其中正文部分又由前言、主体和总结组成。前言用200～300 字的篇幅，提出问题，包括写作目的、意义和作用，综述问题的历史、资料来源、现状和发展动态，有关概念和定义，选择这一专题的目的和动机、应用价值和实践意义，如果属于争论性课题，要指明争论的焦点所在。主体主要包括论据和论证。通过提出问题、分析问题和解决问题，比较各种观点的异同点及其理论根据，从而反映作者的见解。为把问题说得明白透彻，可分为若干个小标题分述。

·论著·

doi：10．3969/j．issn．1674-9308．2016．03．037

【文章编号】1674-9308（2016）03-0057-02

【中图分类号】G642

【文献标识码】A

作者单位： 1 462002 漯河医学高等专科学校病理教研室；2 组织学与胚胎学教研室