MiR-513b-5p在结肠癌中的表达

王晓兰　王记红　陈旭东



MiR-513b-5p在结肠癌中的表达

王晓兰王记红陈旭东

【摘要】目的 探讨miR-513b-5p在结肠癌组织中的表达。方法 选取69份结肠癌样本作为研究对象，采用qRT-PCR方法检测结肠癌组织和对应癌旁组织中miR-513b-5p的表达情况。结果 miR-513b-5p在肿瘤组织的相对表达量较癌旁正常组织低（P＜0．001），结肠癌组织中miR-513b-5p表达水平与原发性肿瘤的发生，淋巴结的转移和临床分期有关联（P＜0．001）。miR-513b-5p表达与性别，年龄和血道转移无统计学差异（P＞0．05）。结论 miR-513b-5p可能在结肠癌的发生发展中发挥抑癌基因的角色。

【关键词】miR-513b-5p；结肠癌；

结肠癌是危害人类生命和健康的恶性肿瘤之一，近年来我国的结肠癌发病率、死亡率均明显上升，具有年轻化、家族聚集、遗传等特点。结肠癌与其他类型肿瘤相同，是较复杂的基因表达异常性疾病，其中包括编码及非编码基因的结构和表达的异常。

近年来，非编码RNA（non. Coding RNAs），特别是微小RNA （microRNA, miRNA）调控基因表达研究的兴起为该问题的解决提供了新的视点。MicroRNA是一类大小约为19～22个核苷酸的小分子RNA，通过抑制其靶基因的表达，发挥着“癌基因”或“抑癌基因”的作用。近来研究也已表明，与没有癌变的胃组织比较，miR-513b-5p在胃癌组织中是低表达的[1]，但结肠癌中miR-513b-5p表达情况还没见报道。我们采用qRT-PCR方法检测结肠癌组织和对应癌旁组织中miR-513b-5p的表达情况。

1　材料和方法

1.1临床样本采集

我们从2011年9月～2014年9月在漯河医学高等专科学校第一附属医院的手术患者中，获取69例原发性结肠癌患者癌标本和相匹配的癌旁组织（距离病灶边缘15 cm以上）标本，其中男41例，女28例；小于69岁32例，大于等于60岁37例，平均（53.5±3.5）岁。原发肿瘤T1-2 17例，T3-4 52例。淋巴结转移N0-N1 20例，N2-N3 49例。无血道转移62例，血道转移7例。临床I～II期21例，III～IV期48例。肿瘤和邻近正常组织样本均经病理学检验确认，样本离体后迅速冷冻于液氮中，常规-80℃冰箱冻存。该研究经漯河医学高等专科学校伦理委员会批准，并取得所有患者的知情同意。

1.2试剂材料

人结肠癌细胞株 SW480为本校分子实验室自存，胎牛血清、1640培养基购自Hyclone公司，TRIzol试剂购自invitrogen公司，Matrigel Matrix购自BD公司，All-in-One microRNA Q-PCR Detection Kit、miR-513b-5p、U6引物购自GeneCopoeia公司，ABI7500荧光定量PCR仪为ABI公司产品。

1.3RNA提取和qRT-PCR

用Invitrogen公司的Trizol从组织中提取总RNA；成熟miR-513b-5P的表达水平使用Taqman试剂盒用qRT-PCR定量；重复qRT-PCR 3次，包括一个无核酸的对照；MiR-513b-5P的表达情况用比较2-ΔΔCT值法，以U6 SnRNA为内参进行定量。

1.4统计分析

统计学分析使用SPSS 16.0软件进行，数据以（均数±标准差）表示，两样本平均值比较采用student's t检验，不同样本间差异用单因素方差分析进行比较，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

利用实时荧光定量PCR检测了69对新鲜结肠癌组织及远端正常组织miR-513b-5p的表达，结果显示miR-513b-5P在结肠癌组织中的表达明显低于正常黏膜组织（t=-4.642，P＜0.001）。临床病理分析结果显示：miR-513b-5P与患者性别、年龄、血道转移均无显著关系（t=1.219，P=0.227；t=0.574，P=0.568；t=1.078,P=0.285）；而在原发性肿瘤、淋巴结转移、临床分期上存在统计学差异（t=5.671，P=0.000；t=6.949，P=0.000；t=6.342，P=0.000）。

3　讨论

结肠癌是欧美发达国家最常见的恶性肿瘤，也是我国九大常见恶性肿瘤之一。MicroRNA广泛的存在于动物、植物、病毒等有机体内，而且是一种非编码RNA，成熟体长度在18～25 bp左右，其编码基因常位于某种基因的内含子内随宿主基因编码而表达[2]。MicroRNA表达谱在恶性肿瘤中反映不同的肿瘤类型，且可反映肿瘤分化阶段。文献报道mir-513a-3p对人肺癌细胞有抑制作用[3]。在本研究中，结果显示miR-513b-5P在结肠癌组织中的表达明显低于相匹配的癌旁正常组织，差异有统计学意义（P＜0.001）；miR-513b-5P在原发性肿瘤、淋巴结转移、临床分期上存在统计学差异（P＜0.001）；提示miR-513b-5p可能抑制结直肠癌细胞的生长、侵袭及转移能力。结果表明，miR-513b-5p可能是结肠癌的抑制基因。

总之，我们证实在人类结肠癌miR-513b-5p呈现明显低表达，miR-513b-5p可能在结肠癌的发生和发展中起重要的调节作用。因此，miR-513b-5p可能是结肠癌的潜在生物标志物与治疗的分子靶标。

参考文献

[1] Xudong Chen，Guoqiang Zhao，Fuqing Wang，et al． Upregulation of miR-513b inhibits cell proliferation， mingration，and promotes apoptosis by targeting high mobility group-box 3 protein in gastric cancer[J]． Tumor Biology，2014，35（11）：11081-11089．

[2]Qin W， Ren Q，Liu T，et al． MicroRNA-155 is a novel suppressor of ovarian cancer-initiating cells that targets CLDN1[J]．FEBS let，2013，587（9）：1434-1439．

[3]Zhang X，Zhu J，Xing R，et al． MiR-513a-3p sensitizes human lung adenocarcinoma cells to chemotherapy by targeting GSTP1[J]．Lung Cancer，2012，77（3）：488-494．

Expression of miR-513b-5p in Colon Cancer

WANG Xiaolan WANG Jihong CHEN Xudong, Luohe Medical College, Luohe 462002, China

[Abstract]Objective To investigate the expression of miR-513b-5p in colon cancer. Methods 69 colon cancer samples were chosen as the research object. qRT-PCR was used to detect the expression of miR-513b-5p in colon cancer samples. Results The expression of miR-513b-5p was significantly lower in tumor tissue compared with matched non-malignant adjacent tissues (P＜0.001), meanwhile there was negative correlation with occurrence of primary tumors, lymph node metastasis and TNM staging (P＜0.001 ). But there was no significant difierence with genders, ages and hematogenous metastasis (P＞0.05). Conclusion miR-513b-5p probably is a kind of anti-oncogene in colon cancer.

[Key words]miR-513b-5p, Colon cancer, Expression

doi：10．3969/j．issn．1674-9308．2016．03．036

【文章编号】1674-9308（2016）03-0056-02

【中图分类号】R735．3+5

【文献标识码】A

作者单位： 462002 漯河医学高等专科学校