河北省汉族人群IL-10基因多态性与慢性乙肝病毒感染的关系*

侯志平，何培元，刘景华，王春青，尹春英，李炳庆

（1.承德医学院病理学教研室，河北承德 067000;2.承德医学院附属医院消化内科;3.承德市中心医院神经外科）

河北省汉族人群IL-10基因多态性与慢性乙肝病毒感染的关系*

侯志平1，何培元2，刘景华3，王春青2，尹春英2，李炳庆2

（1.承德医学院病理学教研室，河北承德 067000;2.承德医学院附属医院消化内科;3.承德市中心医院神经外科）

目的:探讨白细胞介素-10(IL-10)基因启动子区-1082 G/A位点单核苷酸多态性与慢性乙型肝炎病毒感染的关系。方法:河北籍汉族患者310例，根据疾病类型分为慢性乙型肝炎肝硬化组42例、慢性乙型肝炎组124例、乙肝病毒(HBV)携带组56例、自限性感染组88例，采用ELISA法检测患者血清IL-10水平，并检测IL-10基因启动子区-1082 G/A位点基因型和等位基因分布频率。结果:慢性乙型肝炎感染组患者血清IL-10水平最高，明显高于其它三个组(P＜0.05）;自限性感染组患者血清IL-10水平最低，明显低于其它三个组(P＜0.05）。各组患者GG、GA基因型分布频率比较差异无统计学意义(P＞0.05）;自限性感染组患者AA基因型频率明显低于慢性乙型肝炎肝硬化组和乙肝病毒携带组(P＜0.05）。并且，自限性感染组A等位基因频率明显低于其它三组(P＜0.05）。结论:IL-10启动子区-1082 G/A位点AA基因型和A等位基因可能是河北汉族人群易感HBV的宿主基因。

IL-10;单核苷酸基因多态性;慢性乙肝病毒感染;河北省汉族人群

乙型肝炎病毒(HBV)感染是全球性的公共卫生问题，是急慢性肝病的主要原因[1]。不同个体感染HBV后可出现不同的后果，部分患者能自行清除HBV并产生保护性抗体，部分乙型肝炎患者会慢性化，最终死于肝硬化或肝癌[2]。目前研究发现，环境、病毒和宿主因素与HBV感染和转归有关，尤其是宿主的免疫反应对HBV感染的预后具有举足轻重的作用。白细胞介素-10(IL-10）是主要由Th2细胞分泌的抵制性细胞因子，在HBV感染慢性化过程中发挥重要作用[3]。文献报道，IL-10基因启动子区-1082G/A具有单核苷酸多态性(SNP)，并且其转录活性与血清中IL-10的水平相关[4]。但各实验室对不同人种和民族乙肝患者IL-10表达水平的报道结果不尽一致，甚至出现相反的结果[5]。为此，本研究对河北省汉族人群IL-10启动子区基因多态性与HBV感染的关系进行了探讨。

1 对象与方法

1.1 研究对象 2010年1月-2012年1月在承德医学院附属医院消化内科就诊的河北籍汉族患者310例，其中慢性乙型肝炎肝硬化42例、慢性乙型肝炎124例、HBV携带者56例、自限性感染者88例，年龄22-67岁，各疾病组患者性别、年龄具有可比性。

1.2 纳入和排除标准 符合2010年《慢性乙型肝炎防治指南》中的准则[6]。排除合并HCV、HIV或HDV感染，自身免疫性肝病，代谢性肝病，酒精性肝病及药物性肝病等。1.3 研究方法

1.3.1 检测血清IL-10水平:采用ELISA法检测患者血清IL-10水平(试剂盒购自武汉华美生物工程有限公司），在波长450nm处读取数值。

1.3.2 检测等位基因和基因型频率:EDTA抗凝管采集外周静脉血2ml，采用全血基因组DNA提取试剂盒提取总DNA，PCR扩增仪检测IL-10基因启动子区-1082 G/A位点的基因多态性。上下游引物及延伸引物由上海生物工程有限公司合成，具体序列见表1。扩增参数如下:95℃预变性10min，94℃ 30s，退火温度60℃ 1min，35个循环，72℃延伸10min。贝克曼检测分析仪检测基因多态性。

表1 PCR扩增引物和延伸引物序列

1.4 统计分析 采用SPSS 19.0统计软件行卡方检验和ANOVA单因素方差分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 血清IL-10水平 慢性乙型肝炎肝硬化组、慢性乙型肝炎感染组、乙肝病毒携带组、自限性感染组患者血清IL-10水平分别为(11.54±5.78）pg/ml、（23.65±10.32）pg/ml、（8.76±1.55）pg/ml、（4.57±0.22）pg/ml。慢 性乙型肝炎感染组患者血清IL-10水平最高，明显高于其它三个组(P＜0.05）;自限性感染组患者血清IL-10水平最低，明显低于其它三个组(P＜0.05）。

2.2 IL-10-1082G/A位点基因型和等位基因频率 ⑴各组患者IL-10-1082G/A位点GG/GA/AA基因型分布频率比较，差异具有统计学意义(x2=17.31，P＜0.05）:各组患者GG、GA基因型分布频率比较差异无统计学意义(P＞0.05）;慢性乙型肝炎感染组AA基因型频率明显低于慢性乙型肝炎肝硬化组，自限性感染组AA基因型频率明显低于慢性乙型肝炎肝硬化组和乙肝病毒携带组(P＜0.05）。⑵各组患者等位基因G/A分布频率比较，差异具有统计学意义(x2=34.35，P＜0.05）:自限性感染组A等位基因频率明显低于其它三组(P＜0.05）。见表2:

表2 IL-10-1082 G/A位点基因型和等位基因分布频率[n(%）]

3 讨论

据WHO报道，全球大约有35亿人曾经感染过HBV，其中2.4亿为慢性HBV感染者，每年有约超过80万HBV感染者死于并发症，包括肝硬化和肝癌[7]。地理分布调查显示，东亚地区成年人接触HBV后有约10%-15%成为慢性感染者。

大量资料证明，宿主免疫系统对HBV感染的慢性化和进展程度有明显影响[8]。IL-10主要由Th2细胞和单核巨噬细胞产生，具有较强的免疫调节活性，一方面能抑制活化的T细胞产生细胞因子，也因此被称为细胞因子合成抑制因子，特别是抑制TH1细胞产生IL-2和IFN-γ等细胞因子，从而抑制细胞免疫应答;另外，IL-10还具有很强的抗炎活性，可抑制促炎介质的合成和活性，并与抗炎介质有协同作用。因此，普遍认为IL-10是一种重要的抗炎介质及免疫抑制因子[9]。本研究发现，自限性感染组患者血清IL-10水平最低，明显低于慢性乙型肝炎肝硬化组、慢性乙型肝炎感染组、乙肝病毒携带组。一些学者认为IL-10高表达与肝病迁延不愈密切相关，机制可能是IL-10的高表达抑制了干扰素的合成，从而削弱了宿主抵抗HBV感染的免疫活性;但也有学者认为，IL-10表达与个体的遗传背景有关，特别是启动子区基因的多态性，在一定程度上可调控IL-10 mRNA的生成，从而影响血清IL-10的水平[10]。

本研究对310例患者IL-10启动子区基因多态性的分析发现，各组患者IL-10-1082 G/A位点AA/AG/GG基因型分布频率比较，差异具有统计学意义，并且，自限性感染组AA基因型和A等位基因频率最低，提示，AA基因型和A等位基因可能与HBV感染的易感性有关。本研究结果与国内外文献报道的研究结果相似[11]。但Sofian等[5]报道，IL-10-1082 G/A位点基因多态性在伊朗人群中与HBV感染的风险无关。

总之，HBV感染是一个复杂的多因素共同作用的过程，其中宿主的免疫状态是一个关键因素，其与宿主遗传背景的相互作用直接决定了HBV感染后的转归。本研究初步揭示了IL-10启动子区-1082 G/A位点AA基因型和A等位基因可能是河北汉族人群易感HBV的宿主基因。但由于不同人群的遗传背景不同，为避免由于样本量不足引起的偏倚，应该在不同人种、种族和地区间增大样本量进一步深入研究。

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（基础医学栏目编辑:陈志宏)

RELATIONSHIPS BETWEEN IL-10 GENE POLYMORPHISMS AND CHRONIC HEPATITIS B VIRUS INFECTION IN HAN POPULATION OF HEBEI PROVINCE

HOU Zhi-ping, HE Pei-yuan, LIU Jing-hua, et al
(PathoLogy Department of Chengde MedicaL CoLLege, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To investigate the relationships between the polymophisms of interleukin-10 (IL -10) promoter region at -1082 G/Α locus and chronic hepatitis Β virus (HΒV) infection.Methods:310 Han patients in Hebei province were divided into liver cirrhosis of chronic hepatitis Β group (n=42), chronic hepatitis Β group (n=124), HΒV carried group (n=56) and self-limited infection group (n=88). The serum IL-10 level, genotype and allele distribution frequency of IL -10 promoter region at -1082 G/Α locus were detected of all patients.Results:The serum IL-10 level of chronic hepatitis Β virus patients was the highest, while the serum IL-10 level of self-limited infection patients was the lowest (P＜0.05). There was no signif cant difference in genotype frequencies of GG and ΑΑ among the 4 groups (P＞0.05). The genotype frequencies of ΑΑ of self-limited infection group was obviously lower than liver cirrhosis of chronic hepatitis Β group and HΒV carried group (P＜0.05); Moreover, the allele distribution frequency of Α in self-limited infection group was obviously lower than other 3 groups(P＜0.05).Conclusions:ΑΑ genotype and Α alleles of IL-10 promoter region at -1082 G/Α maybe the host gene that susceptible to HΒV of Han population in Hebei province.

Interleukin-10; Gene polymorphism; Chronic HΒV infection; Han population of Hebei province

R512.6

A

1004-6879(2016）04-0278-03

2015-12-02）

* 河北省卫生厅资助项目(20120112),河北省临床优秀人才项目(361008),河北省高校重点学科建设项目资助