烤瓷冠基底合金影响人牙龈成纤维细胞MMP-2、MMP-13表达实验探讨

刘丽梅

烤瓷冠基底合金影响人牙龈成纤维细胞MMP-2、MMP-13表达实验探讨

刘丽梅

目的 观察不同种类烤瓷牙金属基底冠浸提液对人牙龈成纤维细胞中 MMP-2、MMP-13表达水平的影响。方法 制备纯钛、钴铬、镍铬和金合金提取液，通过组织块改良的方法来对牙龈周围的纤维细胞进行培养，经过浸提液浸泡之后，分别收集样本上的细胞清液，作为MMP-13表达水平的测定样本，测定方法为ILISA测定法。结果钴铬合金和镍铬合金MKMP-13表达水平高于阴性对照组和其他实验组，各项指标对比，差异有统计学意义（P＜0.05）；金、纯钛合金组MMP-13表达水平与阴性对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 钴铬合金和镍铬合金MKMP-13表达水平较高，一定程度上会损伤牙龈成纤维细胞；金、纯钛合金生物相容性比较好。

金属蛋白本酶；金属浸提液；细胞培养；牙龈成纤维细胞

金属烤瓷修复体是一种被广泛采用的金属修复材料，既具有瓷的美观性也具有较强的延展性[1］。然而一部分修复体由于材料本身的性质会使患者出现龈缘灰染、牙龈炎症等方面的问题。需要对不同修复体材料对患者牙周组织的影响进行评估。

牙龈组织主要是由牙龈成纤维细胞组成，成纤维细胞的健康对于患者牙周组织的修复具有重要意义。患者经过修复体移植手术后，须要通过牙龈成纤维细胞来生成金属蛋白酶，促进细胞外基质的生成，尤其是在术后轻微炎症的刺激下，金属酶的合成速度有所提升，促进牙周组织快速复原[2-3］。

由此可知，金属基底冠材料的选用需要考虑到材料本身对于金属蛋白酶分泌作用的影响，从而断定金属基底冠材料是否适合患者并降低矫正手术的副作用。牙龈成纤维细胞通过分泌、增殖、迁移胶原来修复受损的牙周组织。

1 材料和方法

1.1主要试剂和仪器

离心机、TS开型酶联免疫检测仪、倒置显微镜、二氧化碳培养孵箱、鼠抗人角蛋白单克隆抗体、鼠抗人波形丝蛋白单克隆抗体、ELISA MMP-13试剂盒、ELISA MMP-2试剂盒、金合金、纯钛、钴铬合金、镍铬合金。

1.2实验方法

选取一副健康的牙龈缘组织块，将其形状修剪为1 mm2大小，选取1 ml消化时间为30 min的胰蛋白酶放入EP管中，加入组织块，将EP管置入一氧化碳孵箱中，调整一氧化碳含量至5%，温度37℃，经过12 h后，加入DMEM液，起到组织块铺满瓶底，将组织块平均分为4份，加入金合金、纯钛、钴铬合金、镍铬合金液，继续培养7天，对合金析出液进行收集[4-5］。对所采集到实验样本进行分组，A组为实验组；B组为镍铬合金组、C组为钴铬合金组、D组为金合金组；DMEM培养液为随性对照组，即E组。采用ELISA MMP-13试剂盒在检测所选取的上清液，用检测得到的OD值来制定标准曲线，表达出不同OD值对应的浓度。

1.3统计学方法

利用SPSS17.0程式来分析试验数据，检验方法为SNK-T检验法，P＜0.05，差异有统计学意义。

2 结果

经过6h反应后镍铬合金、钴铬合金、纯钛合金、金合金MMP-13表达水平分别为（2.179±0.068）ng/ml、（2.048±0.052）ng/ml、（1.937±0.014）ng/ml、（1.971±0.006）ng/ml；经过24h反应后镍铬合金、钴铬合金、纯钛合金、金合金MMP-13表达水平分别为（3.286±0.1521）ng/ml、（3.156±0.084）ng/ml、（1.964±0.026）ng/ml、（1.984±0.017）ng/ml。

相对于钴铬合金、镍铬合金，金合金、纯钛合金组具有更高的MMP-13表达水平。延长反应时间至24 h，所得到的实验结果与6 h反应结果相同。而钴铬合金、镍铬合金随着适应时间的增加，MMP-13表达水平也随之增加。

3 讨论

在MMP-13表达水平方面，牙龈纤维细胞自身就可以生成一定量的MMP-13，进一步降解口腔中的原纤维细胞，尤其是在钴铬合金和镍铬合金的催化作用下，阴性对照比与MMP-13水平得到增强，而且随着时间的延长，变化程度越明显[6-8］。

综上所述，镍铬合金和钴铬合金可以上调人牙龈成纤维细胞MMP-13表达水平，而纯钛和金合金对此影响不明显。

[1]胡静.烤瓷冠基底合金影响人牙龈成纤维细胞MMP-2、MMP-13表达的实验研究[D］. 锦州：辽宁医学院，2012：13-14.

[2]胡静，黄克强，杜雅，等.烤瓷牙基底冠合金影响人牙龈成纤维细胞MMP-13表达的实验研究[J］.中国医学工程，2012，20（4）：16-18.

[3]刘淼，黄克强，赵芳英，等.金属基底合金浸提液影响人牙龈成纤维细胞MMP-1、MMP-3表达的实验研究[J］.辽宁医学院学报，2010，31（3）：203-205.

[4]杜雅.烤瓷冠基底合金影响人牙龈成纤维细胞分泌前列腺素E_2及环氧合酶-2的实验研究[D］. 锦州：辽宁医学院，2012：4-5.

[5]芦琳.烤瓷冠基底金属浸提液对人牙龈成纤维细胞uPA和其抑制剂PAI-Ⅰ表达的影响[D］. 锦州：辽宁医学院：53-54.

[6]刘婷.种烤瓷冠基底合金浸提液对人牙龈成纤维细胞细胞周期及Bcl-2和Bax表达的影响[D］. 锦州：辽宁医学院，2013：28-29.

[7]刘婷，黄克强，李志刚，等.4种烤瓷冠基底合金浸提液影响人牙龈成纤维细胞中Bcl-2和Bax的表达[J］.中国组织工程研究，2012，16（16）：2943-2946.

[8]赵永超.不同金属烤瓷全冠对种植体龈沟液中TNF-α和MMP-8水平的影响[D］. 石家庄：河北医科大学，2008：25-26.

Study on the Exp ression of MMP-2 and MMP-13 in Hum an Gingival Fibroblast Cells of Porcelain Fused to Metal Crown

LIU Limei Department of Stomatology， The Affiliated Hospital of Jinlin Medical College， Jilin Jilin 132013， China

Ob jective To observe the effects of different kinds of porcelain fused to metal crown on the expression of MMP-2 and MMP-13 in human gingival fibroblast cells. Methods The preparation of pure titanium and cobalt chrom ium， nickel chrom ium alloy and gold extraction， by means of a modified tissue to fibroblast cells were cultured on the gums around， after leaching liquid immersion， were collected on a sample cell supernatant， the expression level of MMP-13 was determined as the sample determination method for ILISA determ ination. Resu lts The expression of CO Cr alloy and Ni Cr alloy MKMP-13 was higher than the negative control group and experimental group， comparison of various indexes， the difference was statistically significant （P＜0.05）. There was no significant difference in the expression level of MMP-13 and the negative control group （P＞0.05） in the gold and pure titanium alloy group. Conclusion Co Cr alloy and Ni Cr alloy MKMP-13 high expression level， to a certain extent w ill damage the gingival fibroblast； gold， pure titanium alloy biocompatibility is good.

Metal protein， Enzyme， Metal extraction， Cell culture，Gingival fibroblast

R-33

A

1674-9308（2016）27-0011-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.27.007

吉林医药学院附属医院口腔科，吉林 吉林 132013