糖皮质激素受体GRα/GRβ在慢性鼻-鼻窦炎治疗中的作用

夏文强，王士礼

(1.上海交通大学医学院附属瑞金医院北院耳鼻喉科，上海 201801；2.上海交通大学医学院附属瑞金医院耳鼻咽喉科，上海 200025)



糖皮质激素受体GRα/GRβ在慢性鼻-鼻窦炎治疗中的作用

夏文强1，王士礼2

(1.上海交通大学医学院附属瑞金医院北院耳鼻喉科，上海 201801；2.上海交通大学医学院附属瑞金医院耳鼻咽喉科，上海 200025)

目的：探讨糖皮质激素受体GRα/GRβ在慢性鼻-鼻窦炎治疗中的作用。方法：本研究共纳入2013年5月至2015年5月在上海交通大学医学院附属瑞金医院耳鼻咽喉科行鼻内镜手术治疗的慢性鼻-鼻窦炎患者150例，根据治疗效果分为有效组和无效组，通过免疫组织化学方法检测糖皮质激素受体GRα和GRβ在慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉组织中的表达情况，同时选取无鼻-鼻窦炎及变应性疾病史患者中鼻甲黏膜作为阴性对照。分析GRα和GRβ表达水平与Lund and Kennedy内镜评分和生活质量评价的相关性。结果：在有效组、无效组和对照组的鼻黏膜(鼻息肉)中均有较高程度的GRα阳性细胞的表达，各组间的GRα积分无统计学意义；另外，有效组和无效组的GRβ积分均明显高于对照组，有效组GRβ积分明显低于无效组，两两比较，其差异均具有统计学意义(P<0.01)。相关性分析显示，将150例患者GRα的表达与Lund and Kennedy内镜评分无明显相关性，而GRβ的表达与Lund and Kennedy内镜评分呈现正相关。另外，GRα的表达与术后VAS评分、SNOT-20评分及SF-36评分之间无明显的相关性，而GRβ的表达与术后VAS评分和SNOT-20评分均呈正相关，而与术后SF-36评分无明显相关性。结论：GRβ的高表达可能是导致慢性鼻-鼻窦炎患者临床疗效不佳的重要因素。

糖皮质激素受体；慢性鼻-鼻窦炎；临床疗效

慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)是现代社会常见的耳鼻咽喉多发性疾病[1-2]。目前，鼻内镜鼻窦手术配合糖皮质激素是CRS最有效的治疗方法，但术后复发率较高，其原因目前并不完全清楚。近年来的研究表明糖皮质激素抵抗可能是一个重要原因[3-4]。本研究通过免疫组织化学方法检测糖皮质激素受体GRα和GRβ在慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉组织中的表达情况，并分析其与生活质量评价(quality of life,QOL)及Lund and Kennedy内镜评分的相关性，进一步明确慢性鼻-鼻窦炎疗效不佳的原因，为慢性鼻-鼻窦炎的临床综合治疗以及鼻内镜鼻窦术后手术疗效的评估提供参考依据。

1 资料和方法

1.1 入组标准和研究对象

纳入和排除标准：明确慢性鼻-鼻窦炎诊断的患者；无全身各系统慢性疾病的患者；围手术期前2个月内未接受局部或者全身糖皮质激素治疗；排除年龄<14岁或>67岁的患者。

本研究共招募2013年5月至2015年5在上海交通大学医学院附属瑞金医院耳鼻咽喉科行鼻内镜手术治疗的慢性鼻-鼻窦炎患者150例。全部患者术前两周开始使用鼻用类固醇激素、术前3 d静脉使用地塞米松10 mg、术后静脉使用地塞米松、出院后晨起顿服强的松片每5 d为期剂量递减、术后3～6个月用鼻类固醇激素的常规治疗。术后1年进行电话召回，实际召回并完成内窥镜检查及完整填写生活质量问卷的患者共150例纳入本研究，年龄18～68岁，平均年龄(49.66±11.34)岁；男性81例，平均年龄(48.99±11.37)岁；女性69例，平均年龄(49.36±11.86)岁。本研究经医院伦理委员会同意，所有受试者均签署知情同意书。

1.2 标本选择及分组

按手术疗效，150例患者分为治疗有效组和无效组；同时以无鼻-鼻窦炎及变应性疾病史的12例外伤或者鼻中隔偏曲患者为对照组。将手术中取下的标本(实验组为鼻息肉，对照组为中鼻甲黏膜)制成石蜡标本备用。

1.3 切片及免疫组织化学

石蜡标本连续切片，厚度约2 μm。取3张邻近切片进行展片，分别用于HE染色、GRα和GRβ的免疫组织化学染色。

HE染色：切片经二甲苯脱蜡和酒精复水。先苏木精染色2 min，然后盐酸酒精分化30 s,再以氨水返蓝20 s，最伊红溶液浸泡3 min。

免疫组织化学染色：切片经二甲苯脱蜡和酒精复水。3%H2O2室温10 min。枸橼酸缓冲液100 ℃浸泡20 min。一抗(兔抗人GRαIgG 1∶100，兔抗人GRβIgG 1∶750，PBS代替一抗作为阴性对照)4 ℃冰箱孵育过夜，PBS洗3次。滴加二抗，37 ℃孵育1 h，PBS洗3次，DAB显色5 min。苏木精复染2 min，封片，镜下观察。

免疫组织化学半定量判定：GRα和GRβ免疫组织化学染色阳性呈棕黄色颗粒，位于细胞质和(或)细胞核。染色强度与阳性细胞百分率(取5个高倍视野的平均值)相乘得GRα、GRβ积分。每一切片均经两名病理医师进行单盲法评估，并取平均值。

1.4 生活质量问卷

采用VAS评分、SNOT-20评分和SF-36评分检测患者的生活质量。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 GRα和GRβ在不同组别中的表达

研究结果显示：在有效组、无效组和对照组的鼻黏膜(鼻息肉)中均有较高水平的GRα阳性细胞的表达(图1)。各组间的GRα积分无统计学意义(P=0.553)(表1)；在有效组、无效组和对照组的鼻黏膜(鼻息肉)中均有不同程度的GRβ阳性细胞的表达，各组间的GRβ积分差异有统计学意义(P<0.01)。其中，有效组和无效组的积分均明显高于对照组，其差异均具有统计学意义(P<0.01)，另外，有效组积分明显低于无效组两两比较，其差异具有统计学意义(P<0.01)(表1)。

表1 GRα和GRβ在不同组别中的表达

*P<0.01，与对照组比较；﹟P<0.01，与无效组比较。

2.2 GRα/GRβ的表达与治疗后Lund and Kennedy内镜评分的关系

统计结果显示：150例患者的GRα积分与术后Lund and Kennedy内镜评分结果无明显相关性(r=0.031，P=0.599)，150例患者的GRβ积分与术后Lund and Kennedy内镜评分呈正相关(r=0.561，P=0.001)，即GRβ表达越高，术后Lund and Kennedy内镜评分结果越差。见图2。

2.3 GRα/GRβ的表达与生活质量评分的关系

统计结果显示：GRα积分与术后VAS评分(r=-0.066，P=0.596)，术后SNOT-20评分(r=0.031，P=0.791)以及术后SF-36评分(r=-0.089，P=0.466)均无明显相关性。GRβ积分与术后VAS评分(r=0.361，P=0.005)和术后SNOT-20评分(r=0.389，P=0.001)均呈正相关，而与术后SF-36评分结果无明显相关性(r=-0.051，P=0.739)。见图3。

3 讨论

慢性鼻-鼻窦炎是鼻-鼻窦黏膜大量嗜酸性粒细胞和上皮细胞浸润为主要表现的炎症性疾病。自从20世纪70年代后期Messerklinger引入鼻内镜鼻窦手术至今，慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉的治愈率得到显著改善[5-6]，已成为慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉患者经过正规药物治疗无效后的常规治疗手段[3-5]。有研究显示，鼻内镜鼻窦手术良好疗效主要得益于围手术期糖皮质激素的应用[7]。术前应用糖皮质激素可使鼻息肉体积缩小，炎症改善，术后应用可帮助愈合，防止或延缓息肉的复发[8-10]。

GR属于甾体激素受体超家族成员，主要有两个亚型，即GRα和GRβ。糖皮质激素与GRα结合后可以引发一系列正常的生物学效应从而发挥抗炎作用。而GRβ不能结合糖皮质激素[11-12]。虽然大多数的患者经过鼻内镜鼻窦手术及糖皮质激素的治疗能够取得良好的效果，但仍有部分患者的疗效仍然不令人满意[9-10]。研究提示，对于糖皮质激素反应性起关键作用的可能是GRα与GRβ表达的比例，它们之间可能存在某种制约和平衡的关系[9,13]。

本次研究中，我们根据手术疗效将患者分为治疗有效组和无效组，另设正常鼻黏膜对照组，通过免疫组织化学分析发现在正常鼻黏膜、有效组鼻息肉及无效组鼻息肉中均有GRα和GRβ的表达，进一步分析发现GRα在3组中的表达差异无统计学意义；而GRβ在3组中的表达差异有统计学意义(P<0.01)。其中，有效组和无效组的GRβ表达水平均明显高于对照组，另外，有效组GRβ表达水平明显低于无效组，其差异均具有统计学意义(P<0.01)，提示GRβ的高表达可能是慢性鼻-鼻窦炎疗效不佳的重要因素之一。

相关性分析显示，GRα的表达与Lund and Kennedy内镜评分无明显相关而GRβ的表达与Lund and Kennedy内镜评分呈现正相关，另外，GRα的表达与术后VAS评分、SNOT-20评分及SF-36评分之间无明显的相关性，而GRβ的表达与术后VAS评分和SNOT-20评分均呈正相关，提示GRβ的表达水平可用于评估患者术后的术腔情况和生活质量。

综上所述，我们认为GRβ的高表达可能是导致慢性鼻-鼻窦炎患者经过鼻内镜鼻窦手术及正规围手术期糖皮质激素综合治疗后疗效不佳的重要因素，GR的检测有望成为预测糖皮质激素治疗敏感性的指标，从而有助于指导临床制定慢性鼻-鼻窦炎的综合治疗策略，合理使用糖皮质激素，减少用药副作用。同时也为基于调整GRα/GRβ的比例的基因治疗提供新的思路。

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(学术编辑：刘海)

Clinical effects of glucocorticoid receptors (GRα/GRβ) in the treatment of chronic rhinosinusitis

XIA Wen-qiang1，WANG Shi-li2

(1.DepartmentofOtolaryngology，RuijinHospitalNorthernBranch,ShanghaiJiaoTongUniversitySchoolofMedicine，Shanghai201801；2.DepartmentofOtolaryngology,RuijinHospital,ShanghaiJiaoTongUniversitySchoolofMedicine，Shanghai200025，China)

Objective：To investigate clinical effects of glucocorticoid receptors (GRα/GRβ) in the treatment of chronic rhinosinusitis.Methods：A total of 150 patiens with chronic rhinosinusitis who underwent nasal endoscopic surgery were enrolled in this study from May 2013 to May 2015 at our hospital.According to the therapeutic efficacy,the patients were divided into two groups:effective group and ineffective group,the expression of GRα/GRβ in nasal polyps tissue in patients with chronic rhinosinusitis was examined by immunohistochemistry,and middle turbinate mucosa in patients without nasal sinusitis and allergic diseases was used as a negative control.The correlation of GRα/GRβ expression with Lund and Kennedy score and quality of life was further analyzed.Results：There was a high level of GRα expression in all three groups,but no significant difference was found among the group,and the expression of GRβ in both effective group and ineffective group were significantly higher than that in the control group (P<0.01).In addition,the expression of GRβ in effective group was significantly lower than that of the ineffective group (P<0.01).Correlation analysis showed that there was no significant correlation between the expression of GRα and Lund and Kennedy score,while the expression of GR was positively correlated with Lund and Kennedy score.Additionally, there were no correlations between GRα expression with VAS score,SNOT-20 scores and SF-36 scores,and GRβ expression was positively correlated with VAS score and SNOT-20 score,but no with SF-36 score.Conclusion：The high expression of GRβ may be the main cause of the poor prognosis for patients with chronic rhinosinusitis after nasal endoscopic surgery.

Glucocorticoid receptors;Chronic rhinosinusitis;Clinical effects

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.06.012

2016-05-09

夏文强(1985-)，男，硕士研究生。E-mail：abrimi12@163.com

时间：2017-1-3 22∶01

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20170103.2201.024.html

1005-3697(2016)06-0824-04

R765.4

A