食用菌液体制种污染的原因分析及解决办法

白胡木吉力图，白福林，刁亚娟，哈申图力古尔，钱丹珠（通辽职业学院化工系，内蒙古通辽 028000）



食用菌液体制种污染的原因分析及解决办法

白胡木吉力图，白福林，刁亚娟，哈申图力古尔，钱丹珠
（通辽职业学院化工系，内蒙古通辽 028000）

摘要：食用菌液体制种技术现已广泛运用于生产当中，此技术不同于传统的制种技术，其操作过程当中对操作人员的要求非常高，如对操作过程不重视，就不可避免的出现各种杂菌污染问题，影响生产，造成损失，文章根据实际生产经验总结出了液体制种过程中常见的污染原因，同时也总结出了解决办法。

关键词：液体菌种 污染 办法

液体菌种栽培是生物深层发酵技术与传统产业相结合的生产方式。要求操作人员在生产中严格管理，具有较强的无菌意识，如管理粗放，就不可避免的出现各种杂菌污染问题，造成很大的损失。

1　菌种生产设施及环境不符合要求引起污染

（1）液体菌种生产车间，接种室，养菌室要求在300 m之内不能有鸡、猪舍及其它污染源，如生产车间建在鸡猪等畜禽舍、垃圾处理厂、砖瓦厂等周围时，由于灰尘、砂土、及大量杂菌漂浮在空中，菌种菌袋（瓶）污染的机会就会增加，生产室内要求为干燥、洁净，具有良好的通风照明条件，地面、墙面、顶棚光滑不存灰，室内不要堆放各种杂物。

（2）水源要清洁无污染。如水源有污染或重金属含量过大，会造成菌种不萌发，菌球难以形成或菌种接到培养基时菌种不吃料、培养基感染杂菌。

（3）电源保证在220±20V，如电压不足或不稳，容易使控制系统不能正常工作，影响制种。如经常停电，同时又不能及时保压，也容易使罐压降到零或负压，引起空气倒流污染。

2　培养基制作及灭菌过程中污染

（1）培养基中存在大颗粒物质，主要原因是：一是在刷罐的时候未刷干净，在罐内存留一些菌块、菌球、菌皮，加热棒上糊料。加热棒在培养过程中，若实际温度低于设定温度时，控制柜会自动启动加热棒而加热，而在培养后期随着菌球浓度的增加，菌液的粘度会越来越大，这样就造成高粘度的菌液会有少量粘附在加热棒上，这种情况是正常的，便如果粘附情况比较严重，可以将加热棒取下单独进行清理后再正常使用。二是培养基在过滤的时候纱布太少，使培养料中的一些颗粒透过纱布进入到培养基中。这些颗粒堆积罐底造成灭菌死角。

（2）在液体培养基的配制过程中一般不需要调解pH值，自然即可，一般pH值6～7，如人为提高pH值，易造成杂菌（特别是芽孢杆菌）耐热性能提高，造成灭菌不彻底。

（3）未加入消泡剂或加入的消泡剂量小，在培养基灭菌时，如果未加入消泡剂，会产生大量的泡沫，气泡能产生隔热层，如杂菌存在其中会造成灭菌不透。

（4）排料不规范，排料的主要目的是排除阀门处的生料，同时对阀门进行灭菌，如不排料或排料时间短少，都会导致灭菌不彻底。排料的方法是灭菌时要求我们在计时开始的前、中、后（0 min、25 min、55 min）接种阀和进气阀各排料3～5 min，3次共排料3～5 L。排料时只要阀门有少量料液和气体排出即可，其作用一是排除阀门部的生料；二是对阀门自身起到消毒的作用。

（5）培养基灭菌不彻底。液体菌种生产过程中，培养基的灭菌是一个较为关键的环节，为保证灭菌彻底，需注意计时温度的确定，培养基灭菌一般要求121℃维持60 min，因此无论在温度上还是时间上要求都必须保证，在确定计时温度时既要看培养器压力表温度，又要看温度计实际温度。如两者指示不一致时，应以最低指示为准，另外要注意冷气要完全排出，保证排气阀始终处于微开状态，保证整个过程都有活气排放。在完全排气的情况下，压力和温度是有一定的关系的。如压力为0.10MPa时温度为121℃，压力为0.15MPa时，温度为126℃，但有时温度和压力的指示不一致，这时除应查出并排除故障外，还应以两者指示的最低者为准。如压力表指示为0.15MPa，而温度计温度仅为120℃，这时应以温度为准。注意灭菌过程中绝对不能掉温（掉压），一旦出现掉温现象，应重新计时以保证灭菌的彻底，但正常情况下不能随意延长灭菌时间，这样会造成营养成分大量被破坏而对培养不利。培养基灭菌结束后应立即通水，在最短的时间内使其温度降到30℃以下，而绝不能用自然降温法进行降温。因为自然法降温持续时间长，而培养基又处在高温状态，所以其营养损失严重，不利于培养的正常进行，因而不宜采用自然降温法进行降温。

3　专用母种在并瓶时染菌

（1）菌种带菌。一是专用母种带菌，一方面是专用种在制作过程中造成污染；另一方面是在存贮的过程中造成二次污染，如冰箱未消毒，同其它食物放在一起，环境过于潮湿等。二是并瓶时造成污染，一方面是操作不严格，接种室熏蒸不彻底，火焰不够大封不住瓶口，接种钩灼烧不彻底；另一方面，并瓶后未加抑菌剂。

（2）向罐内接种时造成染菌。一是接种时火焰太小封不住罐口；二是接种时间过长，罐口长时间暴露在空气中；三是在接种过程中异物掉入罐内，如灰尘、棉塞、手套线头等。

4　菌种在培养过程中染菌

（1）环境不合格，培养室要远离三废，室内必须清洁无死角，墙壁房顶光滑无尘，空气干燥新鲜，室内安装换气扇或空调，无特殊情况不要开窗换气。

（2）培养过程泡沫冒顶，消泡剂添加不够造成，一旦冒顶杂菌会延泡沫进入罐内。泡敌（聚氧丙烯甘油）作为一种高效消泡剂，主要起到消除培养料泡沫的作用，一旦泡沫过多或泡沫冒顶，就会导致整罐染菌。一般的添加量为0.03%～0.035%，添加的量少，则消泡效果不佳，添加的太多会抑制菌丝的生长，所以一般60 l左右的培养料应添加20 ml左右。食用油及其它的消泡剂虽也有消泡作用，但有些消泡作用不及泡敌或有抑菌作用，因此不可乱用。

参考文献

［1］ 张松.食用菌学.华南理工大学出版社，广州：1999

［2］ 袁彤兴.食用菌液体种深层发酵技术应用综述.食用菌，2001，（3）

［3］ 乔长晟，汤凤霞.金针菇液体发酵工艺条件的研究.宁夏农学院学报，2001，（3）42～43

［4］ 吴金男，昊良友，金针菇液体发酵的营养需求.中国食用菌，2003，（8）