E-cadherin在口腔扁平苔藓中的表达及意义

杜勇李浩渤

E-cadherin在口腔扁平苔藓中的表达及意义

杜勇李浩渤

【摘要】目的口腔扁平苔藓(OLP)是常见的口腔黏膜病变，部分OLP病例可发生癌变，E-cadherin是参与细胞间粘附连接的主要分子，在肿瘤的发生、发展及浸润转移中起到重要的作用，成为预示肿瘤进展及预后的重要指标之一。本实验的目的旨在检测E-cadherin在口腔扁平苔癣中的表达，探讨E-cadherin在OLP发病及癌变中的作用，为口腔扁平苔藓癌变的早期诊断和治疗提供依据。方法本研究使用52例口腔扁平苔藓标本蜡块和41例口腔正常黏膜标本蜡块。运用SP免疫组织化学法，以E-cadherin单克隆抗体作为一抗，用已知的E-cadherin阳性的正常口腔黏膜标本作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照，对切片标本进行免疫组化染色，观察阳性染色的分布及强度，对表达情况进行研究分析。结果在52例口腔扁平苔藓标本中25例呈正常阳性表达，27例呈现异常阳性表达，异常阳性率为51.92%;在41例正常口腔黏膜标本中39例呈正常阳性表达，2例呈现异常阳性表达，异常阳性率为4.88%，2组比较差异有统计学意义。结论E-cadherin在口腔扁平苔藓标本中的异常阳性表达率明显高于正常口腔黏膜，提示E-cadherin在口腔扁平苔藓恶变的过程中发挥着一定作用，进一步证实口腔扁平苔藓具有潜在恶变的可能。

【关键词】口腔扁平苔藓; E-钙粘蛋白;免疫组化

【中图分类号】R 781.5+9

【文献标识码】A

【文章编号】1002－7386(2015)16－2426－04

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2015.16.007

通讯作者:作者单位: 050000石家庄市，河北医科大学第二医院口腔内科李浩渤，050000河北医科大学第二医院口腔内科;E-mail: lhbkn@126.com

【Abstract】Objective To investigate the expression of E-cadherin in oral lichen planus(OLP)and to explore the role of E-cadherin in pathogenesis and carcinomatous change of OLP in order to provide scientific evidences for early diagnosis and treatment of OLP canceration.Methods Fifty-two OLP specimens were collected，at the same time，41 normal oralmucousmembrane specimens were served as control group.Using E-cadherinmonoclonal antibody as primary antibody，taking E-cadherin-positive normal oralmucousmembrane specimen as positive controls and using PBS as negative controls instead of primary antibody，these specimens were detected by immmunohistology(SP)to observe the distribution and intensity of positive staining，moreover，the expression of E-cadherin was analyzed.Results Twenty-five specimens out of the 52 OLP specimens showed normal positive expression of E-cadherin，however，the other 27 specimens showed abnormal positive expression of E-cadherin，with abnormal positive rate being 51.92%.However in control group，39 out of 41 specimens showed normal positive expression and 2 specimens showed abnormal positive expression，with abnormal positive rate being 4.88%，there was a significant difference between two groups.Conclusion The abnormal positive expression rate of E-cadherin in OLP is significantly higher than that in normal oralmucousmembrane，which suggests that E-cadherin plays a certain role in the canceration of OLP，and it is further confirmed that OLP is possible to be cancerated.

收稿日期:(2015－02－10)

Expression and significance of E-cadherin in oral lichen planus

DU Yong，LI Haobo.Department of Stomatology，The Second Hospital of Hebeimedical University，Shijiazhuang 050000，China

【Key words】oral lichen planus; E-cadherin; immunohistochemistry

口腔扁平苔藓(OLP)是一种常见的口腔黏膜病变，具体发病机制不详，可能包括抗原特异性和非特异性两种。抗原特异性机制包括基底角质细胞抗原提呈和CD+8细胞毒性T细胞杀伤抗原特异性角质细胞。非特异性机制包括肥大细胞脱粒和口腔扁平苔藓病变区基质金属蛋白酶被激活。研究发现部分OLP病例可发生癌变，癌变率为1%～2%［1－3］，同时某些癌基因或抑癌基因在OLP的异常表达也提示OLP具有癌变的危险性，故WHO将其列入“潜在恶性病变”的范畴［1，4］。研究表明，OLP癌变是多种因素共同作用导致上皮细胞增殖和凋亡的失衡，致癌基因、抑癌基因或某些信号通路出现异常，最终诱使OLP向恶性方向发展［5－7］。近年，部分学者对OLP是否癌变产生了疑问和争议，有学者认为OLP与其他口腔黏膜良性损害相比，并不存在更高的癌变危险性，并且认为OLP的上皮组织与潜在恶性病变或癌变的口腔组织不同，而与其他良性口腔病变相似，OLP的3个主要抑癌基因位点与轻、重度异常增生及口腔鳞状细胞癌(OSCC)相比有明显差异，与良性纤维瘤基本一致［8］。因此，若能发现与OLP癌变趋势相关的生物标记物，则可以对OLP患者的癌变风险做出科学评估。目前临床上判断癌变可能性的主要依据是通过病理切片来评价上皮异常增生的组织学形态，近年来，生物标记物的发展有助于更加客观地判断OLP患者所处的疾病阶段，并预

测癌变的潜在危险性，但是如何提高生物标记物的特异性和可靠性是该领域研究的难点之一。因此，若能发现OLP向口腔鳞癌转变趋势的生物标记物，则可以对OLP患者的癌变风险做出科学评估。目前关于E-cadherin在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达已有报道，但它在OLP中的表达情况鲜见报道，E-cadherin在OLP癌变过程中是否发挥作用有待研究。本研究拟采用免疫组化方法研究E-cadherin在OLP中的表达，旨在探讨E-cadherin在OLP发病及癌变中的作用，以期为口腔扁平苔藓癌变的早期诊断和临床治疗提供更多的理论依据。

1　资料与方法

1.1一般资料收集河北医科大学第二医院2005至2012年口腔扁平苔藓蜡块标本52例(所有患者在取标本前未经任何治疗)，每例标本均进行HE染色后经病理医师阅片后确诊。本组患者中男28例，女24例;年龄38～73岁，平均年龄52.6岁。对照组:正常口腔黏膜组织41例，均取自囊肿旁及牙槽骨整形手术时切除的正常黏膜组织，每例均进行HE染色后经病理医师阅片后确诊。其中男22例，女19例;年龄21～68岁，平均年龄31.6岁。2组一般资料具有均衡性。

1.2对照实验用已知的E-cadherin阳性的正常口腔黏膜标本作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3实验方法运用SP免疫组织化学法，以E-钙粘蛋白单克隆抗体作为一抗，对切片标本进行免疫组化染色，观察阳性染色的分布及强度，对表达情况进行研究分析。所有标本均经10%甲醛固定，石蜡重新包埋后，将每个蜡块切为5 μm的切片，共切3张，1张HE染色，1张E-钙粘蛋白染色，1张作为阴性对照。一抗:兔抗人E-cadherin单克隆抗体、二抗:生物素标记羊抗兔IgG。

操作步骤如下:石蜡切片常规脱蜡至水; 3% H2O2甲醇振洗25min，以封闭内源性过氧化物酶活性;微波抗原修复，(92～98)℃×15min，室温冷却;正常山羊血清封闭，37℃孵育30min;倾去血清，滴加一抗，4℃过夜;滴加生物素化二抗，37℃孵育25min;滴加辣根酶标记的链酶卵白素，37℃孵育20min; DAB显色，苏木素复染，脱水、透明、封片。

上述步骤中，除正常山羊血清封闭一步，其余每步后均以PBS振洗5min×3次。实验中主要试剂:一抗:兔抗人E-cadherin单克隆抗体(购自中国武汉博士德生物公司)、二抗:生物素标记羊抗兔IgG(购自中国武汉博士德生物公司)、SP免疫组化试剂盒、DAB显色剂、多聚赖氨酸(Poly-L-lysine)防脱片剂(购于河北博海生物有限公司)。

1.4结果判定E-cadherin以细胞膜上出现棕黄色膜性染色作为正常阳性表达的标记。而位于细胞浆中或胞膜与胞浆共同有连续线状或斑点状黄色至棕黄色颗粒沉积者为异常阳性表达，无染色者为阴性表达。1.5统计学分析应用SPSS 17.0统计软件，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1 E-cadherin在口腔正常黏膜和扁平苔藓中的表达在41例正常口腔黏标本中39例呈正常阳性表达，2例呈异常阳性表达，异常阳性率为4.88%;在52例口腔扁平苔藓标本中25例呈正常阳性表达，27例呈现异常阳性表达，异常阳性率为51.92%，差异有统计学意义(χ2=23.64，P＜0.05)。见表1，图1、2。

图2　E-cadherin在扁平苔藓中的表达(SP×400)

图1　E-cadherin在正常黏膜中的表达(SP×400)

表1　E-cadherin在2种黏膜中表达比较　例

2.2 E-cadherin的表达和临床病理参数的关系在性别和年龄的对照中，E-cadherin在口腔扁平苔藓中的表达差异无统计学意义(P＞0.05)。见表2。

表2　E-cadherin的表达和临床病理参数的关系　例

3　讨论

OLP是口腔黏膜的一种免疫性炎症性疾病，其病因与局部慢性损伤、药物刺激、精神紧张、全身性疾患、细菌、病毒感染等有关。目前认为OLP是一种由外源性抗原或自身抗原导致的、由细胞免疫介导的口腔黏膜基底角质细胞的慢性免疫破坏性疾病。目前多数学者支持口腔扁平苔藓是癌前状态，是一种具有恶性转变风险的慢性口腔黏膜病，经过一系列复杂的过程可能转变为口腔鳞状细胞癌(OSCC)。OLP癌变是多种

因素共同作用的结果，在局部免疫制剂、病毒感染、致癌剂和细胞因子等因素的共同作用下，组织发生癌基因活化、染色体突变和抑癌基因的异常，最终导致组织发生癌变。近些年关于OLP癌变机制及有关基因的研究受到广泛重视，对于OLP癌变的早预防、早诊断和早治疗都具有重要意义。

E-cadherin是一类介导同源细胞间粘附的钙离子依赖性跨膜糖蛋白，属于钙依赖性的Ⅰ型细胞粘附分子，主要存在于人和动物上皮细胞，是哺乳动物发育过程中第一个表达的钙粘蛋白。E-cadherin影响胚胎发育中细胞的分化，参与组织器官的形成，在细胞间粘附中发挥着细胞极性和组织完整性的功能，对维持上皮细胞形态和组织完整性发挥重要作用。E-cadherin介导的细胞间粘附力减弱，使细胞获得浸润性和游走性迁移能力，从而有利于肿瘤细胞在继发部位生长增殖，形成新的病灶。进一步研究发现E-cadherin介导了多种细胞的不贴壁生长，而且E-cadherin裂解片段在许多病变中发挥着重要作用，包括细胞连接的破坏、细胞迁移、侵袭及信号的激活，提示E-cadherin同时具有着促癌的作用［9，10］。研究已证实在多种上皮来源的恶性肿瘤中，如结肠癌、胃癌、胰腺癌、食管癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、子宫癌等均发现E-cadherin的异常表达［11－13］，提示E-cadherin与肿瘤的病理特征和生物学行为密切相关。E-cadherin不仅在肿瘤的发生、发展及浸润转移中发挥了重要的作用，而且在癌前病变的发展中也发挥了重要的作用，如口腔黏膜白斑、宫颈癌的癌前病变上皮内瘤样病变中也发现了E-cadherin的异常表达［14，15］，可以作为肿瘤早期诊断和预防的可靠指标。

E-cadherin是一种钙依赖性的细胞粘附分子，编码基因定位于16q21，其N端位于细胞外而C端位于细胞内，属于钙粘蛋白超家族，是一种重要的细胞粘附分子，主要调节细胞与细胞之间、细胞与基质之间的粘附反应，维持组织结构形态和完整性。E-cadherin介导的粘附连接在维持上皮细胞极性和抑制细胞迁移能力方面发挥着重要的作用［17，18］。作为是一种重要的抑癌分子，E-cadherin主要通过加强细胞间的粘附和抑制细胞增殖来发挥抑癌功能。E-cadherin基因表达改变在肿瘤的发生、发展过程及浸润转移中起到重要的作用，与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、远处转移和复发率密切相关，成为预示肿瘤进展及患者预后的重要指标之一［19，20］。通过对多种肿瘤中E-cadherin表达的研究发现在多种肿瘤组织中均伴有E-cadherin基因的突变和功能改变，呈现表达减少或消失，同时伴有癌组织侵袭性和转移能力增加［21－23］，证明了E-cadherin的减少或丢失可以成为上皮细胞间质样转变的标志性变化，细胞外的信号通过多种信号转导调控机制活化不同的转录因子，调节下游蛋白的表达，E-cadherin作为这个调控网络的核心，通过改变肿瘤细胞的表型使迁移到新的位置的肿瘤细胞获得上皮样的表型，在继发部位生长增殖，形成新的病灶，在肿瘤的发展、侵袭及转移中发挥了重要的作用［24－26］。OLP作为OSCC的癌前病变，E-cadherin是否在其发生、发展及恶变过程中起到一定作用，罕见文献报道。

在本实验中检测了E-cadherin在41例正常口腔黏膜标本和52例口腔扁平苔藓标本中的表达，结果显示E-cadherin在2组中的表达具有显著差异，在口腔扁平苔藓标本中E-cadherin的膜性表达率明显低于在正常黏膜中的表达，膜性表达的丧失提示E-cadherin在口腔扁平苔藓恶变的过程中发挥着一定作用，口腔扁平苔藓具有潜在恶变的可能，据此我们支持OLP具有癌变危险性的观点，认为OLP是一种潜在恶性病变。口腔白斑与OLP同样为常见的口腔黏膜癌前病变，已证实口腔白斑中E-cadherin呈现异常表达，这与本实验的结果基本一致，在一定程度上佐证了本实验的准确性，支持了本实验的结论。

总之研究已证实E-cadherin涉及多条致癌通路，本研究以E-cadherin作为实验指标，观察其在OLP中的表达情况，对E-cadherin在口腔扁平苔藓癌变中的作用做进一步的探讨，以期为口腔扁平苔藓癌变的早期诊断和临床治疗提供更多的理论依据。

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