辅助生殖技术促排卵周期中无特异性病变宫腔积液对精子和胚胎发育的影响

金华，丁家怡(南通妇幼保健院，江苏南通226006)

辅助生殖技术促排卵周期中无特异性病变宫腔积液对精子和胚胎发育的影响

金华，丁家怡
(南通妇幼保健院，江苏南通226006)

摘要:目的观察辅助生殖技术促排卵周期中的无特异性病变宫腔积液(简称宫腔积液)对人高活力精子和小鼠胚胎发育潜能的影响。方法观察组将宫腔积液分别与精子培养液和胚胎培养液按体积浓度分别配制成25%、50%、75%、100%，对照组为单纯精子或胚胎培养液，在相应培养液中分别加入高活力人类精子和2细胞小鼠胚胎;观察接触宫腔积液后精子前向运动率和存活率，以及小鼠胚胎培养后囊胚形成率和孵出囊胚形成率。结果与对照组相比，观察组精子前向运动率、存活率及小鼠囊胚形成率、孵出率明显降低( P均＜0.05)，且随宫腔积液浓度增加降低更明显( P均＜0.05)。结论宫腔积液可降低人高活力精子的运动和受精能力，同时降低胚胎发育潜能。

关键词:辅助生殖技术;宫腔积液;精子;胚胎

近年来，控制性促排卵在人工授精( IUI)和体外受精—胚胎移植( IVF-ET)等辅助生殖技术中广泛应用，但超生理剂量的激素常产生无特异性病变的宫腔积液(以下简称宫腔积液)。2014年5～12月，我们观察了人精子和小鼠胚胎在不同浓度宫腔积液中的发育情况，探讨宫腔积液对精子和胚胎发育潜能的影响。现报告如下。

1　材料与方法

1.1材料人高活力精子来自12位正常成年已婚已育男性(年龄26～30岁，体质量62～75 kg)手淫取精;按手册［1］检测精液正常，以上游法处理获得高活力精子，置于精子培养液中备用。取6～8周昆明小鼠190只(雌性130只，雄性60只)，雌鼠腹腔注射人绝经期促性腺激素10 IU/只，48 h后腹腔注射人绒毛膜促性腺激素10 IU;然后按雌雄比例1∶1合笼，次日清晨检查雌鼠阴栓;处死hCG注射36 h后阴道有精液栓的雌鼠，在输卵管膨大部寻找小鼠胚胎;将2细胞胚胎放入已经过夜平衡的胚胎培养液中备用，共获得1 920枚。宫腔积液来自32例2014年5～12月在本院生殖医学中心行辅助生殖技术促排卵周期中发现宫腔积液的患者，积液收集后置离心管400 g离心力离心20 min，去除底部沉渣，最后用直径0.22 μm过滤器过滤后置4℃冰箱，使用前复温。

1.2宫腔积液对人高活力精子的作用观察观察组将宫腔积液与精子培养液按体积浓度( v/v)分别配制成25%、50%、75%、100%，对照组为单纯精子培养液;分别加入5万条高活力精子，混匀后置于37℃、5% CO2、5% N2、饱和湿度的培养箱中培养;培养24 h时，分析各组精子前向运动率(前向运动精子数/精子总数)和存活率(活动精子数/精子总数)［1］。

1.3宫腔积液对小鼠2细胞胚胎发育的作用观察观察组将宫腔积液与胚胎培养液按体积浓度( v/v)分别配制成25%、50%、75%、100%，对照组为单纯胚胎培养液;将培养液分别在培养皿中制作15个液滴( 20 μL/滴)，每浓度3滴，每滴内放入4枚2细胞小鼠胚胎;将培养皿置于37℃、5% CO2、5% N2、饱和湿度的培养箱中培养;于小鼠注射HCG后108、120、132、144 h时，观察并记录囊胚形成总数和囊胚孵出总数，计算囊胚形成率(囊胚形成总数/胚胎总数)和孵出囊胚形成率(囊胚孵出总数/胚胎总数)。

1.4统计学方法采用SPSS19.0统计软件。计量资料以珋x±s表示，组间比较采用单因素方差分析;计数资料组间比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1宫腔积液对高活力精子的影响两组精子前向运动率和存活率比较，见表1。

2.2宫腔积液对小鼠2细胞胚胎发育的影响两组囊胚形成率及孵出囊胚形成率比较，见表2。

表1　两组精子前向运动率和存活率比较( %，±s)

表1　两组精子前向运动率和存活率比较( %，±s)

注:与对照组比较，*P＜0.05;与同组上一浓度比较，#P＜0.05。

组别　　精子前向运动率　　精子存活率观察组25%　53.7±7.1*　85.3±5.7*50%　37.4±6.0* #　54.6±8.9* #75%　14.2±4.1* #　27.9±6.4* #100%　5.8±2.7* #　19.3±4.7* #对照组66.5±8.2　91.3±5.5

表2　两组囊胚形成率及孵出囊胚形成率比较( n =384)

3　讨论

近年来，不孕症在我国的发病率不断攀升［2］，辅助生殖技术成为众多不孕不育患者首选的治疗方法。辅助生殖技术主要包括宫腔内IUI、IVF-ET、单卵胞质内单精子注射( ICSI)等，这些新技术的出现为无数患者解决了生育难题，但是辅助生殖技术也带来了一系列并发症，包括出血、感染、流产［3］以及大量超生理剂量激素的应用而引起的卵巢过度刺激综合征［4］等。辅助生殖技术促排卵周期中宫腔积液发生率较低(＜11%)［5］，其发生机制目前尚未明确。有研究认为，输卵管积液可能是导致宫腔积液的主要原因［6］。此外，促排卵治疗周期中大剂量激素使用，可能也是宫腔积液发生的原因之一［7］。目前，宫腔积液对精子和胚胎的毒副作用仍不清楚。研究表明，宫腔积液可导致子宫内膜白细胞和白细胞介素2表达水平升高，从而加强子宫内膜炎症反应［8］，这可能是人工授精和IVF失败的原因之一［9，10］。此外，宫腔积液中缺乏各种营养物质和生长因子，可能也是胚胎发育停滞最终造成妊娠失败的原因［11］。目前，宫腔积液对人工授精影响的相关研究较少。本研究发现，与对照组比较观察组精子前向运动率存活率均明显降低( P均＜0.05) ;并且，随着宫腔积液浓度的增加，影响程度逐渐加重。由此可见，宫腔积液极大减少了精子通过宫腔最终到达输卵管壶腹部的数量，这可能是人工授精失败的原因之一。

目前，多数生殖中心在IVF周期中移植第3天的胚胎。这就意味着移植后的胚胎将在宫腔内继续发育2～3 d，直至孵出种植于子宫内膜，此时的子宫内环境对胚胎发育的影响极大。本研究发现，胚胎在与宫腔积液接触后，随着宫腔积液浓度的增加，发育逐渐受到影响，囊胚形成率逐渐下降，孵出囊胚的比率也同时下降。表明胚胎发育受到较大影响，宫腔积液降低了胚胎的发育潜能。

综上所述，在辅助生殖技术促排卵周期中产生的宫腔积液可降低精子的运动和存活率，影响胚胎的发育潜能和孵化能力，从而影响辅助生殖治疗结果。

参考文献:

［1］谷翊群，陈振文.世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册［M］.5版.北京:人民卫生出版社，2011: 118-120.

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［4］邹薇薇，曹云霞.辅助生殖技术的并发症及预防策略［J］.生殖医学杂志，2014，23( 3) : 183-186.

［5］Chien LW，Au HK，Xiao J，et al.Fluid accumulation within the uterine cavity reduces pregancy rates in women undergoing IVF ［J］.Hum Reprod，2002，17( 2) : 351-356.

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［7］石海霞，杭木兰.足月胎膜早破残余羊水量对妊娠结局的影响［J］.武警医学，2015，26( 5) : 437-439.

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［9］Lee RK，Yu SL，Chih YF，et al.Effect of endometrial cavity fluid on clinical pregnancy rate in tubal embryo transfer ( TET)［J］.Assist Reprod Genet，2006，23( 5) : 229-234.

［10］Strandell A，Lindhard A.Why does hydrosalpinx reduce fertility? The importance of hydrosalpinx fluid［J］.Hum Reprod，2002，17 ( 5) : 1141-1145.

［11］Jastrow N，Chardonnens D，Araman M，et al.Effect of hydrosalpinx fluid on secretion of tropholastic matrix metallop reteinases ［J］.Fertil Steril，2002，77( 3) : 588-594.

收稿日期:( 2015-03-10)

文章编号:1002-266X( 2015) 30-0026-02

文献标志码:A

中图分类号:R711

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.30.009