藏药十五味乳鹏丸抗痛风药效学研究

王木兰，许　溪，龚　琴，黄何松，陈兰英,，罗颖颖，杨世林，李　俊,*

(1.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，南昌　330006；2.江西中医药大学，南昌　330004)



藏药十五味乳鹏丸抗痛风药效学研究

王木兰1，许溪1，龚琴1，黄何松2，陈兰英1,2，罗颖颖2，杨世林2，李俊1,2*

(1.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，南昌330006；2.江西中医药大学，南昌330004)

摘要：目的研究藏药十五味乳鹏丸抗痛风作用。方法采用氧嗪酸钾致小鼠高尿酸血症实验观察十五味乳鹏丸的降尿酸作用；采用醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加、二甲苯致小鼠耳肿胀实验观察十五味乳鹏丸的抗炎作用；采用醋酸致小鼠扭体反应观察十五味乳鹏丸的镇痛作用。结果藏药十五味乳鹏丸能显著性降低高尿酸血症小鼠血清尿酸(P<0.05)明显抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加及二甲苯致小鼠耳肿胀，并能明显减少醋酸致小鼠扭体反应次数。结论藏药十五味乳鹏丸具有明显的抗痛风作用。

关键词：藏药十五味乳鹏丸；高尿酸血症；痛风；抗炎；镇痛

藏药十五味乳鹏丸由决明子、乳香、诃子、宽筋藤、铁棒锤、渣驯膏、藏菖蒲等十五味藏药材组成，藏医主要用于治疗关节疼痛、肿胀、关节腔积水等证[1]。藏药十五味乳鹏丸用药历史悠久，疗效确切，在《四部医典》、《藏医札记》中早有记载，现代临床主要用于治疗痛风，疗效显著。查阅相关研究文献，大多集中在临床疗效观察[2-3]，实验研究资料缺乏，本实验对十五味乳鹏丸抗痛风药效作用研究，为其临床应用和推广提供科学依据。

1仪器与材料

1.1仪器UV-1800型紫外分光光度计，北京瑞利分析仪器公司生产。

1.2试药十五味乳鹏丸，由甘肃省中药现代制药工程研究院有限公司提供，批号20140513；别嘌醇，上海信宜万象药业，批号111102；复方乙酰水杨酸，远大医药(中国)有限公司，批号131006；吲哚美辛肠溶片，山西云鹏制药有限公司，批号A130803；所有受试药物临用前用Millipore纯水配成所需浓度。氧嗪酸钾，Sigma公司，批号STBC1486V，用5 g·L-1的羧甲基纤维素钠配制；伊文思蓝，Sigma公司，E2129-10G，批号00801KHV，生理盐水配制；二甲苯，分析纯，批号20131202，天津市福晨化学试剂厂；冰醋酸，分析纯，批号20140609，广东光华科技股份有限公司，生理盐水配制；尿酸试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号20140528。

1.3动物昆明种小鼠，雄性，16～18 g，购于上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号：SCXK(沪)2012-0002，适应性喂养7 d，用于实验。

2方法

2.1对氧嗪酸钾致高尿酸血症小鼠的影响40只雄性KM小鼠，随机分为4组：正常组、模型组、别嘌醇组(15 mg·kg-1)和十五味乳鹏丸组(400 mg·kg-1)，每组10只，正常组和模型组灌胃生理盐水，给药组灌胃相应的药液，20 mL·kg-1，每天给药1次，连续5 d。末次给药前1 h，除正常组外，其余各组动物腹腔注射450 mg·kg-1氧嗪酸钾建立高尿酸血症模型[4]，正常组注射等体积的5 g·L-1羧甲基纤维素钠，给药后1 h，小鼠眼眶静脉取血0.5 mL，室温放置1 h，以3 500 r·min-1离心，取血清，按照尿酸试剂盒说明书检测血清尿酸(SUA)水平。

2.2对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响30只雄性KM小鼠随机分为模型组、复方乙酰水杨酸组(405 mg·kg-1)和十五味乳鹏丸组(400 mg·kg-1)，共3组，每组10只，模型组灌胃等体积的生理盐水，给药组灌胃相应的药液，20 mL·kg-1，每天给药1次，连续5 d。末次给药前禁食16 h，给药1 h后，每只小鼠尾静脉注射5 g·L-1伊文思蓝10 mL·kg-1量，随即腹腔注射0.2 mL体积分数为0.6%的冰醋酸溶液，20 min后立即处死小鼠，用6 mL生理盐水分2次清洗腹腔，收集洗液，置于紫外分光光度计590 nm处测量洗液的A值[5]。

2.3对二甲苯诱导小鼠耳肿胀的影响30只雄性KM小鼠随机分为模型组，吲哚美辛组(20 mg·kg-1)和十五味乳鹏丸组(400 mg·kg-1)，共3组，每组10只，各组灌胃相应的药液，20 mL·kg-1，模型组灌胃等体积的生理盐水，十五味乳鹏丸每天给药1次，连续给药5 d，阳性药仅在最后1 d给药1次。最后一次给药前禁食16 h，给药后1 h，将二甲苯涂于小鼠右耳前后两面，50 μL·只-1；1 h后将小鼠颈椎脱臼处死，沿耳廓基线剪下两耳，用6 mm打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称质量，计算肿胀度[5-6](以两耳质量之差为肿胀度指标)。

2.4对醋酸致小鼠扭体反应的影响30只雄性KM小鼠随机分为模型组、复方乙酰水杨酸组(405 mg·kg-1)和十五味乳鹏丸组(400 mg· kg-1)，共3组，每组10只，各组灌胃相应的药液，20 mL·kg-1，模型组灌胃等体积的生理盐水，十五味乳鹏丸每天给药1次，连续给药5 d，阳性药仅在最后1 d给药1次。末次给药前动物禁食16 h，给药后1 h，腹腔注射体积分数为0.6%醋酸，0.2 mL·只-1，记录动物造模后20 min内扭体次数[5，7]。

3结果

3.1对氧嗪酸钾致高尿酸血症小鼠的影响十五味乳鹏丸400 mg·kg-1可显著性降低高尿酸血症小鼠血清尿酸(P<0.05)，结果见表1。

表1十五味乳鹏丸对高尿酸血症小鼠血清尿酸的影响

Tab.1 Effects of Shiwuweirupeng Pills on the serum uric acid levels in the hyperuricemic mice

组别剂量/mg·kg-1UA/μmol·L-1正常组-126.43±26.37**模型-225.69±73.09十五味乳鹏丸400153.11±34.79*别嘌醇15155.74±54.80*

注：与模型组比较*P<0.05，**P<0.01。

3.2对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的影响十五味乳鹏丸800 mg·kg-1可明显抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高(P<0.05)，提示十五味乳鹏丸有抑制炎症早期毛细血管通透性亢进的作用，结果见表2。

表2十五味乳鹏丸对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响

Tab.2 Effects of Shiwuweirupeng Pills on acetic acid-induced the permeability of abdominal capillary in mice

组别剂量/mg·kg-1A模型组-0.27±0.09十五味乳鹏丸8000.13±0.05*4000.27±0.16复方乙酰水杨酸4050.14±0.08*

注：与模型组比较*P<0.05，**P<0.01。

3.3对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响十五味乳鹏丸400 mg·kg-1对二甲苯所致的小鼠耳肿胀有明显的抑制作用(P<0.05)，结果见表3。

3.4对醋酸致小鼠扭体反应的影响十五味乳鹏丸400 mg·kg-1能明显减少醋酸刺激引起的扭体次数(P<0.05)，提示十五味乳鹏丸对外周化学性刺激引起的疼痛有明显的镇痛作用，结果见表4。

表3十五味乳鹏丸对二甲苯诱导小鼠耳肿胀的影响

Tab.3 Effects of Shiwuweirupeng Pills on dimethylbenzene-induced swelling of ear in mice

±s，n=10)

组别剂量/mg·kg-1肿胀度/mg模型组-7.11±1.53十五味乳鹏丸4005.44±1.61*吲哚美辛205.10±1.14**

注：与模型组比较*P<0.05，**P<0.01。

表4十五味乳鹏丸对醋酸致小鼠扭体反应的影响

Tab.4 Effects of Shiwuweirupeng Pills on acetic acid-induced writhing in mice

±s，n=10)

组别剂量/mg·kg-1扭体次数/次模型组-17.2±10.8十五味乳鹏丸4006.2±5.3*复方乙酰水杨酸4054.1±4.4**

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

4讨论

十五味乳鹏丸作为藏医治疗痛风性关节炎的重要成药，其临床疗效确切。尕藏久美等[3]观察藏药赛志当尼丸、十五味乳香散、风湿止痛散联合藏医外治法治疗痛风性关节炎的疗效及免疫调节作用，结果治疗组采用藏医组方，总有效率为 90.62%；高嘉彬等[2]观察藏药十五味乳鹏丸治疗痛风性关节炎的疗效及免疫调节作用，结果94.9%的受试者治疗后综合疗效为有效。另有研究结果显示，十五味乳鹏丸对混合致炎剂引起小鼠的耳廓肿胀、肉芽组织增生有明显的抑制作用[8]；寇毅英等[9]报道十五味乳鹏丸可延长小鼠热痛反应阈值、减少醋酸所致小鼠扭体反应的次数、对醋酸所致的小鼠毛细血管通透性增加及蛋清所致大鼠足趾肿胀有明显的抑制作用。

以上研究资料表明，十五味乳鹏丸具有一定的镇痛、抗炎作用，为其抗痛风药理作用奠定了研究基础，但痛风是一种由于嘌呤代谢紊乱、尿酸生成过多和(或)尿酸排泄减少引起的代谢性疾病，其临床特点表现为高尿酸血症、急性痛风性关节炎反复发作、痛风石沉积、特征性慢性关节炎和关节畸形，常累及肾引起慢性间质性肾炎和肾尿酸结石形成。痛风最重要的生化基础是高尿酸血症，本文在采用醋酸致小鼠扭体反应、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加及二甲苯致小鼠耳肿胀实验观察十五味乳鹏丸镇痛、抗炎作用的基础上，还采用了尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾致小鼠高尿酸血症模型，观察十五味乳鹏丸对高尿酸血症小鼠血清尿酸的影响。实验结果显示，十五味乳鹏丸可明显减少醋酸致小鼠扭体反应次数、抑制醋酸致小鼠毛细血管通透性增加及抑制二甲苯致小鼠耳肿胀，表现出明显的镇痛、抗炎作用，与文献报道一致；对高尿酸血症小鼠血清尿酸有明显的降低作用，提示十五味乳鹏丸可从根本上防治痛风，在降低血清尿酸的同时可缓解痛风发作时的疼痛和炎症反应。

本研究结合痛风的特点，通过十五味乳鹏丸抗高尿酸血症、抗炎及镇痛作用进一步阐明了十五味乳鹏丸的抗痛风药理作用，为其临床应用和推广提供实验依据，但其抗痛风机制和物质基础还有待进一步研究。

参考文献：

[1]中华人民共和国卫生部药品标准：藏药：第一册[S]．1995:199．

[2]高嘉彬，王超．十五位乳鹏丸治疗痛风性关节炎59例疗效评价[J]．中国医学创新，2010，7(23)：37-39．

[3]尕藏久美，马玉龙．藏医治疗痛风性关节炎的临床疗效

观察[J]．亚太传统医药，2006(12)：42-43．

[4]Niu Y F，Lu W，Gao L H，et al．Reducing effect of mangiferin on serum uric acid levels in mice[J]．Pharm Biol，2012，50(9)：1177-1182．

[5]陈奇．中药药理研究方法学[M]．2版．北京：人民卫生出版社，2006:346-351．

[6]陈孝娟，顾政一，黄华，等．石榴皮总多酚抗菌消炎作用的初步研究[J]．西北药学杂志，2011，26(4)：268-270．

[7]胡迎庆，刘岱琳，周运筹，等．老鹤草的抗炎、镇痛活性研究[J]．西北药学杂志，2003，18(3)：113-115．

[8]刘卫建，拉珍．十种藏成药的抗炎作用及毒性[J]．1991，6(1)：22-24．

[9]寇毅英，李永芳，杨梅，等．藏药十五味乳鹏散镇痛抗炎作用的实验研究[J]．中成药，2014，36(10)：2203-2205．

Study on the anti-gout effects of Tibetan medicine Shiwuweirupeng Pills

WANG Mulan1，XU Xi1，GONG Qin1，HUANG Hesong2, CHEN Lanying1,2，LUO Yingying2, YANG Shilin2，LI Jun1,2*(1.National Pharmaceutical Engineering Center for Solid Preparation in Chinese Herbal Medicine，Nanchang 330006，China；2.Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330004，China)

Abstract:Objective To study the anti-gout effects of the Tibetan medicine Shiwuweirupeng Pills. Methods The hypouricemic effect of Shiwuweirupeng Pills was investigated in oxonate-induced hyperuricemia mice. The serum urate levels were determined using the phosphotungstic acid method. The anti-inflammatory effect of Shiwuweirupeng Pills was evaluated by the permeability of abdominal capillary by injecting glacial acetic acid and the swelling of ear induced by dimethylbenzene in mice. The antinociceptive effect of Shiwuweirupeng Pills was tested in male mice using the acetic acid-induced writhing test. Results Tibetan medicine Shiwuweirupeng Pills significantly reduced the serum urate levels in hyperuricemia mice(P<0.05)，the capillary permeability by injecting glacial acetic acid，the swelling of ear induced by dimethylbenzene in mice and the number of stretches in acetic acid-induced writhing test. Conclusion Tibetan medicine Shiwuweirupeng Pills have significant anti-gout effects.

Key words:Tibetan medicine Shiwuweirupeng Pills；hyperuricemia；gout；anti-inflammatory；analgesia

收稿日期：(2015-05-06)

通信作者：*李俊，男，博士，副教授

作者简介：王木兰，女，研究实习员，硕士研究生

中图分类号：R285.5

文献标志码：

文章编号：1004-2407(2016)01-0067-04

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.01.021