P63阳性基底细胞在前列腺切除术后尿道再上皮化中的作用



P63阳性基底细胞在前列腺切除术后尿道再上皮化中的作用

刘旋1，2，孙兆林2

(1.遵义医学院，贵州遵义563000; 2.贵州省人民医院泌尿外科，贵州贵阳550000)

【摘要】目的:探讨前列腺切除术后P63阳性基底细胞在前列腺部尿道上皮修复过程中的作用。方法: 15只老年家犬行前列腺增生切除术，术后第3、7、14天取材行HE染色和免疫组织化学染色分别观察前列腺部尿道上皮修复过程和P63蛋白表达水平。结果:术后3 d手术创面偶见P63阳性细胞;术后7 d可见片状P63阳性细胞，且这些细胞与残余前列腺组织相连续;术后14 d可见新生尿道上皮基底层细胞阳性表达P63。结论:残余前列腺组织是BPH术后尿道再上皮化的重要组织，而位于基底层的P63阳性细胞可能是这一修复过程的源细胞之一。

【关键词】前列腺切除术; P63;尿路上皮;再上皮化

良性前列腺增生是老龄男性的常见疾病，经尿道前列腺切除手术是治疗重度症状性前列腺增生的重要手段。迄今，经尿道前列腺切除手术得并发症仍然没有得到有效的改善，这与术后尿路上皮的修复息息相关，术后尿路上皮修复机制、修复过程尚未阐明。Eduardo和作者前期的研究结果显示修复前列腺部尿道的尿路上皮主要源于残余的前列腺上皮和导管内皮，但其具体的修复机制有待进一步研究［1-3］。

P63基因位于染色体3q27-28，在DNA结合域与P53基因具高度同源性，被认为是P53基因家族的新成员［4］。P63在前列腺发育过程中起重要作用，并证实其在前列腺基底细胞中表达［5］。因此，本研究试图建立犬前列腺切除模型，探讨前列腺切除术后前列腺部尿道的修复过程，再上皮化的细胞来源，以及P63阳性的前列腺基地细胞是否在这一修复过程中发挥作用。

1　材料和方法

1.1实验动物

成年雄性中华田园犬15只(购于遵义医学院实验动物场)，年龄5～6岁，体重18～20 kg。

1.2犬前列腺切除术模型

前列腺切除术模型参见［3］。术前1 d禁食不禁水，水合氯醛(0.3 mL/100 g)麻醉的雄性中华田园犬仰卧位固定于手术台上，手术台呈斜坡位，方便冲洗液的流出。下腹部耻骨上正中切口，约4 cm，逐层切开，暴露膀胱。设立实验组和对照组。实验组插入电切镜，直视下由尿道内口进入前列腺部尿道，持续移动光纤，完成前列腺切除，切除前列腺部尿路上皮和增生前列腺组织，避免损伤前列腺包膜。术中以生理盐水作为冲洗液，术毕缝合膀胱，关闭腹腔，术后均不带导尿管。对照组仅切开膀胱后缝合，不完成前列腺切除术步骤。

1.3取材

前列腺汽化切除术后第3、7、14天，水合氯醛(0.3 mL/100 g)麻醉后处死犬。取手术创面和正常的前列腺部尿道组织作进一步研究。

1.4苏木精-伊红(Haematoxy-eosin，HE)染色

组织标本经多聚甲醛固定、乙醇梯度脱水、石蜡包埋，切取4 μm厚切片制成石蜡切片。

切片再经二甲苯脱蜡、梯度酒精、苏木精染色、伊红染色、梯度酒精脱水、二甲苯透明后中性树胶封片。

1.5组织免疫组织化学染色

石蜡切片用3％ H2O2-甲醇以阻断内源性过氧化物酶活性后，1％ BSA封闭30 min，滴加一抗P63 (1∶200)，4℃孵育过夜; PBS冲洗后滴加二抗，PBS冲洗;滴加DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片后镜检。PBS代替一抗作阴性对照。

2　结果

2.1正常对照组犬前列腺部尿路上皮细胞组织图

图1中可见，在犬前列腺部尿道部，可见6～10层上皮细胞组成厚薄不一的正常尿路上皮，包括基底层、中间层及伞状细胞层。

图1　正常前列腺部尿路上皮HE染色（400X）

2.2手术后前列腺部创面的组织形态学变化

术后第3天，实验组犬手术部位有凝固块状坏死，坏死组织周围炎症反应严重，创面大量的炎症细胞渗出。炎症细胞主要包括单核细胞、中性粒细胞和淋巴细胞，以中性粒细胞为主。凝固性坏死组织上可见零星、散在的上皮细胞。术后1周，炎症反应仍然明显，组织间水肿，光镜下可见大量的炎症细胞在手术区域形成较厚的渗出层。坏死层明显变薄，肉芽组织增生，血管扩张，成纤维细胞明显增加。凝固性坏死组织上可见新生的点片状、片状单层上皮细胞覆盖。术后2周，手术创面基本修复，上皮细胞完全覆盖创面，细胞缺乏极性，上皮之间偶有点状缺损，细胞厚薄不均，最薄处仅2～3层，最厚处可达6～8层。新生上皮下仍有炎症细胞浸润，血管扩张，组织轻度水肿等炎性反应。

2.3前列腺部尿道尿路上皮P63的表达水平

P63阳性表达为胞核着色，胞核呈棕褐色的细胞为P63阳性细胞。在对照组，正常前列腺部尿道上皮基底层在连续、不间断的细胞核基底细胞，基地细胞P63蛋白表达胞核呈棕黄色。同样在前列腺腺管的基地细胞的胞核也呈棕黄色的表达。手术组在正常前列腺部尿道尿路上皮细胞术后第3天前列腺部尿道上皮偶见P63阳性表达细胞，P63蛋白表达胞核呈棕黄色;术后1周手术创面创面可见岛连续新生的上皮细胞表达P63阳性(图2);术后14 d前列腺部新生的尿道上皮基底层细胞P63阳性表达较均匀(图3)。

图2　术后1周手术创面可见岛连续新生的上皮细胞表达P63阳性(HE×400)

图3　术后2周前列腺部尿道上皮P63阳性在尿路上皮基地层细胞均匀表达(HE×400)

3　讨论

前列腺切除术后，前列腺部尿道的再上皮化是前列腺切除术后修复的重要步骤。术后血尿，尿道狭窄，尿痛和尿路感染与前列腺部尿道是否能再上皮化息息相关。为探讨这一过程，作者序贯观察前列腺切除后犬前列腺部尿道再上皮化过程。结果显示:术后有大量的炎症细胞渗出和新生细胞在1周内出现，在整个修复过程中，未见来源于近端膀胱颈或精阜远端的上皮爬行覆盖手术创面的迹象。因此，前列腺切除术后前列腺部尿道的再上皮化来源于膀胱颈或精阜远端的上皮爬行覆盖手术创面的可能性较小，而残余前列腺组织有可能是前列腺部尿道再上皮化的重要组织来源之一。

Apodaca等［6-7］认为前列腺腺体的再生可能源于基底细胞的增殖和分化。本实验研究通过免疫组化检测基底细胞特异性的标记P63来观察基底细胞是否参与前列腺部尿道的再上皮化过程。实验结果表明: P63在增生的前列腺组织的腺管和腺泡的基底细胞均呈高表达，术后1周手术创面可见连续新生的上皮细胞表达P63阳性;术后1周和2周前列腺部新生的尿道上皮基底层细胞P63均呈阳性表达。在术后1周，前列腺部尿道再上皮化过程中均能显著观察到残余前列腺的腺管或腺泡状结构中的P63阳性细胞的参与。

综上所述，作者认为前列腺切除术后残余前列腺组织是前列腺尿道再上皮化的重要组织，来源于近端膀胱颈或精阜远端的上皮爬行覆盖手术创面可能性小，而位于基底层P63阳性的基底细胞可能是这一修复过程的重要细胞之一。

参考文献

［1］Pow-Sang M，Orihuela E，Motamedi M，et al.Healing response of the canine prostate to Nd: YAG laser radiation［J］.Prostate，1996，28(5): 287-294.

［2］Orihuela E，Pow-Sang M，Motamedi M，et al.Mechanism of healing of the human prostatic urethra following thermal injury［J］.A-dult Urology，1996，48(4): 600-608.

［3］罗光恒，孙兆林，刘军，等.前列腺汽化切除术后前列腺部尿道上皮修复过程的实验观察［J］.中华医学杂志，2013，4，261-264.

［4］Shah RB，Zhou M，Leblanc M，et al.Comparison of the basal cell-specific markers，34betaE12 and P63 in the diagnosis of prostate cancer［J］.Am J Surg Pathol，2002，26(9): 1161-1168.

［5］Davis LD，Zhang W，Meraeburger A，et al.P63 expression profile in normal and malignant prostate epithelial cells［J］.Anticancer Res，2002，22(6C): 3819-3825.

［6］Apodaca G.The uroepithelium: not just a passive barrier［J］.Traffic，2004，5(3):117-128.

［7］Azuma M，Hirao A，Takubo K，et al.A quantitative matrigel assay for assessing repopulating capacity of prostate stem cells［J］.Biochem Biophys Res Commun，2005，338(2): 1164-1170.

(学术编辑:罗光恒)

The role of P63 postive basal cell in re-epithelialization of prostatic urethra after resection of prostate

LIU Xuan1，2，SUN Zhao-lin2

(1.Zunyi Medical College，Zunyi 563000; 2.Department of Urology，the Guizhou People's Hospital，Guiyang 550000，Guizhou China)

【Abstract】Objective: To evaluate the role of P63 postive basal cell in re-epithelialization of prostatic urethra after resection of the prostate).Methods:15 older male dogs were treated with resection of the prostate.Specimens of the residual wounds were taken at days 3，7 and 14 postoperatively to evaluate the expression level of P63 and with HE and immunohistochemical staining.Results: P63 positive cells were detected occasionally in the wounds three days after surgery.At days 7，P63 postive cells appeared lamellar distribution connecting with remaining prostatic tissue and at days 14，P63 positive expression was observed in basal cells of newborn urothelium.Coclusion: The remaining prostatic tissue plays a great role in re-epithelialization of prostatic urethra after TmLRP and P63 postive cells of basal lamina may be one of the origins of cells for the process.

【Key words】Resection of prostate; P63; Urothelium; Re-epithelialization

作者简介:刘旋(1987-)，男，贵州贵阳人，硕士研究生，主要从事膀胱癌方面的研究。E-mail:693480126@qq.com

基金项目:国家自然科学基金(81260119);贵州省科技厅基金(黔科合LS［2011］020);贵州省科技厅基金(黔科合SZ字2012［3077］、黔科合SY字2011［3024］、黔科合人才团队2012［4013］)资助。

收稿日期:2015-01-21

doi:10.3969/j.issn.1005-3697.2015.02.07

【文章编号】1005-3697(2015)02-0160-03

【中图分类号】

【文献标志码】A

网络出版时间: 2015-5-1 01∶33网络出版地址: http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20150501.1333.004.html