BacT/ALERT 3D系统在结核性脑膜炎诊断中的应用

BacT/ALERT 3D系统在结核性脑膜炎诊断中的应用

张继萍1，任丽娟2，李永利3，叶迎宾1，黄秀香1，郑立恒4

(1.邯郸市传染病医院肺科，河北邯郸056002；2.邯郸市第一医院呼吸一科，河北邯郸056000；3.曲周县中医院内科，河北邯郸057250；4.河北省胸科医院检验科，河北石家庄050000)

【摘要】目的：评价BacT/ALERT 3D系统在诊断结核性脑膜炎中的应用价值。方法：收集2009年1月～2014年6月间200例结核性脑膜炎患者早期脑脊液标本480份，每份标本分别用离心涂片法、罗氏培养法和BacT/ALERT 3D系统培养法检测，对其结果进行分析，总结3种方法对确诊结核性脑膜炎之间的差异。结果：480份脑脊液标本中，离心涂片法、罗氏培养法、BacT/ALERT 3D系统培养法的结核杆菌阳性检出率分别为3.13%、5.42%、10.63%，BacT/ALERT 3D系统培养法结核杆菌初代分离时间短于罗氏培养法。结论：BacT/ALERT 3D系统有较高的检出率、较快的检出时间，有助于提高结核性脑膜炎的发现率，值得临床推广应用。

【关键词】离心涂片法；罗氏培养法；BacT/ALERT 3D系统

【文献标识码】【中图号】R 529.3A

DOI【】10.3969/j.issn.1002-0217.2015.02.023

Value of BacT/ALERT 3D microbial detection system in rapid diagnosis of tuberculosis meningitisZHANGJiping，RENLijuan，LIYongli，YEYingbin，HUANGXiuxiang，ZHENGLiheng

Department of Pulmonary Diseases，Handan Infectious Disease Hospital,Handan 056002,China

Abstract【】Objective：To evaluate the application value of BacT/ALERT 3D microbial detection system in rapid diagnosis of tuberculosis meningitis.Methods: 480 specimens in cerebrospinsl fluid (CSF) of 200 patients diagnosed with tuberculosis meningitis were collected from January 2009 to June 2014.These specimens were processed for detection of the mycobacterium tuberculosis by centrifugal smear acid-fast stain (Ziehl-Neelsen staining) and Lowenstein-Jensen cultivation,as well as the BacT/ALERT 3D system.The above results were analyzed and compared regarding the positive rates in order to evaluate the value in diagnosing tuberculosis meningitis.Results: The positive rates of the centrifugal smear acid-fast smear,Lowenstein-Jensen cultivation and BacT/ALERT 3D system cultivation were 3.13%,5.42% and 10.63% respectively.Conclusion: BacT/Alert 3D microbial detection system may lead to higher sensitivity and shortened detection time,which is worthy of wider clinical recommendation.

【Key words】 centrifugal smear acid-fast stain;Lowenstein-Jensen cultivation;BacT/ALERT 3D system

结核病是严重危害人类健康的全球性传染性疾病之一，近年来全世界发病率明显上升，结核性脑膜炎(以下简称结脑)是最严重的肺外结核病，病死率30%左右，它是常见的中枢神经系统感染性疾病，由于早期诊断困难，误诊率较高。目前，我国结脑发病率呈上升趋势，快速、准确及阳性率高的的检测方法对于结脑的诊断至关重要[1-2]。结脑的实验室检测方法很多，如何选择一种或几种相对有效的方法对结脑的诊断有着举足轻重的作用。本研究用BacT/ALERT 3D系统培养结脑患者脑脊液标本，并与离心涂片法、罗氏培养法进行比较，以分析BacT/ALERT 3D快速培养系统在结脑诊断中的应用价值，更好地指导临床工作。

1资料与方法

1.1标本来源于2009年1月～2014年6月邯郸市传染病医院200例结脑患者早期的480份脑脊液(CSF)标本。

1.2结脑诊断标准急性、亚急性或隐匿起病，多伴有发热、盗汗、乏力等中毒症状；有结核病史或发现颅外结核灶；有呕吐或脑膜刺激征等临床表现；PPD试验阳性，脑脊液常规检查白细胞增加，脑脊液生化蛋白含量升高，萄萄糖、氯化物含量降低；抗酸杆菌涂片、结核抗体、PCR等可以出现阳性；头颅CT有特异性改变；抗结核治疗有效。

1.3材料与仪器欧嘉隆公司(Organon Teknika)的BacT/ALERT 3D仪及配套试剂，包括MB/BacT培养瓶、含有生长因子和抗生素添加剂(MAS)。

1.4离心涂片法取2 mL CSF加入一次性塑料试管中，3 000 r/min离心15 min，用吸管轻轻吸出上清液弃掉，吹打试管底部沉渣涂片，抗酸染色镜检。参照《痰涂片镜检质量保证手册》[3]。

1.5罗氏培养法无菌抽取的CSF充分混匀，分别取0.1 mL直接接种到2个罗氏培养基上，置36℃温箱内培养。接种后每周观察一次，发现菌落生长者，经抗酸染色证实为抗酸杆菌，即报告培养阳性，若满8周仍无菌生长即报告培养阴性。培养阳性标本经涂片抗酸染色镜检看是否有污染。

1.6BacT/ALERT 3D 系统培养法①溶解MAS(加10 mL reconstituein flud至抗生素MAS中)；②加0.5 mL溶解的MAS到MB/BacT培养瓶中，再加入0.5 mL混匀的无菌脑脊液，经对培养瓶条码扫描后放入BacT/ALERT 3D仪内自动培养检测。报告阳性的标本经涂片抗酸染色镜检是否有污染。

1.7统计学方法采用SPSS 19.0统计学分析软件进行处理，组间比较采用配对χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 480份标本中，离心涂片法、罗氏培养法、BacT/ALERT 3D系统培养法结核杆菌检出阳性率分别为3.1%(15/480)、5.4%(26/480)和10.6%(51/480)，BacT/ALERT 3D系统培养法高于罗氏培养法结核杆菌的阳性检出率(P<0.05)，并且前者从结核杆菌的初代分离所用时间短于后者，见表1。BacT/ALERT法污染率为2.3%，罗氏培养法为2.1%，差异无统计学意义(P>0.05)。

2.215份离心涂片法阳性标本BacT/ALERT 3D 快速培养结核杆菌的阳性检出率为86.7%，高于罗氏培养法的66.7%，见表2。配对χ2=1.333，P>0.05，差异无统计学意义。

2.3465份离心涂片法阴性标本BacT/ALERT 3D快速培养结核杆菌的阳性检出率为8.2%，高于罗氏培养法的4.7%。见表3，配对χ2=16.961，P<0.01，差异有统计学意义。

表1两种方法检出时间

检查方法阳性率(%)初分离平均时间(d)BacT/ALERT3D10.6(51/480)26.24±19.68罗氏法5.4(26/480)35.61±28.25χ2/t8.82461.3850P<0.05>0.05

表215份离心涂片法阳性标本两种方法检查结果

检查方法BacT/ALERT3D阳性阴性合计罗氏法阳性10010阴性325合计13215

表3465份离心涂片法阴性标本两种方法检查结果

检查方法BacT/ALERT3D阳性阴性合计罗氏法阳性14216阴性24425449合计38427465

3讨论

结脑如能早期诊断及治疗，可大大降低其致畸率和病死率。目前结脑的诊断大多依靠病史、临床表现、影像学表现及组织活检来确诊，与其他脑膜炎的鉴别诊断存在困难。脑脊液离心涂片抗酸染色或培养发现结核菌是诊断结脑的“金标准”[4]，但离心涂片法虽然检测速度快，价格低廉，也只能检出含菌量较高的标本，无法检测出含菌量较低的标本，因此脑脊液结核杆菌的检出率极低，对早期诊断结脑的意义不大。传统的罗氏培养法较离心涂片法敏感性高并可鉴定死菌与活菌，但至少需要2～8周才能出现阳性结果[5]，且每周观察一次菌落生长情况，容易造成人为的报告延误[6]。结核杆菌的快速、准确、阳性率高的诊断技术一直是结核病基础应用研究的热点问题。BacT/ALERT 3D快速培养检测系统的应用有效提高了培养效率，缩短了培养时间。该技术依靠CO2比色检测装置检测培养系统中结核杆菌的生长情况。培养瓶底部有颜色感应器，当有结核杆菌生长时，产生的CO2渗透至感应器经水饱和后产生氢离子(H+)改变感应器的pH值,颜色由深绿色变为黄色，仪器自动报告有无结核杆菌生长[7]，具有自动化程度高、污染率低、阳性率高等优点。

本课题480例脑脊液标本罗氏培养法阳性26例，阳性率为5.42%，平均培养时间(35.61±28.25)d；BacT/ALERT 3D法阳性51例，阳性率为10.6%，平均时间(26.24±19.68)d，其中有1份标本在57 d后斜面上长出单个菌落，经鉴定为结核杆菌，而BacT/ALERT 3D 培养法报告为阴性，可能为标本中含菌量很少，此法阴性报告时间短(42 d)所造成。BacT/ALERT 3D法污染率2.3%，低于刘子龙等[8]报告的4%，在抽取脑脊液和实验过程中必须严格无菌操作，进一步降低污染率。在离心涂片法阳性的51例标本中，有2例标本BacT/ALERT 3D系统培养法阴性，5例罗氏培养法为阴性，但这些培养阴性的标本进行real time PCR试验检测结果均为阳性，出现这种情况的原因可能为：①标本中结核杆菌含量极低，处理过程中活性降低；②病人就诊前服用过对结核杆菌有抑制作用的药物；③BacT/ALERT 3D系统培养法加样量高于罗氏培养法。

综上所述，BacT/ALERT 3D 系统培养法比传统细菌学检查方法具有更高检出率，检出时间短等优点，给结脑患者的发现、诊断与鉴别诊断提供了有效的技术支持，具有较高的临床应用价值。

【参考文献】

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[7]朱长太,胡忠义.结核分枝杆菌耐药性检测技术进展[J].中华结核和呼吸杂志,2011,10(34):768-770.

[8]刘子龙,曹剑昆.BacT/ALERT 3D检测系统在结核病诊治中的运用[J].检验医学与临床,2010,7(3):246-247.