XAF1在胰腺癌中表达的临床意义及其与患者预后的关系

·论著·

XAF1在胰腺癌中表达的临床意义及其与患者预后的关系

黄佳姚玮艳

【摘要】目的探讨胰腺癌组织中X染色体连锁的凋亡抑制蛋白的相关因子1(XAF1)蛋白的表达及其与肿瘤临床病理参数、患者预后的关系。方法将89例胰腺癌组织和21例正常胰腺组织制成组织芯片，采用免疫组化方法检测XAF1蛋白的表达。分析XAF1表达与胰腺癌临床病理参数的相关性。89例胰腺癌患者均获得随访，生存情况以Kaplan-Meier曲线表示。采用Cox比例风险模型分析影响胰腺癌患者预后的因素。结果胰腺癌组织XAF1的阴性表达率为44.9%(40/89)，正常胰腺组织为9.5%(2/21)，两者差异有统计学意义(P<0.05)。XAF1的表达与肿瘤的临床分期呈负相关(P<0.05)，而与患者的年龄、性别及肿瘤淋巴结转移、远处转移、病理分级、手术切缘、血管和神经侵犯均无相关性。XAF1阴性表达患者生存时间显著短于阳性表达患者。单因素分析显示XAF1阴性表达、病理分级、淋巴结转移和远处转移均与患者预后相关(P值均<0.05)，多因素分析显示XAF1阴性表达是影响胰腺癌患者生存的独立危险因素。结论XAF1可能参与胰腺癌的发生和发展，并与胰腺癌患者的预后相关。

【关键词】胰腺肿瘤；X染色体连锁的凋亡抑制蛋白相关因子1；预后；免疫组织化学；组织芯片

DOI:10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2015.02.003

基金项目：国家自然科学基金(81302088)

收稿日期：(2014-08-11)

Clinical significance of XAF1 expression in pancreatic cancer and its relationship with prognosisHuangJia,YaoWeiyan.DepartmentofGastroenterology,RuijinHospital,ShanghaiJiaotongUniversityMedicineSchool,Shanghai200025,China

Correspondingauthor:YaoWeiyan,Email:yaowymail@yahoo.com.cn

Abstract【】ObjectiveTo investigate the expression of XAF1 protein in pancreatic cancer, and its relationship with clinicopathological parameters and prognosis. MethodsThe tissue microarray was composed of 89 pancreatic cancer and 21 normal pancreatic tissues, and immunohistochemistry was used to examine the expression of XAF1 protein. The correlation between XAF1 expression and clinicopathological parameters was analyzed. The 89 patients were followed, and the survival was shown in Kaplan Meier curve. Cox proportional hazards regression was used to identify risk factors for the survival of pancreatic cancer patients. ResultsThe negative expression rate of XAF1 was 44.9%(40/89), and it was 9.5%(2/21) in normal tissue, and the difference between the two groups was statistically significant (P<0.05). The expression of XAF1 was negatively associated with tumor staging (P<0.05), but it was not associated with age, gender, lymph node metastasis, distant metastasis, pathological grading, surgical margins, vascular and neural invasion. Patients with negative expression of XAF1 had much shorter survival than patients with positive expression. Univariate analysis showed that negative expression of XAF1, pathological grading, lymph node metastasis, distant metastasis was associated with the survival (P<0.05), and the multivariate analysis indicated that negative expression of XAF1 was an independent prognostic factor for survival of pancreatic cancer. ConclusionsXAF1 may be involved in the development and growth of pancreatic cancer, and it is related with patient′s prognosis.

作者单位：200025上海，上海交通大学附属瑞金医院消化内科

通信作者：姚玮艳，Email：yaowymail@yahoo.com.cn

【Key words】Pancreatic neoplasms;XAF1;Prognosis;Immunohistochemistry;Tissue microarray;

胰腺癌是一种主要来源于胰腺导管上皮的消化系统恶性肿瘤，其发生、发展涉及多个基因突变与异常表达，其中细胞凋亡失衡在胰腺癌发病机制中发挥了重要作用。X染色体连锁的凋亡抑制蛋白相关因子1(XIAP-associated factor 1,XAF1)是一个新发现的肿瘤抑制因子，它作为XIAP的负性调节因子，通过竞争性拮抗XIAP对caspase-3的抑制作用从而引起肿瘤细胞的凋亡[1]。本研究检测胰腺癌组织中XAF1蛋白的表达，结合胰腺癌患者临床资料及随访情况进行分析，研究XAF1蛋白表达与胰腺癌临床病理特征及患者预后的相关性，探讨其在胰腺癌发生和发展中的作用。

材料与方法

一、临床资料

收集上海交通大学附属瑞金医院2002年至2005年间手术切除的89例胰腺癌患者的临床资料和石蜡包埋的癌组织标本，另取21例石蜡包埋的正常胰腺组织作为对照，所有标本均经病理学证实。89例胰腺癌中男性52例，女性37例，年龄31～79岁。胰腺癌患者术后均进行随访，随访时间0.3～42个月，随访率达100%。

二、组织芯片的制作

取所有石蜡包埋的癌组织及正常胰腺组织标本，采用手工制作组织芯片。组织芯片制作仪为Instruments公司产品。取样针直径2 mm，组织芯间距1.5 mm。

三、XAF1蛋白表达检测

采用免疫组化方法检测XAF1蛋白的表达。羊抗人XAF1抗体购自Santa Cruz公司，工作浓度1∶500。生物素化标记的鼠抗羊二抗购自北京中杉金桥公司，工作浓度1∶200，最后加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，DAB反应染色。结果判定：以胞质或胞核中呈现黄色颗粒为阳性表达，结合染色强度及阳性细胞数进行评分。染色强度：不着色为0分，淡黄色1分，黄色2分，棕黄色3分；阳性细胞百分比：≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，﹥75%为4分。两分值相乘计算免疫反应分数(immunoreactive score，IRS)，0分为阴性，1～4分为弱阳性(+)，5～8分为中等阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)，阴性及弱阳性定义为阴性表达，中等阳性与强阳性定义为阳性表达。

四、统计学处理

用SPSS11.0软件对数据进行分析。阳性率的比较采用χ2检验，生存情况以Kaplan-Meier曲线表示，组间生存率比较采用log-rank检验，预后危险因素采用Cox风险比例模型进行单因素和多因素分析。P<0.05为差异具有统计学意义。

结　　果

一、胰腺癌组织XAF1的表达

19例正常胰腺组织中XAF1主要表达于导管上皮细胞，腺泡细胞有散在的XAF1表达(图1)，仅2例正常胰腺组织未见XAF1的表达，其阴性表达率为9.5%(2/21)，IRS为8.38±2.16。89例胰腺癌组织中40例未见XAF1表达，其阴性表达率为44.9%，IRS为3.93±0.98。胰腺癌与正常胰腺组织间的差异有统计学意义(t=5.41，P<0.05)。

图1　正常组织(1A、1B)和胰腺癌组织(1C、1D)中XAF1蛋白的表达(1A、1C　×100;1B、1D　×400)

二、胰腺癌组织XAF1表达与肿瘤临床病理学特征的关系

XAF1蛋白的表达与患者的年龄、性别及肿瘤淋巴结转移、远处转移、病理分级、手术切缘、血管和神经侵犯均无相关性，而与肿瘤分期呈负相关(表1)。

表1　胰腺癌组织XAF1表达与肿瘤临床病理参数间的关系

三、XAF1表达与患者生存期的关系

Kaplan-Meier生存曲线显示，XAF1阴性表达组患者的生存率明显低于阳性表达组患者，两组间生存率的差异具有统计学意义(χ2=5.78，P<0.05，图2)。

图2　XAF1阳性表达及阴性表达患者的生存曲线

四、影响患者术后生存的因素分析

单因素分析显示XAF1阴性表达、肿瘤分级、淋巴结转移和远处转移均与患者预后相关(P值均<0.05)，多因素分析显示XAF1阴性表达是影响胰腺癌患者生存的独立危险因素(P<0.05，表2)。

表2　影响患者预后的Cox风险比例模型分析

讨　　论

XAF1在所有胚胎组织及成人正常组织中广泛表达，但在肿瘤组织中，如胃癌[2]、肝癌[3]、肺癌[4]、肾癌[5]等，则有不同程度的减弱、缺失。Wang等[6]研究结果发现，XAF1在卵巢癌组织中的表达明显低于癌旁组织，并且XAF1表达与肿瘤组织分化程度之间呈负相关，XAF1的低表达可作为卵巢癌患者预后判断的指标之一。XAF1作为重要的凋亡促进因子，不仅可以拮抗XIAP抑制caspase活性的作用，而且可以通过细胞外信号调节激酶途径促进肿瘤细胞的凋亡[7]。Zou等[8]报道，在胃癌和结肠癌细胞中XAF1可通过翻译后修饰的方式激活p53，从而引起p53核内聚集，增加其转录活性，并激活p53依赖的细胞凋亡。由此可见，XAF1通过多种途径在细胞凋亡调控机制中发挥作用，而它的异常表达会引起肿瘤细胞的凋亡失控。

本课题组前期研究结果[9-10]也表明，胰腺癌细胞株SW1990和BxPC3的XAF1过度表达显著增加细胞的凋亡。本研究结果进一步显示，胰腺癌组织中XAF1蛋白表达较正常胰腺组织明显降低，并且XAF1表达与肿瘤分期呈负相关。此外，XAF1低表达患者的生存期显著短于高表达患者，是影响胰腺癌患者生存的独立危险因素，故可作为患者预后判断的指标之一。

参考文献

[1]Liston P, Fong WG, Kelly NL, et al. Identification of XAF1 as an antagonist of XIAP anti-Caspase activity[J]. Nat Cell Biol,2001,3(2):128-133.

[2]Ling ZQ, Lv P, Lu XX, et al. Circulating methylated XAF1 DNA indicates poor prognosis for gastric cancer[J]. PLoS One,2013,8(6):e67195.

[3]Lin Y, Li W. Assessment of XAF1 as a biomarker to differentiate hepatocellular carcinoma from nonneoplastic liver tissues[J]. Chin J Cancer Res,2012,24(3):201-206.

[4]Chen YB, Shu J, Yang WT, et al. XAF1 as a prognostic biomarker and therapeutic target in squamous cell lung cancer[J]. Chin Med J(Eng1),2011,124(20):3238-3243.

[5]Kempkensteffen C, Fritzsche FR, Johannsen M, et al. Down-regulation of the pro-apoptotic XIAP associated factor-1(XAF1) during progression of clear-cell renal cancer[J]. BMC Cancer,2009,9:276.

[6]Wang Y, Mao H, Hao Q, et al. Association of expression of XIAP-associated factor 1(XAF1) with clinicopathologic factors, overall survival, microvessel density and cisplatin-resistance in ovarian cancer[J]. Regul Pept,2012,178(1-3):36-42.

[7]Yu LF, Wang J, Zou B, et al. XAF1 mediates apoptosis through an extracellular signal-regulated kinase pathway in colon cancer[J]. Cancer,2007,109(10):1996-2003.

[8]Zou B, Chim CS, Pang R, et al. XIAP-associated factor 1 (XAF1), a novel target of p53, enhances p53-mediated apoptosis via post-translational modification[J]. Mol Carcinog,2012,51(5):422-432.

[9]黄佳,姚玮艳,朱黎明, 等. XAF1基因对胰腺癌细胞SW1990增殖和凋亡的影响[J]. 上海交通大学学报·医学版,2009,29(4):378-380.

[10]黄佳, 诸琦, 曹海霞, 等. XAF1基因诱导胰腺癌细胞株BxPC3凋亡的实验研究. 中华胰腺病杂志,2009,9(5):337-339.

(本文编辑：屠振兴)

·读者·作者·编者·

本刊可直接用缩写的常用词汇

作者对下列一些常用词汇可直接用缩写，即在论文中第一次出现时，可以不标注中文

ADP腺苷二磷酸

AEP急性水肿性胰腺炎

AFP甲胎蛋白

Alb白蛋白

ALP碱性磷酸酶

ALT丙氨酸氨基转移酶

AMP腺苷一磷酸

ANP急性坏死性胰腺炎

AP急性胰腺炎

ARDS急性呼吸窘迫综合征

AST天冬氨酸氨基转移酶

ATP腺苷三磷酸

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BUN血尿素氮

BSA牛血清蛋白

CCK缩胆囊素

CCK-8细胞增殖-毒性检验

CEA癌胚抗原

CP慢性胰腺炎

CTX线计算机断层摄影术

CRPC-反应蛋白

DAB二氨基联苯胺

DAPI4，6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸

DBil直接胆红素

DC树突状细胞

DMSO二甲基亚砜

EGF表皮生长因子

ELISA酶联免疫吸附测定

ENBD内镜鼻胆管引流

ERCP内镜下逆行胰胆管造影

EST内镜下乳头括约肌切开术

EUS内镜超声

EUS-FNAEUS引导下细针穿刺活检

EUS-FNIEUS引导下细针注射

FITC异硫氰酸荧光素

γ-GTγ-谷氨酰转移酶

Hb血红蛋白

HE苏木素-伊红

HRP辣根过氧化物酶

IBil间接胆红素

IFN干扰素

IL白细胞介素

iRNARNA干扰

LDH乳酸脱氢酶

MAP轻症急性胰腺炎

MRCP磁共振胆胰管造影

MRI磁共振成像

MODS多器官功能不全综合征

MOF多器官功能衰竭

MPO髓过氧化物酶

MSCs骨髓间充质干细胞

MTT四甲基偶氮唑蓝

NF-κB核因子-κB

NK自然杀伤细胞

NO一氧化氮

PaCO2动脉血二氧化碳分压

PaO2动脉血氧分压

PBS磷酸盐缓冲液

PD胰十二指肠切除术

PDAC胰腺导管腺癌

PET正电子发射计算机断层扫描

PLT血小板

PPPD保留幽门的胰十二指肠切除术

PSC胰腺星状细胞

RBC红细胞

RT-PCR逆转录-聚合酶链反应

SAP重症急性胰腺炎

shRNA小发夹RNA

siRNA小干扰RNA

SIRS全身炎症反应综合征

TBil总胆红素

TC总胆固醇

TG三酰甘油

TGF转化生长因子

TNF肿瘤坏死因子

TP总蛋白

WBC白细胞

VEGF血管内皮生长因子