饮水型复合微生态制剂对肉仔鸡生产性能、血清生化指标及肠道菌群的影响

2016-01-09魏金涛潘爱銮杨国军王海宁

饲料工业 2016年23期

■ 申杰赵娜魏金涛潘爱銮杨国军王海宁汤洪

（1湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，湖北武汉 430064；2动物胚胎工程及分子育种湖北重点实验室，湖北武汉 430064；3湖北绿天地生物科技有限公司，湖北武汉 431600；4襄阳盛锋农牧有限公司，湖北襄阳 441000）

国内外大量研究表明，益生菌能有效调节畜禽胃肠菌群平衡，改善胃肠的微生态环境，使畜禽始终保持健康的体质，提高成活率；非病原性和无毒性的活体微生物制成微生态制剂，不产生抗药性，对家禽消化道细菌性疾病有显著的防治作用，益生菌取代饲料中的抗生素是可行的。

在禽类养殖中，添加乳酸菌类饲料添加剂可达到抵御致病菌侵袭的效果，提高苗种的成活率，并促进动物生长。肠球菌属于乳酸菌，是肠道的正常栖居菌，包括粪链球菌（粪肠球菌）、屎肠球菌等。肠球菌是农业部允许使用的饲料级微生物饲料添加剂菌种。肠球菌在生长和代谢过程中产生对养殖动物有益的营养物质，具有调节动物肠道微生态菌群平衡，治疗腹泻、提高免疫力等功效；肠球菌用作饲料添加剂，可增加饲料的风味，提高动物的食欲。

本研究的目的是通过向饮水中添加粪链球菌、屎肠球菌复合微生态制剂，研究其对肉鸡生长性能、脏器指数、肠道微生态环境的影响，为复合益生菌在肉鸡生产中的科学应用提供参考依据。

1 试验材料与方法

1.1 试验材料与场地

复合微生态制剂（商品名停药宝），含活菌数量粪链球菌4×1010cfu/g和屎肠球菌4×109cfu/g，由湖北绿天地生物科技有限公司提供。

试验在襄阳盛锋农牧有限公司肉鸡养殖场进行。

1.2 试验动物与设计

试验采用完全随机的单因子设计，将健康的1日龄10 000只AV500肉仔鸡平均分成2组，每组5个重复，每个重复1 000只鸡。试验组饮水中加入35 mg/kg复合微生态制剂；对照组饮用普通饮水。饮水质量符合NY5027-2008规定。两组动物所饲喂饲料均不含抗生素。试验分为1～21日粮和22～42日龄两个阶段进行。

1.3 饲养管理

鸡舍采用红外灯加温，第1～2 d室温34℃，第3～7 d为32℃，第8～14 d为30℃，第14～20 d 27℃，此后调节鸡舍温度为22℃；1～7 d相对湿度保持70%，第8～20 d 60%，此后正常湿度55%左右。光照强度30 lux。试验期间动物自由饮水、自由采食。各试验组饲喂商品颗粒饲料。按照常规程序进行消毒、免疫。试验动物采用网上平养，每天用刮粪板除粪1次。

1.4 样品采集与制备

试验进行到第21 d和第42 d，鸡只禁食12 h后，每个重复组分别随机抽取试验鸡20只，颈静脉放血处死后脱毛处理，称重，计算屠宰率；剥离脾脏、胸腺、法氏囊、肠道等器官并称重。将接有颈静脉血的离心管静止10 min后3 000 r/min离心，取血清放于4℃冰箱待测生化指标。在无菌状态下取盲肠、回肠内容物迅速放于灭菌冻存管中，液氮罐中保存用于检测肠道菌群数量。

1.5 检测指标及方法

1.5.1 生长性能及脏器指数的测定

入试当天及试验结束时以重复组为单位称量仔鸡始重、末重（称重前12 h禁食，自由饮水）。每天记录喂料量，淘汰及病死鸡只情况。计算平均日增重、平均日采食量和料重比。

脏器指数：由脏器与屠体重相除计算免疫脏器指数，包括脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数、肠道指数等。

1.5.2 血清生化指标的测定

血清生化指标的测定采用罗氏MODULP800全自动生化分析仪测定。

1.5.3 肠道微生物数量的测定

采用实时荧光定量PCR方法检测肠道内容物中的肠球菌和大肠杆菌数。引物序列设计及参数见表1，引物由上海生工生物工程有限公司合成。按照北京天根基因组DNA提取试剂盒说明书提取肠内容物DNA，通过将含有目的DNA片段的琼脂糖凝胶进行回收，纯化分别获得肠球菌和大肠杆菌的标准品，然后将细菌的标准品进行实时荧光定量PCR反应，以不同标准品的拷贝数的对数值为横坐标，以实时荧光定量PCR反应过程中出现荧光信号的初始循环数（Ct）为纵坐标绘制标准曲线。同时，将待测样品进行实时荧光定量PCR反应得到样品的Ct值，并将其和标准曲线进行比较，获得各个样品中细菌数量。

表1 引物序列及参数

1.6 数据处理

SPSS 16.0软件对数据处理，并进行t检验，结果以“平均数±标准误”表示。

2 结果与分析

2.1 复合微生态制剂对肉仔鸡生产性能的影响

1～21日龄、22～42日龄死淘率比对照组降低53.33%和61.49%(P＜0.05)，两组间平均日增重、平均日采食量、屠宰率、料重比差异不显著(P＞0.05)，但是试验组均有优于对照组的趋势。

2.2 复合微生态制剂对肉仔鸡脏器指数的影响

表2 肉仔鸡生产性能

表3 肉仔鸡脏器指数（%）

由表3可见，21日龄肉仔鸡试验组脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数均显著高于对照组(P＜0.05)，分别提高16.7%、44.4%、28.6%(P＜0.05)；42日龄肉仔鸡试验组脾脏指数高于对照组33.3%(P＜0.05)，胸腺指数、法氏囊指数与对照组相比差异不显著(P＞0.05)。21日龄和42日龄试验组和对照组肠道指数差异不显著(P＞0.05)，肠道指数这一指标未能反映出肠球菌对肠道发育的影响。

2.3 复合微生态制剂对肉仔鸡血清生化指标的影响

由表4可见，21日龄试验组和对照组肉仔鸡血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白含量差异不显著(P＞0.05)，42日龄试验组总蛋白、白蛋白、球蛋白含量均高于对照组（P＜0.05）；说明肠球菌复合微生态制剂提高了42日龄肉仔鸡的免疫力。

表4 肉仔鸡血清生化指标

试验期间，试验组和对照组肉仔鸡血清中的甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量差异不显著(P＞0.05)，说明肠球菌对肉仔鸡的脂肪代谢没有产生影响。

2.4 复合微生态制剂对肉仔鸡肠道菌群的影响

表5 肉仔鸡肠道细菌数量（lgcfu/g）

由表5可见，21日龄和42日龄试验组肉仔鸡盲肠、回肠肠道内肠球菌的数量均显著高于对照组(P＜0.05)，这说明肠球菌在鸡盲肠和回肠定植效果较好。21日龄和42日龄试验组和对照组肉仔鸡盲肠内大肠杆菌数量差异不显著(P＞0.05)，试验组回肠内大肠杆菌数量均低于对照组(P＜0.05)；比较试验组盲肠和回肠内细菌数量发现肠球菌已经成为优势菌群。

3 讨论

国内外均报道日粮添加益生菌可以提高肉鸡生产性能和饲料转化率。肠球菌为动物胃肠道内常驻菌，可提高幼雏的日增重，改善饲料报酬减少腹泻及死亡率，王红利报道日粮添加粪肠球菌显著地提高了ADG，并显著改善了FCR。也有报道饮水中添加屎肠球菌对肉鸡饮水量和采食量没有负面影响。但本研究结果显示饮水中添加肠球菌对肉仔鸡平均日增重、平均日采食量、屠宰率、料重比影响不大，但是大大降低了死淘率。

有益菌在肠道内大量繁殖，并不断合成有益物质，可作为抗原物质促进免疫器官的发育。胸腺、法氏囊和脾脏是禽类最重要的免疫器官，参与全身的细胞免疫和体液免疫。胸腺、法氏囊、脾脏的重量可用于评价鸡的免疫状况，免疫器官的相对重量增加，说明机体的免疫机能增强。粪链球菌能够促进肉鸡胸腺、脾脏和法氏囊的发育。微生态制剂组肉鸡的法氏囊指数和脾脏指数均高于对照组，表明其中枢及外周免疫器官比较发达，参与免疫应答的作用强。本试验中21日龄肉仔鸡试验组脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数均显著高于对照组，42日龄肉仔鸡试验组脾脏指数高于对照组。本试验中42日龄试验组总蛋白、白蛋白、球蛋白含量均高于对照组；再结合死淘率情况来看，饮水中添加肠球菌增强了鸡只的抗病力。

Capcarova等研究表明，日粮中添加屎肠球菌对肉鸡血清甘油三酯和总胆固醇无影响。这与本试验结果一致，说明肠球菌对肉仔鸡的脂肪代谢没有产生影响。

健康动物机体胃肠道是微生态平衡环境，其中的有益菌为屎肠球菌、芽孢杆菌、双歧杆菌、粪肠球菌等。动物肠道内的正常菌群具有防止致病性抗原入侵，维持肠道屏障的功能。肠球菌在既可以改善畜禽生产性能，还促进胃肠道菌群平衡和肠道发育，增强免疫机能。研究表明，日粮中添加屎肠球菌显著降低肉鸡回肠和盲肠中大肠杆菌数量。大肠杆菌感染是畜禽产生疾病的主要原因。消化道有益菌群通过竞争排斥作用而减少大肠杆菌在肠道中的数量。屎肠球菌在肠道内代谢可以产生有机酸、过氧化氢、细菌素等物质，抑制大肠杆菌等病原菌，减少动物病害的发生。

本试验发现，21日龄和42日龄试验组肉仔鸡盲肠、回肠肠道内肠球菌的数量均显著高于对照组，试验组回肠内大肠杆菌数量均低于对照组，肠球菌已经成为盲肠和回肠内的优势菌群。这与多篇文献报道相一致，说明饮水中添加肠球菌也可以达到较好的效果。