连续流动分析仪在线测定游泳池水中尿素的研究

张宏斌，张子磊，夏环，汪健

昆山市疾病预防控制中心，江苏昆山215301

连续流动分析仪在线测定游泳池水中尿素的研究

张宏斌，张子磊，夏环，汪健

昆山市疾病预防控制中心，江苏昆山215301

目的为获得一种方便、准确和灵敏测定游泳池水中尿素的测定方法。方法应用SKALAR San++流动注射技术在线测定游泳池水中的尿素，水样在线加热后可直接进行定量分析。结果方法的最低检测浓度为3.9 μg/L；线性范围0.01～1.00 mg/L呈直线，其相关系数r=0.99992；加标回收率为79.3%～106%，线性范围0.50～10.0 mg/L呈直线，其相关系数r=0.99999；加标回收率为92.5%～104%。国标法中分光光度法对照，检测结果差异无统计学意义(t=0.562，P>0.05)。结论该方法操作简便、快捷，灵敏度高，线性范围宽、精密度和准确度均符合检测要求。

流动注射分析；尿素；在线分析

尿素是人体氮代谢的最终产物，在肝脏产生后，融入到血液之中，多数是经肾脏以尿的形式排出，也有少数是以汗液的形式排出。游泳时因加大了运动量，此时在池水中，汗液已无声息地排泄了，因此，游泳池中水质陈旧程度的灵敏指标是尿素含量。在公共卫生场所中，卫生监测重要卫生指标即是尿素检测，体现游泳池里的水受污染程度。在国标GB/T18204.2-2014游泳池水中尿素检测方法[1]中规范了检测内容，可还是有吸光度值偏低、标准曲线线性范围较窄、反应需避光等多种问题,检测易造成偏差，虽有许多同仁进行了方法改进[2-3]，来减少实验检测误差,但还有待进一步改进。为更好地满足日常批量检测游泳池水尿素的检测，为此,我们参阅有关文献资料[4-5],利用连线流动分析仪在线测定，拓展了尿素浓度检测范围，其有良好的精密度和准确度，使得基层实验室检测的需要能够得到满足。

1 资料与方法

原理：尿素在氨基硫脲存在下，在强酸环境中与二乙酰一肟加热，可生成红色的二嗪衍生物，生成衍生物的颜色和尿素的浓度在一定条件下呈正比，520 nm进行比色定量。

1.1 一般资料

1.1.1 仪器San++型流动注射分析仪，产自荷兰SKALAR公司，并附带尿素化学反应模块；分析天平:AB204S/A型，产自瑞士Mettler公司。

1.1.2 试剂试剂1：氯化钠溶液。在1L的容量瓶中，先加入约800 mL去离子水，称取18 g氯化钠，溶于水中，再加入SKALAR公司仪器商提供的3 mLBrij35（30%），用去离子水混匀定容至1 L。溶液能稳定一周，不用时于4℃保存。

试剂2：显色试剂。在1 L的容量瓶中，先加入约600 mL去离子水，称取1.675 g二乙酰一肟，335 mg氨基硫脲，溶液水中，再加入3 mLBrij35（30%），用0.1 mol/L氢氧化钠调节pH至7.5～8，再用去离子水混匀定容至1 L。溶液能稳定一周，不用时于4℃保存。

试剂3：酸试剂。在1 L的容量瓶中，先加入约600 mL去离子水，称取33 mg六水氯化铁溶于水中，加入0.65 mL磷酸（85%），加入200 mL硫酸（95%～97%）用去离子水混匀定容至1 L。溶液能稳定3 d。

表1 方法精密度和回收率实验结果（n=6）

试剂4：1 mol/L氢氧化钠。称取40 g氢氧化钠，溶解于800 mL去离子水中，用去离子水混匀定容至1，储存于塑料瓶中。每周配制。

1.2 测定方法

1.2.1 测定参数在线尿素模板的流路，设置加热温度90℃，尿素测定的进样时间为80 s，冲洗时间为150 s，空气时间为2 s。

1.2.2 标准曲线称取0.1000 g尿素标准物质，水定容至100 mL,得1mL=1mg尿素使用液。尿素标准溶液分别吸取0.00、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0 mL和10.0 mL置于100 mL容量瓶中，采用去离子水定容。此外，标准系列的浓度依次为0、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mg/L曲线浓度。根据样品浓度范围，可划低、高两种浓度的曲线。

根据操作手册进行开机并将管路连接好，放入相应试剂，将分析项目激活，打开蠕动泵，将相应管路置入试剂泵。待试剂的基线处于稳定之后，用标准曲线的中间浓度点调节增益，编辑运行程序，包括基线校正、漂移校正、标准曲线浓度和样品编号等内容。对标准系列和样品运行编辑好的程序，仪器会直接给出分析结果。

2 结果

2.1 方法线性

在该法条件下，低浓度尿素在0.01～1 mg/L范围内具有较好的线性关系,线性方程为:Y=340×C+35490,相关系数0.9995。在0.5～10 mg/L范围内，高浓度尿素的线性方程为Y=948×C+34952，相关系数0.9999，此时还是具有较好的线性关系。

2.2 方法检出限

分别对空白溶液进行11次平行测定，然后取其标准偏差。用方法检出限的v3倍标准偏差和回归方程的斜率表示方法检出限，尿素检出限为3.9 μg/L。

2.3 准确度的测定

对当地某游泳池水进行加标后进行加标测定，分别加了低浓度0.1 mg/L和高浓度2.0 mg/L量，其回收率结果低浓度为79.3%～106%，高浓度回收率为92.5%～104%,结果见表1，实验表明高浓度回收更稳定。

2.4 精密度实验

对当地某游泳池水进行加标后进行6次平行测定：低浓度的RSD为10.0%，高浓度的RSD为4.4%,结果见表1。

2.5 本法与国标法的对照实验

取尿素含量为1 mg／L标准样，采用本法和国标法分别测定10次，其结果都是在(1.0±0.04)mg／L范围内，然后经配对t检验，两法测定结果经SPSS 18.0数据统计软件统计，差异无统计学意义(t=0.562，P>O.05)。

3 讨论

3.1 样品采集和保存

将样品收集在玻璃或塑料容器中，必须使用试剂水把每一个瓶子都冲洗干净。而采集到样品的体积不仅具有代表性，可以重复分析，还应将排放量控制到最低。影响尿素稳定性的因素是温度、尿素浓度和pH,后两项已不能改变，故收到样品后应尽快分析，当天不能完成检测的，保存在冰箱里冷藏。

3.2 操作注意事项

①把泵管、模板管线连接完之后，10min，泵纯水通过所有管线，以便检查是否有泄漏现象。②试剂管线放于相应的容器中。加热器预先加热至90℃后，使试剂通过模板和加热器。③当温度达到90℃后，蠕动泵于常规速度模式。绝不能怠速，否则会烧坏流动注射玻璃管路。试剂通过管路待基线稳定后进标准和样品。④在关机之前，把所有的蠕动泵管线放进去离子水里面，泵纯水通过模板，15～30min将加热器关闭。这时候，可以降低温度。⑤若是正在排除故障时，管线一直放入去离子水中。

游泳池水中尿素的测定采用的是连续流动注射方法，依次进行进样、在线加热、比色，效率高，完全仪器自动化，样品用量小，一定程度的节省了人力,分析速度快,水、电消耗量也极大地减少，相当适用于批量样品的分析，与同行检测结果基本一致[6]，同时避免了国标中试管要避光，曲线浓度范围只有0.1～1.5 mg／L，夏季游泳池水尿素很容易超标，需稀释重新测定的麻烦，该方法的线性、精密度和准确度均达国家标准要求，并且范围宽，达0.01～10 mg／L。

[1]GB/T 18204.2-2014公共场所卫生检验方法,第2部分：化学污染物[S].中国人民共和国国家标准，2014.

[2]杨正林，沈瑛，傅四清.游泳池水中尿素检测遇到的问题及方法优化[J].中国卫生检验杂志，2013,23(17):3464-3467.

[3]黄丽君,吴富忠,王恒.游泳池水中尿素二乙酰一肟检测方法的改进[J].中国卫生检验杂志,2008,18(7):1431-1432.

[4]刘丽萍.流动注射分析法测定水中氯化物方法研究[J].环境科学导刊，2014（4）：93-96.

[5]潘淼，田海燕，李明艳.连续流动测定游泳池水中尿素的方法研究[J].中国卫生检验杂志，2011,21(11);2640-2641.

[6]王小静，白欣，杨丽君.连续流动注射分析法检测游泳池水中尿素[J].预防医学论坛,2015,21(1):54-55.

Measurement of Urea in Swimming Poor Water by Continuous Flow Injection Analysis

ZHANG Hong-bin，ZHANG Zi-lei，XIA Huan，WANG Jian
Center for disease control and prevention of Kun Shan，Jiangsu Province，215301 China

ObjectiveTo establish a method of flow injection analysis for determiantion of urea in swimming poor water.MethodsAnalyze urea on-line in swimming poor water by SKALAR San++continuous flow injection.ResultsDetection limit was 3.9μg/L. The linear range for urea was 0.01～1.00mg/L,with r=0.9992.and the recovery rates were 79.3～106%.The linear range for urea was 0.50～10.0mg/L,with r=0.9999.and the recovery rates were 92.5～104%.There was no significant differences(t=0.562，P>0.05) in test results with Spectrophotometric by national standard method.ConclusionThe method was simple and sensitive compared with method of standard.

Flow injection analysis;Urea;On-line analysis

R12

A

1672-5654（2015）03（c）-0005-02

2015-01-14）

张宏斌(1968-)，男，江苏昆山人，本科，主任技师，从事卫生理化检验。