高海拔地区大肠癌中nm23、ki67的表达及临床意义

高海拔地区大肠癌中nm23、ki67的表达及临床意义

才保加祁玉娟1

(青海大学附属医院胃肠外科，青海西宁810001)

摘要〔〕目的探讨高海拔地区大肠癌nm23、ki67的表达及与临床病理特征的关系。方法用免疫组织化学Elivision plus法，测定90例大肠癌(观察组)及37例癌旁组织(对照组)中nm23、ki67的表达。结果两组nm23、ki67的阳性表达率差异显著；nm23、ki67的阳性表达与临床分期及淋巴结转移有关(P<0.05)。结论联合检测大肠癌中nm23、ki67的表达,有利于更好地评估大肠癌的生物学行为,综合其他临床检查可对患者治疗及预后判断提供可靠依据。

关键词〔〕大肠癌;免疫组化;nm23;ki67

中图分类号〔〕R737.9〔文献标识码〕A〔

1青海省人民医院肿瘤内科

第一作者：才保加(1971-)，男，副主任医师， 主要从事胃肠外科研究。

大肠癌发病与患者的饮食结构、慢性炎症、大肠腺瘤、吸烟等关系密切。本实验探讨高海拔地区大肠癌组织中nm23和ki67表达及其对诊断及预后的价值。

1资料与方法

1.1临床资料2012年1月至2014年12月我院91例大肠癌患者为观察组，均经病理确诊，均为本地患者(居住海拔在2 200 m左右)。年龄35～72岁，中位年龄58岁；距离肿瘤边缘3 cm以上5 cm之内取癌旁组织37例为对照组。

1.2检测试剂及步骤nm23检测均采用鼠源单克隆抗体Anti-Nm23-H1抗体,肿瘤抑制基因一抗，ki67检测采用Elivision plus试剂盒，所有试剂盒均来源于福州迈新生物技术开发有限公司。样本经甲醛溶液固定、石蜡包埋后进行4 μm厚连续切片4张，脱蜡和水化后，用PBS(pH7.4)冲洗3次，每张切片加1滴一抗，室温下孵育60 min，PBS再次冲洗后，加1滴聚合物增强剂，室温下孵育30 min，PBS再次冲洗后，加1滴酶标抗，室温下孵育30 min，PBS再次冲洗后，加1滴新鲜配制的DAB溶液，苏朩素复染，PBS反蓝；切片经梯度酒精脱水干燥，采用中性树胶封固，整个操作步骤严格按照说明书进行。

1.3结果判定采用典型的nm23、ki67大肠癌阳性标本作为阳性对照，用PBS液替代一抗检测的标本作为阴性对照，所有检测结果均由3位有经验的病理医师进行评估。nm23阳性结果反应为细胞质呈现棕黄色，阴性结果为浅蓝色； ki-67 阳性反应为细胞核呈现棕褐色，阴性结果为蓝色。按染色强度记分:棕褐色计3分，棕黄色计2分，浅黄色计1分，无色计0分，染色强度的评估充分与阴、阳性对照进行对比；每张切片至少观察5个视野(400×)，计算染色强度分数及阳性细胞百分比平均值。染色强度分数×阳性细胞百分比≥2 则判断为阳性(+)。

1.4统计学方法采用SPSS15.0软件进行χ2检验。

2结果

2.1nm23、ki67在各组织的表达与对照组比较nm23、ki67阳性表达〔27(72.9%)、8(21.6%)〕，观察组nm23、ki67阳性表达有显著差异〔42(46.2%)、56(61.5%)，(P<0.01)〕

2.2nm23、ki67在大肠癌组织免疫组化染色结果nm23 阳性表达主要定位于细胞质，呈棕黄色或棕褐色染色。ki67阳性反应为棕褐色、颗粒状，定位于细胞核。nm23、ki67在大肠癌组织的表达见图1。

图1　观察组nm23、ki67免疫组化结果(×400)

2.3nm23、ki67在不同临床特征阳性表达比较nm23和Ki67的阳性表达在不同年龄、性别、肿瘤直径、组织分化、大体类型、部位之间差异无统计学意义(P>0.05)。有淋巴结转移者的nm23阳性表达明显低于无淋巴结转移者(P<0.05)；有淋巴结转者的ki67阳性表达明显高于无淋巴结转者(P<0.05)；Dukes C、D期患者的ki67阳性表达明显高于Dukes A、B期(P<0.05)。见表1。

表1　nm23、ki67与大肠癌临床病理特征的关系〔 n(%)〕

与Dukes C、D期比较：1)P<0.05；与无淋巴结转移比较：2)P<0.05

3讨论

肿瘤遗传学是遗传学和肿瘤学之间的边缘学科，着重研究恶性肿瘤的发生与遗传关系。主要包括三方面的研究内容：①恶性肿瘤易患性的遗传背景。②遗传物质的变化或遗传信息表达的异常同恶性肿瘤发生的关系。③以遗传学的方法分析环境中导致恶性肿瘤发生的因素。肿瘤遗传学的研究不仅可以为肿瘤的发生提供理论基础，也可以为恶性肿瘤的诊断和防治提供线索。目前有4种关于肿瘤发生的遗传机制的假说：即染色体不平衡假说认为染色体异常是癌变的原初变化，各种因素造成细胞的不对称分裂而使子细胞内遗传物质分布不平衡，从而影响基因的正常功能，是肿瘤发生的原因。两次突变假说认为基因第一次突变是肿瘤的始动过程，第二次突变是促进过程；两次突变假说已被不少学者接受并不断地予以修改和补充，可用于解释各种遗传型和非遗传型肿瘤形成的机制。转化基因假说认为正常细胞转化为恶性细胞是由一种所谓转化基因(Tr)所决定的，正常情况下转化基因被调节基因i+Tr所阻遏，i+Tr基因经突变成为突变型基因i0Tr，在纯合体i0Tr/i0Tr中Tr基因消除阻遏而被激活，于是细胞发生恶性转化。癌基因假说认为在人和动物细胞中发现与病毒癌基因同源的DNA顺序，称为原癌基因，这些基因在正常细胞中转录活性较低或虽有转录但对细胞无害，原癌基因被活化成为癌基因后便大量转录，或者发生突变后便转录出异常产物，这两种情况都会导致细胞癌变。

本研究结果可见nm23对于癌症的发展应该是有一定的作用，自1988年nm23基因被发现其在低转移细胞中表达是高转移细胞的10倍，而被作为第一个抑制肿瘤转移的基因，目前关于人nm23家庭已经发现至少10个亚型，而且nm23低表达与肿瘤转移的相关性已经被多项研究证实〔1～4〕。但是关于nm23表达在不同肿瘤之间并没有一致性结论，这可能与癌症的类型、特异性抗体及免疫组化法中的计分方法没有统一的标准有关，而且有研究发现nm23在原发性癌症早期是增加的，但发生淋巴转移后nm23的水平才降低，可见nm23的表达在癌症发生和发展过程中呈现一种动态变化〔5〕。而且nm23的表达在原发性癌症中变化由于nm23基因不稳定造成的〔6〕。在细菌和低级真核细胞的研究中发现，nm23作为磷酸组氨酸能够作用于组氨酸蛋白激酶和组氨酸激酶信号传递过程，保证细胞在受到外界刺激时的磷酸传递处于平衡状态〔7，8〕。初始下降nm23-H1水平可以进一步促进癌症转移。nm23-H1表达3′5′核酸外切酶活性可能参与DNA修复，降低细胞转移，如果nm23表达减少，可能会导致细胞逃避凋亡〔9，10〕。转移是恶性肿瘤的一个关键的特性，Ki67作为一种细胞核抗原，在乳腺癌的研究中较为广泛，通过动态的Ki67表达水平监测，对于癌症的预测、预防等都具有重要意义〔11～15〕，与nm23一样，最常用评估Ki67的方法主要是免疫组织化学，由于多个实验室的方法不一致，尽管明确ki67水平监测的重要意义，但是常规使用的肿瘤生物标志物还没有得到普遍共识，标准无法统一，结果可靠性较差〔16〕， ki67影响肿瘤的确切机制目前尚不明确，但大量的研究已经证实ki67的表达与肿瘤的转移和发展具有明显的相关性，由此认为ki67可能是通过染色质来加速细胞分裂，使肿瘤细胞的增殖失控，细胞生长速度加快，具有更高的侵袭性，转移机会明显增高，导致患者预后更差。

综上，nm23和ki67与大肠癌的发生和发展都有明显的相关性，但没有统一的标准，因此不宜将该检测指标作为评估肿瘤的唯一标准，而应该对各项检查进行综合分析。

4参考文献

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〔2014-03-19修回〕

(编辑苑云杰)