一例猪流行性腹泻的诊治

（贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）

一例猪流行性腹泻的诊治

代振江1，刘 钊1，曾智勇1*，汤德元1，梁海英1，王伟丞1

（贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea， PED)是由猪流行性病毒(PEDV)引起的接触性肠道传染病，其特征为初生仔猪呕吐、腹泻、脱水。近几年来，国内PED呈高发趋势，特别是哺乳仔猪病死率高达100%，给我国养猪业造成了重大经济损失。贵阳市某猪场有母猪600余头，母猪于产前60 d、25 d先后对PEDV和TGEV进行了2次免疫，2015年1月初母猪首发腹泻，而后3～7日龄仔猪相继发病死亡，1月份死亡300余头哺乳仔猪；经过再次免疫及返饲后，2月份母猪生产基本正常，3月初又零星发病，中下旬大量发病，截至目前已死亡10日龄以内的哺乳仔猪1 000余头。为确诊本次发病的病原，该猪场送检了2头正在发病的6日龄哺乳仔猪，患猪主要表现为消瘦、呕吐和腹泻，剖检可见小肠膨胀，充满黄色液体，肠壁变薄，肠系膜淋巴结肿大呈土黄色，腹股沟淋巴结肿大呈黄褐色，胃内充满大量凝乳团块，其他器官未见明显病理变化。据临床发病特点及解剖特征，初步诊断疑似“冬痢”。为进一步确诊病原，对送检病猪肠内容物分别提取核酸后，分别进行了TGEV和PEDV的实验室核酸检测，其结果显示PEDV为阳性，TGEV系阴性，现将检测过程报道如下。

1  材料

1.1 病料

系分别采自2头发病仔猪的小肠内容物（含肠黏膜）。

1.2 主要试剂

TaKaRa MiniBEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver.4.0、 PrimeScript One Step PT-PCR Kit VER.2.0、DL2000皆购自大连宝生物公司；其他化学试剂均为国产分析纯。

2  方法

2.1 病料的处理及核酸的提取

分别取适量肠内容物反复冻融3次后，用十字匀浆器再次进行匀浆，而后12 000 r/min离心10 min，取上清，用TaKaRa MiniBEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver.4.0试剂盒进行核酸的提取。

2.2 病原核酸检测

分别用PEDV和TGEV的特异性引物，以提取的核酸为模板，参照一步法RT-PCR试剂盒说明书，对PEDV和TGEV进行核酸检测，其反应总体系为50μL：2×1 StepBuffer 25μL，模板7.0μL，上下游引物各1.0μL，PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 2μL，RNase Free H2O 14μL；反应程序为：95 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，54 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35个 循 环；72 ℃ 10 min。扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。

3  结果

分别取RT-PCR扩增产物5μL，于0.8%的琼脂糖凝胶中进行电泳检测，电泳结果如图1所示。病原核酸检测结果表明，送检的2头6日龄仔猪均存在PEDV的感染，未见TGEV感染。

4  讨论

通过实验室诊断可知，该猪场存在PEDV的感染，另据主诉临床表现及流行病学特征，可基本认为此猪群发病与PEDV的感染密切相关。据了解，该猪场在母猪产前60 d、25 d先后对PEDV和TGEV进行了2次免疫，但此后仍相继发病，并死亡10日龄以内的哺乳仔猪1 000余头。先后2次免疫仍然发病，其原因：一方面可能存在免疫失败，由于目前对PEDV及TGEV疫苗免疫后是否产生有效免疫尚缺乏有效的检测手段，因此对于是否免疫失败无法判断；另一方面也可能是目前的PEDV流行毒株发生了较大的变异，导致疫苗免疫效果不理想，致使感染猪场长期存在散毒，反复感染压力较大。

图1 患猪肠内容物病原核酸检测结果

鉴于此，对于该病应采取综合的防治措施予以应对。其总体原则是全进全出，加强生物安全，对产房进行彻底清洁和消毒。母猪进入产房前，除做好产房的彻底消毒外，还应做好母猪的清洁和带猪消毒；产房工作人员应相对固定，且禁止相互走动；同时，加强仔猪保温和保持产房的清洁干燥，严防PEDV的传入。此外，还应彻底搞好产房外猪场的环境卫生和消毒。

2015-04-12）

省校合作计划项目，黔科合LH字[2014]7670号。

代振江（1991-），男，在读硕士，研究方向：动物传染病病原分子生物学。

曾智勇（1978-），男，教授，博士，硕士生导师，从事动物传染病病原分子生物学研究。