TDZ在非洲菊组培快繁中的应用

汤雪燕， 赵统利， 邵小斌， 朱朋波， 孙明伟， 王江英， 徐 艳

(连云港市农业科学院，江苏连云港 222006)

TDZ在非洲菊组培快繁中的应用

汤雪燕， 赵统利， 邵小斌， 朱朋波， 孙明伟， 王江英， 徐 艳

(连云港市农业科学院，江苏连云港 222006)

摘要[目的]优化非洲菊组培快繁技术体系。[方法]研究不同外植体、激素水平对非洲菊愈伤组织形成、芽分化及根诱导的影响。[结果]以花托作为外植体，愈伤组织诱导率高；MS培养基中加入6-BA 0.4 mg/L十TDZ 2.0 mg/L十NAA 0.3 mg/L时，形成愈伤组织多，愈伤组织结实，芽诱导效果最好；在1/2MS+NAA 0.5 mg/L培养基中，非洲菊根长势最好，且小苗移栽活率最高。[结论]该研究为非洲菊的大规模生产提供理论依据。

关键词TDZ；非洲菊；组织培养；快繁

非洲菊(Gerbera jamesoniiBolus)别名扶郎花、灯盏花、太阳花，是菊科大丁草属多年生宿根草本花卉。其植株风韵秀美，花朵硕大，花色艳丽丰富，花期长，在适宜条件下能周年持续产花，产花率高，是切花和盆花兼用的优良观赏花卉，现已跻身世界五大切花之一,在我国有跃居四大切花之势。

非洲菊为异花传粉植物(2n=50)，自交不孕，且种子寿命短，发芽率低，而且种子后代变异大，难以保持原有品种的优良性状；而分株法虽然能保持母本的优良性状但繁殖系数低下，无法满足产业化生产的要求[1]。因此国内外一般采用组织培养的方法生产非洲菊种苗，可对优良品种进行大规模的扩繁。为了优化非洲菊组培快繁技术体系，笔者研究不同外植体、激素水平对非洲菊愈伤组织形成、芽分化及根诱导的影响。

1材料与方法

1.1材料试验品种选用主栽品种小雪桔。从东辛试验地生长健壮的非洲菊植株上摘取直径1cm左右且花蕊不裸露的幼嫩花托、带芽短缩茎、幼嫩叶柄和叶片。

1．2方法

1.2.1外植体灭菌。先用自来水反复冲洗，去除表面脏物，再用含洗洁精的溶液浸泡30min，然后用自来水冲洗干净，置于干净烧杯中备用。在无菌超净台上用70%的乙醇将外植体消毒15s，再用无菌水冲洗3次，然后用1‰的升汞消毒10min，随后再用无菌水反复冲洗3～4次，然后在超净工作台上用无菌滤纸吸干水分，将花托剥去花萼，切去花丝花柄后平均切成2～4小块接种到预先配好的无菌培养基中，其余外植体直接平均切成3～4小块后接种到预先配好的无菌培养基中。

1.2.2培养条件。参照前人研究的基础上[2]，在MS培养基中附加不同种类浓度激素，pH5.8，所有培养基配制分装完成后，经120 ℃高压灭菌20min。接种后置于温度(25±2) ℃，光照强度1 800～2 100lx，光照时间14h/d条件下培养。

1.2.3试验设计。处理①：不同外植体对愈伤组织诱导的影响，每个处理接种20个培养瓶，每瓶接种3块外植体，处理50d。处理②：不同激素6-BA和TDZ组合对花托愈伤组织诱导的影响，每处理接种20个培养瓶，每瓶接种3块外植体，处理60d。处理③：不同培养基对非洲菊苗根诱导的影响，每处理接种20个培养瓶，每瓶接种5株小苗，处理30d。

2结果与分析

2．1不同外植体对愈伤组织诱导的影响将带芽短缩茎、叶柄、叶片、花托分别接入培养基MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L，数日后，切口处均可见不同程度的膨大、突起和愈伤组织的形成。发生时间依次为带芽短缩茎最早，15d即有愈伤组织产生，花托次之，叶柄、叶片最迟。花托接种18d后便有大量的愈伤组织形成，而叶柄和叶片分别需要25、22d才能形成愈伤，且愈伤组织的量很少。带芽的短缩茎污染很严重，污染率高达61.7%，是花托的7.4倍(表1)。

表1　不同外植体对愈伤组织诱导的影响

2.2不同激素对花托愈伤组织诱导的影响由表2可知，不同激素对花托愈伤组织诱导表现出明显差异。TDZ作为一种新型植物生长调节剂，具有很强的细胞分裂素活性[3-5]。在MS+6-BA0.4mg/L+TDZ2.0mg/L+NAA0.3mg/L时，花托愈伤组织诱导率较高，花托切口处产生淡黄色、米粒状的愈伤组织，2～3d后淡黄色愈伤组织会慢慢变绿。当TDZ浓度为2.0mg/L时，愈伤组织诱导率最高。6-BA的浓度变化对愈伤组织的产生影响不显著。对照不加任何激素的MS培养基则不能诱导花托产生愈伤组织。

表2　不同浓度6-BA和TDZ组合对花托愈伤组织诱导的影响

注：NAA浓度为0.3mg/L。

表3　不同培养基处理对非洲菊苗根诱导及移栽成活率的影响

注：继代培养20d做生根结果统计，30d进行炼苗移栽。

2．3不同激素对愈伤组织成芽的影响由表2可知，TDZ浓度越高，非洲菊愈伤组织上长出的芽越弱，玻璃化也越严重；6-BA浓度越高，越不易长芽。诱导产生的愈伤组织，经过30d，部分变深绿的愈伤组织上可见绿色的点，这些点逐渐长大，再过30～40d，诱导出丛芽，高浓度6-BA的配方比低浓度6-BA的配方产生愈伤组织和丛芽时间短，但形成的愈伤组织不易产生丛芽，生长出的芽嫩，玻璃化严重，质量不高。总体而言，当培养基为MS+6-BA0.4mg/L+TDZ2.0mg/L+NAA0.3mg/L时，花托愈伤组织诱导率较高，愈伤组织分化程度较强，愈伤组织紧实，易产生丛芽，芽健壮，质量高[3]。

2．4不同培养基对非洲菊苗根诱导的影响NAA作为广谱型植物生长调节剂，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根，1/2MS培养基中降低无机盐浓度，而少量的营养也有利于植物为了吸收营养而生根来适应环境[4-5]。由表3可知，1/2MS培养基中非洲菊苗根诱导率达100%，其中当培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L时,移栽成活率最高。

3小结与讨论

该结果表明，选取花托作为外植体可以很快地形成大量愈伤组织，且污染率较低，较理想。以带芽短缩茎作为外植体，与花托在诱导愈伤组织上差别不大，但带芽短缩茎污染率较高，可能是因为其生长在地面，携带较多的菌种。选择MS+6-BA0.4mg/L+TDZ2.0mg/L+NAA0.3mg/L作为芽诱导培养基，低浓度的6-BA和TDZ有很好的协同促进作用，形成愈伤组织多，愈伤组织结实，芽诱导效果最好； 外植体在愈伤组织诱导的过程中，对激素种类和浓度的反应差别甚大，这可能与外植体本身所含的内源激素种类、浓度水平差异和对外源激素的反应灵敏性不同有关[6]。选择1/2MS+NAA0.5mg/L时,非洲菊根长势最好，且小苗移栽成活率最高。

综上所述,在某一品种上试验成功的培养基, 不等于在其他品种上同样成功, 因此必须针对具体品种，适当调整激素的种类、浓度和配比，从而筛选其相应的培养基[7]。

参考文献

[1]戴云新，张健，李敏，等.不同外植体和激素对非洲菊愈伤组织诱导及芽分化的影响[J]．浙江农业科学，2009，1(4)：695-696.

[2]陈晓静，李梅婷，林馨．非洲菊的组培快繁[J]．福建农林大学学报(自然科学版)，2006，35(2)：169-172．

[3]ORLIKOWSKAT，NOWAKE，MARASEDKA,etal.Effectsofgrowthregulatorsandincubationperiodoninvitroregenerationofadventitiousshootsfromgerberapetioles[J].Plantcell,tissueandorganculture, 1999, 59(2): 95-102.

[4]MIYOSHIK，ASAKURAN.Callusinduction,regenerationofhaploidplantsandchromosomedoublinginovuleculturesofpotgerbera(Gerbera jamesonii)[J].Plantcellreports, 1996, 16(1/2): 1-5.

[5]MEYERHJ，VANSTADENJ.TheinvitrocultureofGerbera aurantiaca[J].Plantcell,tissueandorganculture, 1988, 14(1): 25-30.

[6]杨继涛，邹志荣，张素勤，等．植物激素对非洲菊花托愈伤组织诱导的研究[J]．西北农业学报，2003，12(3)：133-135.

[7]马瑞雯，宋世刚，韩爱清，等. 不同非洲菊品种在组培快繁中的差异初探[C]//植物组织培养与脱毒快繁技术：全国植物组培、脱毒快繁及工厂化生产技术学术研讨会论文集.中国园艺学会，2001:36-37.

中图分类号S188

文献标识码A

文章编号0517-6611(2015)30-031-02

基金项目连云港市科技攻关项目[CN 1302]；2015年连云港市第五期“521高层次人才培养工程”项目。

作者简介汤雪燕(1983- )，女，江苏江阴人，助理研究员，硕士，从事植物营养及花卉科研、科技推广工作。

收稿日期2015-09-16

ApplicationofTDZinTissueCultureofGerbera jamesonii

TANGXue-yan,ZHAOTong-li,SHAOXiao-binetal(LianyungangAcademyofAgriculturalSciences,Lianyungang,Jiangsu222006)

Abstract[Objective]In order to optimize the technical system of Gerbera jamesonii tissue culture and rapid propagation. [Method] The effect of different explants and hormonal readiness on Gerbera jamesonii callus formation ,bud initiation and root induction were conducted.[Result]The result showed that using receptacle as an explant ,could accurate the induction rate，adding 0.4 mg/L 6-BA, 2.0 mg/L TDZ and 0.3 mg/L NAA to MS medium could form more callus,and had stronger callus and the best bud induction. In the medium of 1/2MS and 0.5 mg/L NAA, Gerbera jamesonii grew best and plantlet had the best survival rate of transplanting.[Conclusion]The study provided the basis for the mass production of Gerbera jamesonii.

Key wordsTDZ; Gerbera jamesonii; Tissue culture; Rapid propagation