溶痰液在抗酸杆菌检测中的应用及其方法学评价

吴建耀 周桂生 龚 萍 余淑芳

昆山周市人民医院检验科，江苏昆山 215314

溶痰液在抗酸杆菌检测中的应用及其方法学评价

吴建耀 周桂生 龚 萍 余淑芳

昆山周市人民医院检验科，江苏昆山 215314

目的 探究溶痰液涂片法在痰液的抗酸杆菌检测中的意义和价值。方法 收集2011年6月—2013年6月期间于该院检验科痰液检查者的痰标本共计1100份，将每一份样本同时进行直接涂片法和溶痰液涂片法来检测痰标本中的抗酸杆菌，检测两种方法对抗酸杆菌的阳性检测率。结果 溶痰液涂片法的阳性率为3.09%，直接涂片法阳性率为1.36%，前者明显高于后者，其差异具有统计学意义（P＜0.05）。并且各种痰液的检出率和阳性等级都高于直接涂片法。 结论 在结核病的抗酸杆菌的检测方法中，溶痰液涂片法阳性检测率明显优于直接涂片法，可以作为快速诊断结核病的方法和手段，值得在临床上推广应用。

直接涂片法；溶痰液涂片法；抗酸杆菌

结核病是指由于结核杆菌引起的慢性感染性疾病，主要的传播途径是呼吸道、消化道、皮肤以及子宫，其中最主要是通过呼吸道，主要的临床表现是午后低热、乏力。现今结核病仍旧严重地危害着人类的健康[1]。当前对肺结核患者进行细菌学检查是发现和检测传染源最主要的途径，这也是肺结核患者在确定诊断和治疗方案的重要依据[2]。该研究通过回顾性分析2011年6月—2013年6月期间该院住院以及门诊肺结核患者痰液通过直接涂片法和溶痰液涂片法检测结果的差异，从而探究溶痰液在抗酸杆菌检测中的意义和价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

来该院检查患者在不同时间段（晨痰、即时痰和夜间痰）以及不同性质（唾液痰、黏液痰、血痰和脓性痰）的痰标本共计1100份。

1．2方法与仪器

直接涂片法:将合格的痰液标本3 mL左右置于标本盒或者广口容器内，将其中0.1 mL左右的脓样痰液、干酪样的痰液用竹签挑取，放置在一块干净的载玻片中央，均匀地涂抹为2×2.5 cm大小的卵圆形痰膜。痰液自然干燥、固定、染色以后进行镜检。

溶痰剂涂片法:将合格的痰液标本10 mL左右置于消毒后的广口容器内，加入5倍的无菌蒸馏水，121 MPa高压蒸汽灭菌20 min后，将痰检体和BASO溶痰剂以1：2或者1：3的比例混合均匀，静置10～20 min，待检体完全融化后，于10 000转/min下离心，除去上清液，取沉淀涂片染色后进行镜检。该研究所采用的染色方法为最常用的Ziehl-Neelsen抗酸染色法[3]；经过染色以后抗酸杆菌为红色，其他细菌和背景则被染成了蓝色。

1．3 观察指标

根据《中国结核病防治规划实施工作指南》[4]中有关镜检和报告标准进行报告，具体如下：(1)镜下计数一百个视野，并且观察的时间不能低于4 min，没有发现抗酸杆菌，继续观察连续三百个视野，仍然没有发现有抗酸杆菌，则报告为抗酸杆菌阴性，用“-”来表示。(2)镜检100～300个视野，若发现有1～2条抗酸杆菌，则记录下所发现的抗酸杆菌的条数以及观察的的视野数，报告为抗酸杆菌可疑（±）。并且对标本进行复查，重新涂片。(3)镜检小于100个视野，发现有3～9条AFB，则记录下100个视野内抗酸杆菌的数目，报告为抗酸杆菌阳性（1+）。(4)镜检小于10个视野发现有1～9条抗酸杆菌则报告为抗酸杆菌阳性（2+）。(5)若镜检每个视野都发现有1～9条抗酸杆菌则报告为抗酸杆菌阳阳性（3+）。(6)若镜检每个视野发现的抗酸杆菌数量都大于9条，则报告为抗酸杆菌阳性（4+）[5]。

1．4 统计方法

该研究采用SPSS16.0统计学软件对所得的数据进行整理分析，计量资料均数±标准差（）表示，采用t检验；计数资料采用χ2检验。检验标准α=0.05。

2 结果

2.1 痰标本检测结果

2011年6月—2013年6月期间来该院检查患者的痰标本共计1100份，不同的去痰时间段以及标本性质检测，见表1。

表1 1100份痰标本检测结果（份）

2.2 两种不同涂片方法对1100份痰液标镜检结果

直接涂片法对1100份痰液镜检阳性率为1.36%（15/1100）,而溶痰液涂片法进行镜检阳性率为3.09%（35/1100）,溶痰液涂片法的阳性率要明显高于直接涂片法，两种方法阳性检测率差异有统计学意义（χ2=16.432，P＜0.05），见表2；即时痰、夜间痰、晨痰痰液标本利用直接涂片法其阳性检测率分别为0.75%、1.30%、2.69%，而利用溶痰剂涂片法其镜检阳性检测率分别为1.5%、2.60%、6.15%。溶痰液涂片法对不同性质的痰液标本镜检阳性率要明显高于直接涂片法,差异有统计学意义（χ2=16.432，P＜0.05），见表3。

表2 不同性质的痰液标本两种不同涂片方法镜检结果

表3 不同时间段的痰液标本两种不同涂片方法镜检结果

3 讨论

直接涂片法由上个世纪开始广泛应用，到目前为止仍然是检测结核病菌的主要方法之一。直接涂片法用于检测抗酸杆菌得优点有报告时间短、成本低廉、技术相对简单、特异性高[6]，但是直接涂片法所使用的检体大多都没有经过处理，而是直接做成抹片，进行染色工作，因此准确性较低，而未经过处理的痰液检体在烘干的过程中，阳性患者痰液中残存的肺结核菌很容易被蒸发到空气中，这样就可能会造成周围人员以及操作者的感染。而Baso溶痰剂能够迅速地溶解痰液中的上皮细胞、粘液，而且也可以灭活非分支杆菌，这样能够减少镜检时的干扰，显著地提高阳性检测率，降低伪阳性的发生率[7-8]。

该研究结果表明，虽然规定唾液是不合格的标本，应该要求病人重新送检黏液痰、脓性痰标本，但是通过检测发现口水和唾液中存在着抗酸杆菌，所以在工作者对于少痰或者确实无痰的正常体检人员和患者，为了临床诊断的需要以及避免矛盾，也可以接受唾液痰，此外在必要时可以采取超声雾化取痰[9-10]。直接涂片法共检测出15份抗酸菌阳性标本，阳性率为1.36%，而溶痰剂涂片法共检测出34份抗酸菌标本，阳性率为3.09%。溶痰液涂片法的阳性率要明显高于直接涂片法，并且阳性等级也要高于直接涂片法。直接涂片法和溶痰液法对血痰、脓性痰、黏液痰、唾液痰痰液标本进行检测其阳性率分别为：（3.06%vs 9.18%）、（2.63%vs 4.61%）、（1.18%vs 1.85%）、（0.78%vs 2.74%）；直接涂片法和溶痰液法对即时痰、夜间痰、晨痰痰液标本进行检测其阳性率分别为 （0.75%vs 1.5%）、（1.30 vs 2.60%）、（2.69%vs 6.15%）。这表明对于不同性质的痰液标本以及不同时间段的痰液标本，溶痰液涂片法阳性检查率均要优于直接涂片法。

综上所述，在结核病的抗酸杆菌的检测方法中，溶痰液涂片法阳性检测率明显优于直接涂片法，可以作为快速诊断结核病的方法和工具，值得在临床上推广应用。

[1]黄志强，张日东，吴智龙，等.新型改良罗氏培养基与罗氏酸基检测结核分枝杆菌比较[J].广东医学，2011，32（9）：1152-1153.

[2]潘美玉，吴龙章，陈剑锋，等.两种不同固体培养基对结核分枝杆菌培养阳性率的影响[J].实用医学杂志，2012，28（5）：830-831.

[3]简子娟，胡培磊，杨华林，等.夹层杯集菌离心涂片法与改良罗氏培养法检测抗酸杆菌的比较[J].中国感染控制杂志，2011，10（1）：26-29.

[4]刘振江，库尔巴尼克·皮拉尼克.影响结核菌生长的因素探讨[J].临床和实验医学杂志，2011，10（19）：1552-1553.

[5]蔡杏珊，谢敏娜，罗春明，等.MGTT及BaCT/AlertMP液体培养基检测分枝杆菌效果的评价[J].国际检验医学杂志，2011，32（21）：2469-2471.

[6]张进兴，李小永，周笑珍.结核分枝杆菌检测阳性报告时间探讨-罗氏培养、7H9培养及MPB64胶体金法[J].中国医学检验杂志，2011，12（5）：210-211.

[7]肖静，杨元好，金瑛，等．荧光染色法检测痰中结核杆菌的应用[J].贵阳中医学学院学报，2013，35(4):152-153．

[8]张小芬，曾希鹏，刘平．荧光染色LED显微镜查找痰中结核杆菌的应用[J].中国卫生检验杂志，2010，20(12):3286-3287．

[9]王爱辉，李艳静，常占平，等.肺结核合并糖尿病患者T淋巴细胞亚群检测的临床意义[J].中国综合临床，2013,29（z1）：49-51.

[10]周建华.痰涂片法与痰培养法检测抗酸杆菌结果比较[J].中国乡村医药，2013,20(5):55.

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A

1674-0742（2015）01（b）－0180-02

2014-10-15）

吴建耀（1977-），男，江苏泗阳人，本科，主管检验师，研究方向:临床生化。