固相萃取-气相色谱法检测金银花中9 种拟除虫菊酯农药残留

田丽梅，孙志勇，向 明，宋春满，杨叶昆，李雪梅*

（云南中烟工业有限责任公司技术中心，云南 昆明 650106）

固相萃取-气相色谱法检测金银花中9 种拟除虫菊酯农药残留

田丽梅，孙志勇，向 明，宋春满，杨叶昆，李雪梅*

（云南中烟工业有限责任公司技术中心，云南 昆明 650106）

采用固相萃取净化，气相色谱电子捕获检测器检测，建立了金银花中9 种拟除虫菊酯农药残留量的检测方法。金银花样品经正己烷涡旋振荡提取、TPH固相萃取柱净化后，用气相色谱检测。9 种拟除虫菊酯农药的线性范围在0.01～0.8 mg/L，平均回收率为82.8%～104.6%，相对标准偏差为3.5%～5.7%，检出限为0.002～0.005 mg/L。该方法灵敏、准确，适用于金银花中9 种拟除虫菊酯类农药残留量分析。

气相色谱；固相萃取；拟除虫菊酯；农药残留；金银花

近年来随着世界各国对天然药物需求的日益扩大，许多中药材被广泛地人工种植。中药材在种植过程中，农药使用较为频繁，因其直接关系到患者的身体健康，中药材中的农药残留不容忽视。金银花自古被誉为清热解毒的良药，既能宣散风热，又善清解血毒，是药食两用的道地药材[1]，用量多，用途广，严格控制其中的农药残留显得尤为重要。测定中药材中拟除虫菊酯农药残留的方法主要有液相色谱法[2]、气相色谱法[3-12]、气相色谱-质谱联用法[13-19]、气相色谱-串联质谱法[20]。液相色谱法检测拟除虫菊酯农药残留灵敏度不及气相色谱好，气相色谱-质谱联用仪利用电子电离源时，对拟除虫菊酯农药的灵敏度也不够理想，而气相色谱-串联质谱法作为高端方法不易普及，气相色谱电子捕获检测器作为选择性检测器，检测拟除虫菊酯农药残留，仍有其优势。固相萃取作为一种简便的前处理方法在农药残留检测中被广泛采用。固相萃取可采用单一填料的固相萃取小柱进行，也可将不同类型填料的固相萃取小柱串联进行，近年来还出现了将不同类型填料混合装填的固相萃取小柱[19]。本实验采用混合填料的固相萃取柱净化，气相色谱电子捕获检测器检测，建立了金银花中9 种拟除虫菊酯农药残留量的分析方法。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

9 种金银花样品分别购自云南省昆明市、广西省柳州市、四川省广元市、山东省东营市、河北省邢台市、浙江省丽水市、湖南省怀化市、贵州省毕节市、河南省新乡市。

正己烷、丙酮（均为农残级） 美国天地公司；标准品七氟菊酯（CAS：79538-32-2）、联苯菊酯（CAS：82657-04-3）、甲氰菊酯（CAS：64257-84-7）、氯氟氰菊酯（CAS：91465-08-6）、氯菊酯（CAS：52645-53-1）、氟氯氰菊酯（CAS：68359-37-5）、氯氰菊酯（CAS：52315-07-8）、氰戊菊酯（CAS：51630-58-1）、溴氰菊酯（CAS：52918-63-5）、灭蚁灵（CAS：2385-85-5，内标）均购自百灵威公司，纯度均大于99.0%，以正己烷配制，并稀释成合适质量浓度的混合标准工作液。

1.2 仪器与设备

Hamilton MicroLab 500配液系统 瑞士Hamilton公司；7890气相色谱仪（配备微池电子捕获检测器）、Florisil固相萃取柱、TPH固相萃取柱（500 mg/6 mL）美国Agilent公司；PrepLinc SPEi自动固相萃取仪 美国J2 Scientifi c公司；多管旋涡混合仪 美国Talboys公司；SK5200H超声波萃取仪 上海科导超声仪器有限公司；DryVap定量浓缩仪 美国Horizon公司。

1.3 方法

1.3.1 溶液配制

分别称取9 种拟除虫菊酯农药标准物质0.01 g置10 mL容量瓶中，精确至0.000 1 g，用正己烷定容，配制成质量浓度为1 000 mg/L每种农药的单一标准储备液。然后移取每种农药的单一标准储备液1 mL置100 mL容量瓶中，用正己烷稀释定容，得到每种农药质量浓度为10 mg/L的混合储备液，－20 ℃保存，有效期6 个月。

称取0.01 g灭蚁灵标准物质于100 mL容量瓶中，精确至0.000 1 g，用正己烷定容，得到质量浓度为100 mg/L的内标储备液。移取1 mL内标储备液于100 mL容量瓶中，用正己烷定容，得到质量浓度为1 mg/L的内标工作液。

1.3.2 样品处理

金银花样品置于旋风磨中粉碎，过850 μm筛，作为实验样品。称取2.0 g样品于50 mL离心管中，加入15 mL正己烷（含内标灭蚁灵0.01 mg/L），旋涡混合5 min，再加5 g无水硫酸镁，旋涡混合2 min，过滤，残渣用10 mL正己烷分2次洗涤，合并滤液，于定量浓缩仪上40 ℃浓缩近干，用2 mL正己烷复溶，待净化。

用5 mL正己烷-丙酮（9∶1，V/V）预淋固相萃取柱，然后加入提取液，用10 mL正己烷-丙酮（9∶1，V/V）洗脱，收集洗脱液，浓缩近干，用1 mL正己烷溶解后上机检测。

1.3.3 分析条件

色谱柱：DB-5MS（30 m×0.25 mm，0.25 μm）毛细柱；载气：高纯He，恒压方式，压力：2.9 kPa；进样口温度290 ℃，检测器温度350 ℃；不分流进样，进样量2 μL。

柱温程序：初温80 ℃，以25 ℃/min由80 ℃升至150 ℃，再以4 ℃/min由150 ℃升至280 ℃，保持25 min至样品全部流出。

1.3.4 定性定量方法

采用农药标准品的保留时间定性，内标法标准曲线法定量。

2 结果与分析

2.1 萃取液的选择

拟除虫菊酯农药残留提取一般采用石油醚-丙酮[4-6]、石油醚[7-8]、正己烷-丙酮[9-11]、乙酸乙酯-环己烷[12-16,21]、乙腈[19-20,22-23]等作为萃取溶剂。石油醚、石油醚-丙酮、乙酸乙酯-环己烷、正己烷-丙酮等溶剂提取杂质相对较多。乙腈虽然穿透力强、提取效果好，但在后续过程中不易浓缩。实验发现，正己烷也能满足提取要求，且提取的杂质较少，因此实验采用正己烷作为提取溶剂。

2.2 固相萃取柱的选择

净化拟除虫菊酯农药残留样品，一般选用Floisil固相萃取小柱[4-7,9-10]，实验比较了Floisil固相萃取小柱和复合填料（Floisil＋GCB）TPH固相萃取小柱[19]的净化效果。金银花样品经2 种固相萃取柱净化后，回收率均能满足农药残留分析要求。Floisil固相萃取小柱净化后的样品仍残留一定的色素，TPH固相萃取小柱净化后的淋出液基本无色，杂质相对较少（图1），因此实验选用TPH固相萃取小柱。

图1 Florisil固相萃取小柱（A）和TPH固相萃取小柱（B）净化的样品色谱图Fig.1 Chromatograms of spiked sample (at 0.02 mg/kg) cleaned up by Florisil SPE cartridge (A) and TPH SPE cartridge (B)

2.3 方法的准确度与精密度实验结果

以正己烷配制9 种拟除虫菊酯农药标准品的不同质量浓度的混合标准溶液，得出9 种农药的校准曲线及其相关系数，9 条校准曲线的R2均大于0.999。结果见表1，本方法对9 种拟除虫菊酯农药残留量的检出限为0.002～0.005 mg/L。

选用金银花样品，分别按0.02、0.10、0.50 mg/kg添加拟除虫菊酯农药进行回收实验，在3 个加标水平上，9 种拟除虫菊酯农药的平均回收率在82.8%～104.6%之间，相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）在3.5%～5.7%之间，说明本方法对9 种拟除虫菊酯农药残留有较好的回收率和精密度，能满足多残留分析要求。

表1 方法的回收率、精密度与检测限Table1 Recoveries and relative standard deviations of 9 pyrethoid pesticides

2.4 样品检测结果

表2 9 个不同产地金银花农药残留含量Table2 Pesticide residue contents of honeysuckle from 9 growing areas mg/kg

9 个不同产地金银花样品的检测结果见表2，其中云南省昆明市样品检出氟氯氰菊酯，含量为0.04 mg/kg；山东省东营市样品检出氟氯氰菊酯和联苯菊酯，含量分别为0.15 mg/kg和0.02 mg/kg；河北省邢台市样品检出氟氯氰菊酯，含量为0.03 mg/kg；浙江省丽水市样品检出氟氯氰菊酯，含量为0.06 mg/kg；贵州省毕节市样品检出氟氯氰菊酯和溴氰菊酯，含量分别为0.05 mg/kg和0.40 mg/kg；河南省新乡市样品检出氟氯氰菊酯，含量为0.04 mg/kg。广西省柳州市样品和四川省广元市样品均未检出9 种拟除虫菊酯类农药残留。《中华人民共和国药典（2010版）》仅规定了3 种有机氯农药残留限量，未明确规定拟除虫菊酯类农药残留限量。参照GB 2763—2014《食品中农药最大残留限量》对饮料类茶叶中拟除虫菊酯类农药残留限量要求[24]，检测的9 个产地金银花相对安全，符合中药饮片使用要求。

3 结 论

本实验采用涡旋振荡提取、自动固相萃取仪净化、气相色谱法同时测定了金银花中9 种拟除虫菊酯类农药残留。虽然定性不及GB/T 23200—2008《桑枝、金银花、枸杞子和荷叶中488 种农药残留量的测定：气相色谱-质谱法》使用的气相色谱-质谱法[19]，但其精确度和精密度仍能满足农药多残留的分析要求。在不具气相色谱-质谱联用仪条件下，或是仅需要测定拟除虫菊酯类农药残留时，本方法仍然不失其实用性。

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Determination of 9 Pyrethroid Pesticide Residues in Honeysuckle by Solid Phase Extraction and Gas Chromatography

TIAN Limei, SUN Zhiyong, XIANG Ming, SONG Chunman, YANG Yekun, LI Xuemei*
(Technology Center, China Tobacco Yunnan Industrial Co. Ltd., Kunming 650106, China)

A method was developed for the determination of 9 pyrethroid pesticide residues in honeysuckle with solidphase extraction and gas chromatography. The results showed that average recoveries of 9 pesticides spiked at 0.02, 0.1 and 0.5 μg/g were in the range of 82.8%-104.6% with relative standard deviation (RSD) of 3.5%-5.7%. The linear range of the presented method was 0.01-0.8 mg/L, and the limits of detection (LOD) were 0.002-0.005 mg/L. The method is sensitive and suitable for the analysis of pyrethroid pesticide residues in honeysuckle.

gas chromatography; solid-phase extraction; pyrethroid; pesticide residue; honeysuckle

R914

A

1002-6630（2015）20-0239-03

10.7506/spkx1002-6630-201520046

2014-12-22

云南中烟工业有限责任公司科技计划项目（2013JC03）

田丽梅（1974—），女，助理工程师，本科，研究方向为农药残留分析。E-mail：571962751@qq.com

*通信作者：李雪梅（1971—），女，研究员，博士，研究方向为烟草安全性评价。E-mail：xmlikm@126.com