跨膜蛋白39A基因单核苷酸多态性与中国南方汉族人群系统性红斑狼疮相关性研究

汤珣，束双双，王悦，段娜，梁秀洁，章俊

（南方医科大学珠江医院肾内科，广东 广州 510280）

·临床论著·

跨膜蛋白39A基因单核苷酸多态性与中国南方汉族人群系统性红斑狼疮相关性研究

汤珣，束双双，王悦，段娜，梁秀洁，章俊

（南方医科大学珠江医院肾内科，广东 广州 510280）

目的探讨跨膜蛋白39A（TMEM39A）基因2个单核苷酸多态性位点（rs1132202，rs13082536）与中国南方汉族人群系统性红斑狼疮（SLE）易感性有无关联。方法采用PCR和直接测序法分别对116例SLE患者和90例健康对照者TMEM39A基因rs1132202、rs13082536的基因多态性进行检测，比较组间基因型和等位基因频率的差异，并与主要临床指标进行相关性分析。结果中国南方汉族人群SLE患者rs1132202 GG基因型缺失，CC、CG基因型及C、G基因频率与正常对照组间差异无统计学意义（P＞0.05）。rs13082536 TT基因型缺失，GG、GT基因型及G、T基因频率与正常对照组间差异无统计学意义（P＞0.05）。TMEM39A rs1132202、rs13082536基因型及等位基因频率与中国南方汉族人群SLE患者抗核抗体及肾损害临床表现均无关（P＞0.05）。结论TMEM39A rs1132202、rs1308253基因多态性与中国南方汉族人群SLE易感性及抗核抗体，肾损害主要临床指标均无显著相关性。

系统性红斑狼疮；跨膜蛋白39A基因；单核苷酸多态性

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种多系统损害的慢性系统性自身免疫性疾病。其临床表现复杂，以免疫系统异常、多种自身抗体产生、补体活化、免疫复合物沉积为主要特征[1]。SLE好发于女性，特别是育龄期妇女，男女的患病率之比约是1∶9[2]。SLE的发病率和患病率在世界不同人种、地区间亦有很大差异[3-4]。

SLE病因和发病机制至今尚未明确，但其易感性及临床表型与遗传因素密切相关，属于多个易感基因参与的疾病。目前通过全基因组关联分析（genome-wide association study，GWAS）已发现多个SLE易感位点，如HAN等[5]研究发现，中国人群SLE 9个新的易感基因（ETS1、IKZF1、RASGRP3、SLC15A 4、TNIP1、7q11.23、10q11.22、11q23.3和16p11.2）并证实7个已报道易感基因（BLK、IRF5、STAT4、TNFAIP3、TNFSF4、6q21和22q11.21）。另外，关于日本人群SLE的一项GWAS研究发现AFF1是一新的易感基因，并证实STAT4、TNFAIP3、HIP1、BLK和ETS1等基因与日本人群SLE发病亦相关[6]。ARMSTRONG等[7]报道欧洲人群SLE中13个新的非HLA区域易感基因以及4个已报道基因。这些均表明SLE遗传易感性在不同人群中有相关性。此外，不同的自身免疫性疾病亦有共同的易感基因，如HLATNF-α即是多发性硬化的易感基因，同时也是SLE的易感基因[7-11]。国外已有研究表明，跨膜蛋白39A（TMEM39A）基因与多发性硬化症、SLE等自身免疫性疾病的遗传易感性相关，表明不同自身免疫性疾病在不同群体中可能有共同的易感基因[12]。本研究通过对TMEM39A基因两个多态性位点rs1132202、rs13082536的等位基因及基因型频率分析，探讨其与中国南方汉族人群SLE易感性及主要临床指标是否相关。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究纳入的116例患者均为中国南部汉族人群，诊断依据为1997年美国风湿病学的SLE诊断标准，为病例组。通过与病例组年龄性别匹配后，收集90例南部地区健康体检者做对照组，均为非SLE、自身免疫性及其他系统性疾病患者。

1.2 基因组DNA的制备

在知情同意的原则下，收集SLE患者及健康对照者晨间空腹EDTA-K2抗凝静脉血2 ml，用试剂盒（Axygen，USA）提取全血基因组DNA。方法严格按照试剂盒的说明书进行操作，提取产物溶于TE缓冲液，置入-20℃冰箱保存。

1.3 PCR扩增及产物纯化测序

采用DNA Star设计引物和探针，BLAST同源性检索，与其他基因无同源性。交由上海英骏生物技术有限公司合成，正向引物：5'-GGCAGTGTCGTCTTCT ATCA-3'，反向引物：5'-CCTCAGCCTCAGGATAGTA G-3'。PCR反应体系包括：10×Buffer 2.5μL，2.0 mmol/L dNTP 1μL，10μmol/L正反引物各1μL，DNA Taq酶1μ，100mg/L DNA模版3μL，ddH2O 16.1μL。PCR反应循环参数：95℃预变性2 min，94℃变性15 s，60℃退火复性15 s，72℃延伸30 s，35个循环，最后72℃延伸3 min。PCR扩增后取3μL，PCR产物用Exol和Fast AP纯化，纯化后进行延伸反应。扩增后经60 g/L聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增产物，并将回收的PCR产物交由上海英骏生物技术有限公司进行测序。

1.4 统计学方法

采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析，Hardy-Weinberg平衡和计数资料用χ2检验分析病例组与对照组基因型和等位基因分布差异，以P＜0.05为差异有统计学意义。在病例组中按抗核抗体阳性与抗核抗体阴性，有无肾损害时两多态性位点的等位基因和基因型频率分布情况，校正了性别、年龄等混杂因素后，TMEM39A基因rs1132202、rs13082536多态性与SLE临床表现的相关性，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 中国南方汉族人群SLE易感性与TMEM39A rs1132202、rs13082536多态性分析

对116例SLE患者与90例健康对照TMEM39A rs1132202、rs13082536多态性分析，筛出rs1132202CC、CG基因型及rs13082536GG、GT基因型（见附图）。

附图 TMEM39A基因rs1132202、rs13082536多态性位点基因型

TMEM39A rs1132202，rs13082536基因型分布在对照组中符合Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05），具有群体代表性。这两个多态性位点基因型及等位基因频率在病例组及对照组间差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 病例组与对照组TMEM39A基因rs1132202、rs13082536等位基因及基因型频率分析例（%）

2.2 TMEM39A rs1132202、rs13082536多态性与中国南方汉族人群抗核抗体及肾损害相关性分析

病例组中抗核抗体阳性与抗核抗体阴性，有无肾损害时TMEM39A rs1132202、rs13082536多态性位点的等位基因频率和基因型频率分布情况见表2。在校正了性别、年龄等混杂因素后，该两个SNP位点与抗核抗体和有无肾损害的发生间均不存在差异性（P＞0.05）。

表2 TMEM39A基因rs1132202、rs13082536与中国南方人群SLE相关临床症状分析

3 讨论

SLE的发病与遗传、环境、性激素以及机体免疫系统功能紊乱等因素有关，其病情迁延反复，并出现多种自身抗体，这些抗体引起免疫复合物沉积、补体激活以及免疫细胞功能紊乱，最终导致多器官损害。中国人群SLE发病率为31～70/10万，与白种人相比，亚洲人群SLE肾脏受累更常见，临床表现也更严重[3-4，13]。因此发现新的SLE易感基因对于揭示SLE的发病机制，从而达到早期防治的目的具有重要意义。

单核苷酸多态性（SNP）是人类可遗传变异中最常见的一种，可影响不同人群对疾病的易感程度、同种疾病的临床表型以及对药物的不同反应。SNP在复杂疾病的基因定位、关联分析、个体疾病易感性分析、同种疾病临床表型分析中发挥着重要的作用。一项对多发性硬化的全基因组关联性分析中表明TMEM39A基因rs1132200是其易感基因[13]，关于欧裔美国人SLE易感性的GWAS研究也表明rs1132200是其易感基因[12]。Rs1132200引起TMEM 39A 487位置的蛋白质由丙氨酸变为苏氨酸，但其引起疾病的具体机制有待进一步研究。本前期研究表明rs1132202与中国人群SLE易感性相关，rs1132202与rs1132200呈高度连锁不平衡状态（r2=1），可能在疾病的发生、发展中共同起作用。在此基础上，本文选择TMEM39A两个多态性位点（rs1132202、rs13082536）进一步探讨中国南方人群SLE易感性是否与TMEM39A基因相关。

笔者采用PCR和直接测序法对116例SLE患者和90例健康对照进行检测，结果发现TMEM39A rs1132202、rs13082536等位基因频率和基因型频率均与中国南方汉族人群SLE易感性无关，进一步分析发现该两个SNP位点与中国南方汉族SLE患者是否表现抗核抗体阳性和有无肾损害之间亦无相关性，提示TMEM39A基因这两个多态性位点可能与中国南方汉族人群SLE易感性无关。但本研究观察例数少，结果可能受此影响。因此TMEM39A基因多态性与中国南方汉族人群SLE易感性间的确切关联还有待进一步研究。

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（张蕾 编辑）

Polymorphisms of transmembrane protein 39A gene and risk of SLE in southern Chinese Han population

Xun TANG,Shuang-shuang SHU,Yue WANG,Na DUAN,Xiu-jie LIANG,Jun ZHANG
(Department of Nephrology,Zhujiang Hospital,Southern Medical University, Guangzhou,Guangdong 510280,P.R.China)

【Objective】To investigate the relationship between single nucleotide polymorphism sites rs1132202 and rs13082536 of transmembrane protein 39A(TMEM39A)gene and systemic lupus erythematosus (SLE)in southern Chinese Han population.【Methods】First,the two SNP sites(rs1132202 and rs13082536) were genotyped using polymerase chain reaction and direct sequencing in 116 SLE patients and 90 healthy controls from South China.Then the differences in genotypes and allele frequencies between the two groups were analyzed.In addition,the association between the two SNPs and the main clinical indicators of SLE was also analyzed.【Results】The GG genotype of rs1132202 was missing in southern Chinese Han population,and no statistical difference in CC/CG genotypic frequency or C/G allelic frequency was found between the SLE patients and the healthy controls(P＞0.05).The TT genotype of rs13082536 was also missing and GG/GT genotypic frequency or G/T allelic frequency had no significant difference between both groups(P＞0.05). TMEM39Ars1132202andrs13082536genotypesandallelefrequenciesintheSLEpatientswerenot correlated with antinuclear antibody(ANA)positivity or kidney damage(P＞0.05).【Conclusions】There is no association between SLE susceptibility and the two polymorphisms(rs1132202 and rs1308253)of TMEM39A gene in southern Chinese Han population.The two polymorphisms in the SLE patients are not correlated with ANA or renal damage.

systemiclupuserythematosus；transmembraneprotein39Agene；singlenucleotide polymorphism

R593.241

A

1005-8982（2015）30-0033-04

2015-04-13

章俊，E-mail：gzh_zj@qq.com