干扰素-γ、白介素-6、白介素-17及转化生长因子-β1在桥本甲状腺炎患者血清中的表达

李红林，郑云会，陆卫平，杨士军，刘艳秋，高美华

（1.南京医科大学附属淮安第一医院，江苏 淮安 223300；2.青岛大学医学院免疫学教研室，山东 青岛 266071）

干扰素-γ、白介素-6、白介素-17及转化生长因子-β1在桥本甲状腺炎患者血清中的表达

李红林1，郑云会1，陆卫平1，杨士军1，刘艳秋1，高美华2

（1.南京医科大学附属淮安第一医院，江苏 淮安 223300；2.青岛大学医学院免疫学教研室，山东 青岛 266071）

目的探讨干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-6（IL-6）、白介素-17（IL-17）及转化生长因子-β1（TGF-β1）4种细胞因子水平与桥本甲状腺炎（HT）的相关性。方法用酶联免疫吸附（ELISA）法检测20例HT患者（HT组）和20例健康体检者（对照组）的IFN-γ、IL-6、IL-17和TGF-β1浓度，用电化学发光法检测游离三碘甲腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、促甲状腺激素（TSH）和甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）水平。结果HT组IFN-γ、IL-6及IL-17浓度显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；TGF-β1浓度比较差异无统计学意义（P＞0.05）。两组IL-6、IFN-γ、IL-17与TPOAb呈正相关（r=0.3602、0.3391和0.5165，P＜0.05）；IL-6与FT3、IL-17与FT4呈负相关（r=-0.3582和-0.4295，P＜0.05）；IL-17与TSH呈正相关（r=0.3976，P＜0.05）。结论IFN-γ、IL-6及IL-17 3种炎症细胞因子在HT患者血清中高表达，可能共同参与HT的免疫紊乱过程。

桥本甲状腺炎；细胞因子；白介素-17；转化生化因子β1

桥本甲状腺炎（Hashimoto’s thyroiditis，HT）又称为慢性淋巴细胞性甲状腺炎，1912年由日本学者Hashimoto首先报道。随着社会节奏加快、环境压力增加，HT成为临床常见的器官特异性自身免疫性疾病。HT可诱发甲状腺肿大或结节，增加甲状腺肿瘤发生的风险[1]。HT好发于育龄期女性，导致多种不良妊娠结局[2]，严重威胁人类的健康。目前其发病机制尚未完全阐明。近年来，中外学者认为辅助性T细胞1（helper T cells 1，Th1）、Th17等淋巴细胞及相关细胞因子水平变化引起的免疫功能紊乱与HT的发生、发展密切相关。但相关研究结果不一致，细胞因子与HT患者甲状腺激素的相关性，更是少有报道[3-4]。本实验就HT患者外周血中干扰素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）、白介素-6（Interleukin-6，IL-6）、白介素-17（Interleukin-17，IL-17）及转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）4种细胞因子水平及其与甲状腺功能指标的相关性进行研究，以探讨其在HT中的作用，现报道如下。

1 资料与方法

1.1研究对象

选取2013年10月-2014年6月在江苏省淮安市第一人民医院初次诊断为HT且未治疗的患者（HT组）20例。其中，男性3例，女性17例；年龄（45.3±13.12）岁。所有入选患者符合以下诊断标准[5]：①有甲状腺功能减退的临床症状和体征；②可触及弥漫性甲状腺肿大，质地较韧，伴峡部锥体叶肿大：③患者血清甲状腺过氧化物酶抗体（thyroid peroxidase antibody，TPOAb）、促甲状腺激素（thyrotropin，thyroid stimulating hormone，TSH）浓度升高，游离三碘甲腺原氨酸（free triiodothyronine，FT3）、游离甲状腺素（free thyroxine，FT4）水平减低；④甲状腺B超回声不均，伴发多发性低回声灶或甲状腺结节。另选取同期健康体检者20例作为对照组。男性6例，女性14例；年龄（42.8±17.7）岁。对照组无甲状腺疾病史，甲状腺功能正常，自身抗体检测结果为阴性。所有研究对象排除妊娠、感染、肿瘤、过敏性疾病及其他自身免疫性疾病、未使用免疫抑制剂。

1.2标本采集

抽取早晨空腹静脉血5 ml，2 500 r/min离心10 min，立即检测甲状腺激素和自身抗体，其余血清分装于离心管中，密封置于-20℃冰箱保存，以备成批检测细胞因子。

1.3主要仪器及试剂

酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法检测IFN-γ、IL-6、IL-17及TGF-β1浓度，试剂盒由美国Rapidbio公司提供，仪器采用北京普朗公司的DNM-9602型酶标仪；用电化学发光法检测FT3、FT4、TSH及TPOAb水平，仪器采用瑞士Roche公司生产的E170模块型电化学发光免疫分析仪，试剂为专用配套试剂。所有操作严格按产品说明书进行。

1.4统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较用成组资料t检验，计数资料以率表示，用χ2检验，各指标间相关性用Pearson相关性分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1性别、年龄及甲状腺功能比较

两组患者性别、年龄比较，差异无统学意义（P＞0.05）。HT组患者FT3、FT4水平明显降低（P＜0.05），TSH、TPOAb水平明显升高（P＜0.05）。见表1。

表1 两组患者性别、年龄及甲状腺功能比较（n=20±s）

表1 两组患者性别、年龄及甲状腺功能比较（n=20±s）

组别男/女/例年龄/岁FT3/（pmol/L）FT4/（pmol/L）TSH/（mIU/L）TPOAb/（IU/L）对照组6/1442.8±17.74.45±0.3411.94±1.991.67±0.530.91±1.27 HT组3/1745.3±13.13.78±0.798.96±3.6425.56±29.23546.29±369.48 t/χ2值0.5740.5083.4843.2123.6546.601 P值0.4490.6150.0010.0030.0010.000

2.2细胞因子水平比较

HT组患者IFN-γ、IL-6及IL-17浓度显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。两组TGF-β1水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

2.3相关性分析

两组患者IL-6、IFN-γ、IL-17与TPOAb呈正相关（P＜0.05）；IL-6与FT3、IL-17与FT4呈负相关（P＜0.05）；IL-17与TSH呈正相关（P＜0.05）；TGF-β1与甲状腺功能指标无相关性（P＞0.05）。见表3。

表2 两组患者细胞因子水平比较（n=20±s）

表2 两组患者细胞因子水平比较（n=20±s）

组别IFN-γ/（ng/L）IL-17/（pg/ml）IL-6/（ng/L）TGF-β1/（ng/L）对照组250.65±67.61594.84±169.9649.66±13.16478.26±152.56 HT组305.12±46.17771.75±142.1862.47±11.34521.14±117.84 t值2.9753.5703.2980.995 P值0.0050.0010.0020.326

表3 甲状腺功能与4种细胞因子的相关性

3 讨论

HT以患者甲状腺出现淋巴细胞浸润和组织结构破坏、功能低下、血清中出现高滴度的TPOAb和甲状腺球蛋白抗体为主要特征。其发病机制尚未完全阐明，但有文献报道个体内的甲状腺细胞凋亡[6]、Treg/Th17细胞轴异常[7]因素在HT的发病过程中发挥重要作用。与细胞凋亡密切相关的细胞因子IFN-γ，以及与Th17细胞分化成熟过程密切相关的IL-6、TGF-β1和IL-17在HT发病过程中的作用，也逐渐引起学者们的关注。

IFN-γ主要由Th1细胞和自然杀伤细胞产生，能直接调节靶细胞对凋亡的易感性，参与细胞凋亡信号的传导，诱导甲状腺滤泡上皮细胞的Fas、肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体以及细胞凋亡的关键分子群Caspase的表达上调，活化DNA酶，降解染色体，促使甲状腺滤泡上皮细胞发生凋亡，导致甲状腺组织破坏[6]。

IL-17既是Th17细胞产生的特征性细胞因子，也是Th17细胞的主要效应分子[8]，具有强烈的促炎作用。IL-17能刺激人成纤维细胞表达细胞间黏附分子-1[9]，募集中性粒细胞和巨噬细胞在甲状腺组织中浸润，并诱导人内皮细胞和巨噬细胞分泌IL-6、IL-8、前列腺素E2等多种促炎症细胞因子[10]，介导炎症反应和甲状腺组织的免疫损伤，促进自身免疫性甲状腺疾病的发生、发展。

IL-6主要由Th2细胞和单核巨噬细胞合成，可促进B细胞增殖、分化和分泌抗体，激活自身反应性T细胞，引发甲状腺上皮细胞内的体液免疫功能紊乱。TGF-β是一种多肽类活性物质，因其能够促进成纤维细胞的转化生长而得名，共有6种亚家族成员，其中TGF-β1主要由Th3细胞和单核细胞产生，具有干预Naïve T细胞分化，抑制巨噬细胞激活，下调机体免疫应答的功能。在IL-6的协同作用下，TGF-β1能启动Th17效应细胞的分化，增强致炎症细胞因子IL-17的表达，介导甲状腺组织炎症反应的发生[11]。

本实验结果显示，HT患者血清中炎症细胞因子IFN-γ、IL-6、IL-17水平显著高于对照组，且两组患者的IL-6、IFN-γ、IL-17与TPOAb呈正相关；IL-6与FT3、IL-17与FT4呈负相关；IL-17与TSH呈正相关。该结果与笔者之前所报道的弥漫性毒性甲状腺肿（graves disease，GD）患者血清中的相应细胞因子表达模式类似[12]，提示上述3种细胞因子参与甲状腺的免疫紊乱过程，共同促进自身免疫性甲状腺疾病的发生。HT组调节性细胞因子TGF-β1水平略高于对照组，差异无统计学意义，且TGF-β1与甲状腺功能指标无相关性。与薛海波等[7]的报道相似，但明显不同于MANOLOVA等[13]的研究结果，可能是由于研究对象种族不同、病程差异的原因引起，有待更多的研究证实。

综上所述，HT患者血清中炎症细胞因子IFN-γ、IL-6及IL-17高表达，且与甲状腺激素、TPOAb有一定的相关性。调节性细胞因子TGF-β1高表达不明显，提示其在HT的发病过程发挥不同作用，而与HT的病情轻重程度有关。

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（童颖丹 编辑）

Expression of IFN-γ,IL-6,IL-17 and TGF-β1in serum of patients with Hashimoto's thyroiditis

Hong－lin LI1,Yun－hui ZHENG1,Wei－ping LU1,Shi－jun YANG1, Yan－qiu LIU1,Mei－hua GAO2
(1.The First Huai'an Hospital,Nanjing Medical University,Huai'an,Jiangsu 223300, P.R.China;2.Department of Immunology,Medical College,Qingdao University, Qingdao,Shandong 266071,P.R.China)

Abastract:【Objective】To explore the role of cytokines in the pathogenesis of Hashimoto's thyroiditis (HT)by detecting the levels of IFN－γ,IL－6,IL－17 and TGF－β1in HT patients.【Methods】A total of 20 patients with HT and 20 gender－and age－matched normal controls were examined.The levels of serum IFN－γ,IL－6,IL－17 and TGF－β1were measured by ELISA.FT3,FT4,TSH and TPOAb levels were determined by ECLIA.【Results】The levels of serum IFN－γ,IL－6 and IL－17 in the HT group were significantly higher than those in the controls group(P＜0.05).There were no significant difference in TGF－β1between the HT and control groups(P＞0.05).Correlation analysis revealed that IFN－γ,IL－6 and IL－17 were positively correlated with TPOAb(r=0.3602,0.3391 and 0.5165,P＜0.05),IL－6 was negative correlated with FT3(r=－0.3582,P＜0.05),IL－17 was negative correlated with FT4(r=－0.4295,P＜0.05),and a positive correlation was found between IL－17 and TSH(r=0.3976,P＜0.05).【Conclusion】IFN－γ,IL－6 and IL－17 are highly expressed in the peripheral blood of the patients with HT,which play important roles in the pathogenesis of HT with humoral immune disorder.

Hashimoto's thyroiditis;cytokine;interleukin 17;transforming growth factor－β1

R392.6

B

1005-8982（2015）32-0089-04

2015-07-20

高美华，E-mail：meihuagao66@163.com