血清淀粉酶、血清胰蛋白酶原－2、IL－10及PAF联合检测对ERCP术后胰腺炎的诊断价值

荣亮 候慧 郑森元 李可

经内镜逆行性胰胆管造影术（endoscopic retrograde cholangiopancreatography，ERCP）是胰胆疾病诊治的重要手段［1－3］。然而作为一种创伤性技术，ERCP本身即存在一定的风险，术后易出现感染、高淀粉酶血症和急性胰腺炎等并发症。其中，ERCP术后胰腺炎（post－ERCPpancreatitis，PEP）是 ERCP 最为严重的并发症。ERCP术后患者出现持续的类似胰腺炎发作的腹部疼痛且血清淀粉酶高于正常值水平的3倍以上即可诊断为PEP。PEP的发病率约为5%～10%，其中约1%可发展为重症胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP），甚至引起患者死亡［4］。因此了解PEP的发病机制，寻找PEP的早期诊断方法，减少PEP的发生已成为近年来的研究热点。文献［5］报道，血清胰蛋白酶原－2、白介素－10（interleukin－10，IL－10）、血小板活化因子（platelet activating factor，PAF）在急性胰腺炎的发生发展中具有重要的作用，然而关于血清胰蛋白酶原－2、IL－10和PAF水平在PEP中的变化情况及其在PEP诊断中的作用目前研究还很少。本文通过动态监测60例PEP患者血清淀粉酶、胰蛋白酶原－2、IL－10和PAF水平的变化情况，探讨其在PEP早期诊断中的临床诊断意义。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2012年8月至2013年11月我院消化内科病房的ERCP患者120例，女性51例，男性69例，年龄33岁～85岁，平均年龄（63.2±22.5）岁；其中肝外胆管结石患者25例，肝内胆管结石患者8例，胆管／胰管／肝管支架置入术患者87例。120例患者根据其术后的症状、体征、血清淀粉酶水平以及胰腺CT检查结果分为对照组60例和PEP组60例。对照组患者血清淀粉酶水平未超过正常值范围，且无腹痛、发热和恶心等症状。PEP组患者术后出现腹痛、恶心和呕吐等症状，且血清淀粉酶水平高于正常值上限的3倍以上。排除标准：败血症、脑梗死、恶性肿瘤和血小板减少性紫癜等患者。两组患者男女比例、年龄、患病情况等差异均无统计学意义（P均＞0.05），具有可比性，见表1。

1.2 方法

1.2.1 ERCP及相关治疗 内镜采用日本 Olympus公司JF－140R十二指肠镜。常规ERCP术前准备，具体相关操作方法参照文献［6－9］进行。

1.2.2 标本采集 分别于ERCP术前、术后4 h和术后24 h抽取患者空腹静脉血3ml，静置30min后，以离心半径12cm，3000r／min 离心 10 min，取上层血清，－20℃保存备用。

1.2.3 指标检测 采用比色法检测血清淀粉酶，采用酶联免疫吸附试验检测血清胰蛋白酶原－2、IL－10和PAF水平，检测仪器为强生Vitros－350全自动干化学分析仪，试剂盒购自上海西唐生物科技有限公司。具体操作步骤如下：将血清样品和标准品100μl加入孔中，另留出空白对照孔，用封板膜封住反应孔，37°C孵育90 min；每孔加入250μl洗涤液，震荡1 min／次洗板，共4次；加入配制好的生物素化抗体工作液100μl／孔，37°C孵育60 min； 洗板4次；加入酶结合物工作液100μl／孔，37°C孵育30 min；洗板 4次；加入显色剂 100μl／孔，避光，37°C 孵育10～20 min；加入终止液 100 μl／孔，短暂震荡混匀后立即测量OD450值。

1.3 统计学处理 采用 SPSS 13.0进行统计学分析。计量资料以±s表示，多组间均数比较采用单因素方差分析；两样本均数比较采用独立样本t检验；计数资料的比较采用χ2检验；以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 血清淀粉酶检测结果 PEP患者的血清淀粉酶水平在术前、术后4 h及术后24 h差异有统计学意义（P＜0.05），其中术后24 h血清淀粉酶水平最高；而对照组患者血清淀粉酶水平在术前、术后4 h及术后24 h的差异无统计学意义（P＞0.05）。两组患者各时间点血清淀粉酶水平比较，PEP患者术后4 h及术后24 h均高于对照组，差异均有统计学意义（P均＜0.05），而两组患者术前血清淀粉酶水平差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

2.2 两组患者血清胰蛋白酶原－2、IL－10和PAF检测结果的比较 PEP组患者术前、术后4h和术后24 h血清胰蛋白酶原－2、IL－10和PAF水平差异均有统计学意义（F＝1167.99，F＝758.74，F＝1005.84，P均＜0.05）；三项指标均为术后4 h最高。对照组患者血清胰蛋白酶原－2、IL－10和PAF水平各检测时间点差异均无统计学意义（F＝1.86，F＝0.19，F＝2.44，P均＞0.05）。PEP组各指标术后4 h和术后24 h均高于对照组，差异均有统计学意义（P均＜0.05）；而术前各指标与对照组比较，差异均无统计学意义（P均＞0.05），见表3。

表1 两组患者性别、年龄、患病情况比较

2.3 血清淀粉酶、胰蛋白酶原－2、IL－10和PAF单独及联合检测在PEP诊断中的评价 血清淀粉酶、胰蛋白酶原－2、IL－10和PAF联合检测的灵敏度、特异性及准确度均显著高于各指标单项检测的灵敏度、特异性及准确度，见表4。

表2 两组患者术前、术后4 h和术后24 h血清淀粉酶水平比较（±s，U／L）

表2 两组患者术前、术后4 h和术后24 h血清淀粉酶水平比较（±s，U／L）

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3 讨论

表3 两组患者术前、术后4 h及术后24 h血清胰蛋白酶原－2、IL－10和PAF水平比较（±s，ng／mL）

表3 两组患者术前、术后4 h及术后24 h血清胰蛋白酶原－2、IL－10和PAF水平比较（±s，ng／mL）

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表4 4项指标单独及联合检测的灵敏度、特异性和准确度［%（n／n）］

ERCP是指将十二指肠镜插至十二指肠降部，找到十二指肠乳头，由活检管道内插入造影导管至乳头开口部，注入造影剂后X线摄片，以显示胰胆管的技术。由于ERCP不用开刀，创伤小，手术时间短，并发症较外科手术少，住院时间也大大缩短，深受患者欢迎。在短短几十年中ERCP在临床上取得了巨大的成绩，已经成为当今胰胆疾病重要的治疗手段。然而ERCP仍属于有创手术，术后会出现感染、高淀粉酶血症和急性胰腺炎等并发症。其中，PEP是ERCP最为严重的并发症。PEP的总体死亡率约为24.4%［10］。为降低PEP的死亡率，寻找PEP的早期诊断指标成为近年来国内外研究的热点。

目前，临床上常采用ERCP术后4 h血清淀粉酶水平来诊断PEP的发生。本文研究结果显示，PEP患者在术前、术后4 h及术后24 h的血清淀粉酶水平差异有统计学意义（P＜0.05），其中以术后 24 h 血清淀粉酶水平最高，术前血清淀粉酶水平最低，而对照组三个时间点的血清淀粉酶水平差异无统计学意义（P＞0.05）。两组患者相同时间点比较的结果显示，PEP组术后4 h及术后24 h血清淀粉酶水平均明显高于对照组，且差异均有统计学意义（P均＜0.05），说明PEP患者在术后4 h内即可出现血清淀粉酶的急剧升高，且升高幅度可为正常值的5倍以上。然而机体多种器官中均有淀粉酶的存在，且很多原因均可引起血清中淀粉酶的升高，使得血清淀粉酶在诊断PEP中的灵敏度、特异性和准确度均受到限制［11］。

胰蛋白酶原－2是胰蛋白酶的外流性前体，当胰腺炎发生时，胰蛋白酶原－2大量入血，因此测定血清胰蛋白酶原－2水平可作为诊断胰腺炎的指标。IL－10是由Th2型细胞分泌的细胞因子［12］。已有急性胰腺炎动物模型研究［13］表明，使用重组IL－10能明显减轻急性胰腺炎动物胰腺组织学改变，降低病死率，同时，亦有结果显示，IL－10可以显著降低PEP的发生率。PAF可通过刺激其他细胞因子分泌而加重炎症反应。已有研究［14］表明，PAF在急性胰腺炎的发病中具有重要的作用。

本文研究结果显示，PEP组患者与对照组患者术前血清胰蛋白酶原－2、IL－10及PAF水平差异均无统计学意义（P均＞0.05）；PEP组术后4 h及术后24 h的血清胰蛋白酶原－2、IL－10及PAF水平均明显高于对照组，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。在PEP组中，术前、术后4 h及术后24 h血清胰蛋白酶原－2、IL－10及 PAF水平差异有统计学意义（P＜0.05），其中术后 4 h 三个指标水平最高，且术后24 h三个指标水平仍明显高于术前，说明PEP患者可在术后4 h出现血清胰蛋白酶原－2、IL－10及PAF分泌水平高峰，随后三个指标水平逐渐降低，但在术后24 h检测时仍可明显高于术前水平，这为PEP诊断提供较广的时间窗口。对照组患者术前、术后4 h和术后24 h血清胰蛋白酶原－2、IL－10和PAF水平差异均无统计学意义（P均＞0.05），说明上述三项指标只在PEP时特异性高。对上述4项指标的检测性能分析结果显示，血清淀粉酶、胰蛋白酶原－2、IL－10和PAF联合检测的灵敏度均明显高于单项指标检测，差异均有统计学意义（P均＜0.05），这也证明采用联合检测诊断PEP具有相较单项指标更高的检测效能。

本文通过检测对照组患者和PEP患者血清淀粉酶、胰蛋白酶原－2、IL－10和PAF水平发现，与对照组相比，PEP患者血清淀粉酶、胰蛋白酶原－2、IL－10和PAF水平在术后4 h即出现明显的升高，可作为PEP的早期诊断指标。PEP患者血清IL－10水平显著高于对照组，提示IL－10作为抗炎细胞因子早期参与了抗炎反应，然而由于胰蛋白酶原－2和PAF也同时升高，使得IL－10抗炎作用不足以抵消胰蛋白酶原－2和PAF所引起的炎症反应，从而最终导致了PEP的发生。血清淀粉酶、胰蛋白酶－2、IL－10和PAF联合检测提高了诊断PEP的灵敏度、特异性和准确度，可作为PEP早期诊断的临床指标。

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