定喘止咳糖浆中麻黄碱及伪麻黄碱的含量测定

付静，朱月月，聂诗明

（湖北中医药大学药学院，湖北武汉430065）

定喘止咳糖浆中麻黄碱及伪麻黄碱的含量测定

付静，朱月月，聂诗明

（湖北中医药大学药学院，湖北武汉430065）

目的建立测定喘止咳糖浆含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法色谱柱为Ultimate XB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为0.02 mol/L磷酸二氢钠缓冲液（pH=3.0，0.4%的三乙胺）-甲醇（96∶4），流速0.9 mL/min，柱温30℃，检测波长210 nm。结果盐酸麻黄碱质量浓度在1.934 4～30.950 0 μg/mL（r=1.000 0）与峰面积线性关系良好，平均回收率为99.50%；盐酸伪麻黄碱质量浓度在2.481 3～39.700 0 μg/mL（r=0.999 9）与峰面积线性关系良好，平均回收率为96.57%（n=5）。结论该方法简便、准确，重复性好，适用于定喘止咳糖浆的质量控制。

定喘止咳糖浆；高效液相色谱法；麻黄碱；伪麻黄碱

定喘止咳糖浆由麻黄、杏仁、厚朴、陈皮、柴胡、紫苏叶、甘草等组方，具有宣肺平喘、理气止咳的功效，临床常用于治疗风寒喘咳、胸腹胀满，亦可用于支气管哮喘、支气管炎［1］。麻黄辛散苦泄，为方中主药，主要有效成分麻黄碱和伪麻黄碱的药理作用相当广泛［2］，其中麻黄碱的平喘效果相当显著［3］。采用高效液相色谱（HPLC）法测定麻黄碱和伪麻黄碱的含量多见报道［4-9］，但尚未见同时测定两者含量的报道。原药品标准仅规定了常规检查项目，无含量测定项。笔者建立了可同时测定定喘止咳糖浆中麻黄碱及伪麻黄碱含量的HPLC法，以更好地控制产品质量。现报道如下。

1 仪器与试药

DIONEX高效液相色谱仪；UVD170u LC紫外检测器；电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）。定喘止咳糖浆（湖北端正药业有限公司，批号为121201，121202，121203）；盐酸麻黄碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号为171237-201208，供含量测定用）；盐酸伪麻黄碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号为171241-201007，供含量测定用）；双蒸水（实验室自制），甲醇为色谱纯，盐酸、乙醚、甲醇均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：Ultimate XB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.02 mol/L磷酸二氢钠缓冲液（pH=3.0，含0.4%的三乙胺）-甲醇（96∶4）；流速：0.9 mL/min；柱温：30℃；检测波长：210 nm；进样量：20 μL。在此条件下，盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱分离效果好，色谱图见图1。

2.2 溶液制备

精密称取盐酸麻黄碱对照品3.095 mg，置10 mL容量瓶，加流动相至刻度，得盐酸麻黄碱对照品贮备液；精密称取盐酸伪麻黄碱对照品3.970 mg，置10 mL容量瓶，加流动相至刻度，得盐酸伪麻黄碱对照品贮备液。精密量取定喘止咳糖浆5 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过；精密吸取续滤液2 mL，置10 mL容量瓶，加入1 mL稀盐酸，加流动相至10 mL，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按定喘止咳糖浆的处方及工艺，制成不含麻黄的阴性样品，按供试品溶液方法制成阴性对照品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

线性关系考察：将盐酸麻黄碱对照品贮备液、盐酸伪麻黄碱对照品贮备液分别稀释为系列质量浓度溶液，精密吸取上述溶液各20 μL，注入高效液相色谱仪，按拟订色谱条件测定色谱峰面积，以对照品溶液的质量浓度（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程，盐酸麻黄碱Y=0.940 4X+0.059 6，r=1.000 0（n=5），质量浓度在1.934 4～30.950 0 μg/mL与峰面积线性关系良好；盐酸伪麻黄碱Y=0.712 3 X+0.237 4，r= 0.999 9（n=5），质量浓度在2.481 3～39.700 0 μg/mL与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取同一对照品溶液，按拟订色谱条件测定，重复进样5次，测定峰面积。结果盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的RSD分别为1.19%和2.08%（n=5），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同批样品5份，按供试品溶液制备方法及拟订色谱条件测定。结果盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的RSD分别为3.10%和2.97%（n=5），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于1，4，8，12，24 h时进样测定峰面积。结果盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的RSD分别为2.35%和1.85%（n=5），表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验：精密吸取已知含量的同一批样品（批号为121201）5份，每份5 mL，分别加入盐酸麻黄碱对照品500 μg、盐酸伪麻黄碱对照品180 μg，按供试品溶液制备方法制备，依法测定，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取3批样品，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件测定，计算含量。结果见表2。根据3批样品的含量结合生产实际，暂订本品每1 mL含盐酸麻黄碱（C10H15NO·HCl）和盐酸伪麻黄碱（C10H15NO·HCl）的总量不得少于0.50 mg。

表1 加样回收试验结果（n=5）

表2 样品含量测定结果（g/L）

3 讨论

关于色谱柱的选择，曾用Thermo hypersil ODS C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm），Agilent Extend C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），Welch（月旭）Ultimate XB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），结果Welch（月旭）Ultimate XB-C18柱更适合于盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的分离，被测组分离度更好。

关于流动相的缓冲液选择，曾选用pH分别为1.5，2.0，2.5，3.0的0.02 mol/L磷酸二氢钠（含0.4%的三乙胺）缓冲液，结果pH=3.0的0.02 mol/L磷酸二氢钠（含0.4%的三乙胺）缓冲液有较好分离效果，故选用甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钠（pH= 3.0含0.4%的三乙胺）缓冲液（4∶96）。

HPLC法能分离中药中复杂成分，本试验中建立的HPLC法分离效果好、回收率高，适用于定喘止咳糖浆中麻黄碱和伪麻黄碱含量的测定。

［1］WS3-B-2548-97.中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂（第十三册）［S］.

［2］郑萍，戴贵东，李汉青.麻黄碱及伪麻黄碱药理作用研究进展［J］.宁夏医学，2002，24（2）：126-127.

［3］刘赜，石倩，杨洋，等.麻黄碱与伪麻黄碱平喘效果及机制比较研究［J］.中草药，2009，40（5）：771-774.

［4］马毅，晋玲，王振恒，等.HPLC测定不同产地麻黄中麻黄碱和伪麻黄碱的含量［J］.西部中医药，2012，25（7）：14-16.

［5］成红娟，曲婷丽，刘锐玲，等.HPLC同时测定止嗽立效口服液中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱含量［J］.中成药，2009，31（2）：240-242.

［6］金阳.HPLC法测定小儿咳喘灵颗粒中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量［J］.安徽医药，2007，11（11）：992-993.

［7］王玲，高晓黎.麻黄及其复方制剂中麻黄碱含量测定的研究进展［J］.新疆医科大学学报，2006，29（10）：1 005-1 007.

［8］付莉，张淼.HPLC法测定麻黄浸膏中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量［J］.中国药事，2012，26（6）：611-616.

［9］余翔，夏平.高效液相色谱法测定咳立停糖浆中盐酸麻黄碱含量［J］.中国药业，2010，19（19）：24-25.

Determination of Ephedrine and Pseudoephedrine in Dingchuan Zhike Syrup

Fu Jing,Zhu Yueyue,Nie Shiming
（The School of Pharmacy,Hubei University of Chinese Medicine,Wuhan,Hubei,China 430065）

ObjectiveTo formulate the HPLC method of content determination of the Dingchuan Zhike Syrup.MethodsThe chromatography：Ultimate-XB C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）；Mobile phase：methanol-0.02 mol/L sodium dihydrogen phosphate buffer（pH=3.0,containing 0.4%of triethylamine）（96∶4）；flow rate：0.9 mL/min；column temperature：30℃；detection wavelength：210 nm. ResultsEphedrine hydrochloride was linear in the range of 1.934 4-30.950 0 μg/mL（r=1.000 0）,the average recovery was 99.50%.Pseudoephedrine hydrochloride was linear in the range of 2.481 3～39.700 0 μg/mL（r=0.999 9）,the average recovery was 96.57%（n=5）.ConclusionThe method is simple and accurate,it also has good reproducibility.This method can be applied to control the quality of the dingchuan zhike syrup.

Dingchuan Zhike Syrup；HPLC；ephedrine hydrochloride；pseudoephedrine hydrochloride

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）20-0079-02

付静（1991-），女，在读硕士研究生，研究方向为中药新制剂、新剂型及新技术，（电子信箱）565403063@qq.com；聂诗明（1962-），男，教授，主要从事中药新制剂、新剂型研究，本文通讯作者，（电子信箱）163nsm@163.com。

2015-01-27；

2015-03-16）