动物学

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调控Tim-3通路在免疫性肝损伤大鼠中对Th17细胞的影响

张文，张蓓，李秀梅，等

目的：建立免疫性肝损伤模型，探讨Tim-3通路在阻断或激活时对Th17细胞的影响.方法：大鼠尾静脉注射刀豆蛋白A（ConA）8周，建立免疫性肝损伤模型.无菌取脾脏制备脾淋巴细胞，取外周血分离血清后于-20℃保存，取肝脏组织放入4%的多聚甲醛中固定备用.在96孔板上将脾淋巴细胞平均分成5组，即阻断实验组、阻断对照组、激活实验组、激活对照组和ConA对照组.用Tim-3的单克隆抗体即Anti-Tim-3来阻断Tim-3通路；用Tim-3的重组配体galectin-9来激活Tim-3通路，37℃、5% CO2培养箱中培养72 h，收集细胞上清液于-20℃保存.生化分析法测血清中ALT、AST和ALB的表达；HE染色观察肝脏组织的病理变化；免疫组化法测肝脏组织中IL-17A和ROR-γt蛋白的表达；ELISA法测细胞上清液中IL-17A及IL-6的表达；实时定量PCR测各组脾淋巴细胞ROR-γt mRNA的表达.结果：与对照组相比，模型组HE染色可见明显的炎性细胞浸润、肝脏组织损伤及较多的假小叶，免疫组化可见IL-17A和ROR-γt蛋白的表达明显升高；与阻断对照组相比，阻断实验组中IL-17A和IL-6的水平升高（P＜0.05）；与激活对照组相比，激活实验组中IL-17A和IL-6的水平降低（P＜0.05）；实时定量PCR显示与阻断对照组相比，阻断实验组中ROR-γt mRNA的表达明显增加（P＜0.05）.结论：免疫性肝损伤的发病与Th17细胞密切相关，免疫调控Tim-3通路可通过影响Th17细胞效应，进而参与免疫性肝损伤的发病机制.

免疫性肝损伤；Tim-3通路；Th17细胞；大鼠

来源出版物：中国实验动物学报，2015，23（1）： 7-12联系邮箱：张蓓，zhangbei124@aliyun.com