分子生物学

分子生物学

封面介绍：《科技导报》2015年第1期17-21页发表了朱艳等的“利用多克隆抗体检测纺锤体蛋白基因INMAP在肝癌细胞中的表达”研究论文，该文通过诱导原核表达，获得可溶性的His-INMAP融合蛋白，经镍亲和柱分离纯化、免疫小鼠，制备了特异性较高的INMAP多克隆抗体.用新制备抗体检验出INMAP在几种肝癌细胞系中具有异常表达和多态性.本期封面图片表现了INMAP 高表达裸鼠荷瘤模型的构建，由朱艳提供，何梦洁协助图片编排.

利用多克隆抗体检测纺锤体蛋白基因INMAP在肝癌细胞中的表达

朱艳，康璟妍，王钰，等

为探究纺锤体蛋白INMAP的功能及其在细胞恶性增殖中发挥的作用，制备INMAP多克隆抗体.利用0.1 mmol/L IPTG于16℃诱导His-INMAP融合蛋白进行原核表达，SDSPAGE及免疫印迹检测蛋白表达.4.0 mol/L尿素处理包涵体获得可溶性融合蛋白，镍亲和柱分离纯化融合蛋白抗原并检测蛋白浓度及纯度.以所获抗原免疫4只Balb/c小鼠，收集心脏抗血清.以纯化前、后的原核表达产物作为抗原，检测INMAP多克隆抗体的特异性.通过免疫印迹分析INMAP在正常肝细胞系L-02及5个肝癌细胞系（PLC、HepG2、SUN449、SMMC-7721和BEL-7402）中的表达差异.结果显示，His-INMAP融合蛋白主要以包涵体形式存在，经4.0 mol/L尿素处理可获得可溶性目的蛋白，且纯化后的抗原纯度较高（94.1%）.INMAP多克隆抗体能与INMAP抗原特异结合.INMAP在6种肝细胞中具有多态性，除PLC外，在其他肝癌细胞中其基因表达水平显著下调.本研究制备的INMAP多克隆抗体特异性高，为INMAP基因功能的进一步研究奠定了基础.

INMAP；肝癌细胞；多克隆抗体；包涵体

来源出版物：科技导报，2015，33（1）: 17-21联系邮箱：梁前进，Lqj@bnu.edu.cn

荧光双分子互补分析Ezrin与L-periaxin的互作模式

彭婷婷，王慧，石亚伟

摘要：腓骨肌萎缩症4F亚型是Periaxin基因的突变所导致一种脱髓鞘型遗传病.Periaxin蛋白是外周神经系统中特异且大量表达的蛋白，在髓鞘成熟与维护中发挥重要作用.而Ezrin是一种膜骨架连接蛋白，在细胞形态的维持、运动、黏附等方面发挥重要作用.在前期已证实L-periaxin与Ezrin间存在蛋白互作的基础上，本文通过分子荧光互补实验，结合免疫荧光定位实验、免疫共沉淀等技术，进一步分析并揭示了L-periaxin蛋白与Ezrin蛋白之间的互作方式，具体为L-periaxin（1 200 aa）与Ezrin（1296 aa）以及L-periaxin（1060～1461 aa）与Ezrin（475～585 aa）以“头对头”与“尾对尾”的方式发生相互作用.Ezrin可能是一种引导 L-periaxin在施万细胞膜上堆积的新的分子配体，二者可能通过蛋白分子间更加紧密的方式完成在细胞膜处的堆积，参与到髓鞘的维护中.

关键词：L-periaxin； Ezrin； “头对头”与“尾对尾”；蛋白相互作用；荧光双分子互补

来源出版物：中国生物化学与分子生物学报，2015，31（1）: 38-46

联系邮箱：石亚伟，yaweishi@sxu.edu.cn