大黄酸的稳定性研究

王文永，田玉先，王雅红，佟胜河，朱新艳，王琨，韩刚

（1.河北省唐山市丰润区人民医院，河北唐山064000；2.河北联合大学药学院，河北唐山063000）

大黄酸的稳定性研究

王文永1，田玉先1，王雅红1，佟胜河1，朱新艳1，王琨2，韩刚2

（1.河北省唐山市丰润区人民医院，河北唐山064000；2.河北联合大学药学院，河北唐山063000）

目的研究溶液pH、温度、光照强度等因素对大黄酸稳定性的影响。方法将一定质量浓度的大黄酸置不同pH缓冲溶液中、不同光照强度和不同温度条件下，定时取样，采用高效液相色谱法测定大黄酸质量浓度的变化，采用动力学方法建立大黄酸降解速率方程。结果随着溶液pH、温度的升高，光照强度的增加，大黄酸降解速率加快。结论大黄酸的稳定性与pH、温度、光照强度关系密切。大黄酸应在低温、避光的条件下贮存，低pH条件下使用。

大黄酸；稳定性；酸碱度；温度；光照强度；高效液相色谱法

大黄酸为中药大黄的有效成分，属蒽醌类化合物［1］。大黄酸除具有抗菌、止血、抗癌、利尿等多种药理活性外，还可清除体内自由基［2-3］。大黄酸化学名称为1，8-二羟基-3-羧基蒽醌，在蒽醌环上含有2个羟基和1个羧基，极性较强，具有氧化还原性质，易发生氧化还原反应［4］，故大黄酸不稳定，易分解［5］。本研究中探讨了溶液的pH、光照强度、温度对大黄酸稳定性的影响，为大黄酸的合理应用提供参考。

1　仪器与试药

1100型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；BT125D型电子天平（Sartorius公司）；pHS-3C型酸度计（上海鹏顺科学仪器有限公司）；HWS型智能型恒温恒湿培养箱（宁波市科技园区新江南仪器有限公司）；低温光照仪（药物制剂国家工程研究中心）；SYC-15型超级恒温水浴（南京桑力电子设备厂）。大黄酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110757-200206）；甲醇（Fisher Chemicals公司）为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1缓冲溶液制备

以醋酸-醋酸钠、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠、三羟甲基氨基甲烷-盐酸、甘氨酸-氢氧化钠为缓冲体系，配成总浓度为0.2mol/L及pH分别为4.00，6.00，8.00，9.00，10.00的缓冲溶液（大黄酸在水中溶解度很低，但溶于一定浓度的乙醇溶液，故缓冲溶液中含30%乙醇），缓冲溶液用酸度计校正。

2.2色谱条件［6］

色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18柱（150mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水-冰醋酸（77∶22∶1）；检测波长：428 nm；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；进样量：20μL。

2.3标准曲线制备

称取干燥后的大黄酸对照品2.5mg，精密称定，置50mL棕色容量瓶中，甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为50μg/mL的大黄酸对照品贮备液，置暗处备用。将大黄酸对照品贮备液分别稀释成1.5，3.0，4.5，6.0，9.0，15.0，30.0μg/mL的大黄酸对照品溶液，按高效液相色谱（HPLC）法测定峰面积。以大黄酸峰面积（S）对质量浓度（C）进行线性回归，得回归方程S=45.193C+0.655 4，r=0.999 5（n=7）。结果表明，大黄酸质量浓度在1.5～30.0μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

2.4稳定性影响因素试验

溶液pH：分别精密量取大黄酸贮备液2 mL，置5个25 mL棕色容量瓶中，分别用pH为4.00，6.00，8.00，9.00，10.00的缓冲溶液定容，迅速摇匀，置恒温（25℃）光照培养箱中，调解光照强度为700 lx，定时取样，依法操作。分别测定不同时间点大黄酸质量浓度（C）。以lg C对时间t作图，结果为一直线，表明大黄酸在不同pH缓冲溶液中降解为一级动力学过程［7］。分别求出大黄酸25℃不同pH条件下的降解动力学方程及线性相关系数r、降解速率常数Ke、半衰期（t1/2），结果见表1。可见，随着溶液pH升高，大黄酸稳定性迅速下降。

表1　溶液pH对大黄酸稳定性的影响（25℃，700 lx）

光照强度：分别精密量取大黄酸贮备液2mL，置5个25mL棕色容量瓶，用pH=8的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液定容，迅速摇匀，置低温光照仪中，20℃恒温，调节光照强度分别为500，1 000，2 000，4 000，8 000 lx，定时取样，依法操作。计算大黄酸质量浓度（C），以lg C对时间t作图，结果为一直线，表明大黄酸在不同光照条件下降解为一级动力学过程。求出大黄酸在20℃及pH=8时不同光照强度下的降解动力学方程及线性相关系数r、降解速率常数Ke、半衰期（t1/2），结果见表2。可见，随着光照强度的增加，大黄酸稳定性迅速下降。

表2　光照强度对大黄酸稳定性的影响（20℃，pH=8）

溶液温度：精密量取大黄酸贮备液2mL，置5个25mL棕色容量瓶中，用pH=8的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液定容，迅速摇匀，SYC-15超级恒温水浴中，700 lx恒定的光照强度，温度分别为5，10，20，30，40℃，定时取样，依法操作。分别计算大黄酸的质量浓度（C），以lg C对时间t作图，结果为一直线，表明大黄酸在不同温度条件下降解为一级动力学过程。求出25℃不同pH条件下大黄酸的降解动力学方程及线性相关系数r、降解速率常数Ke、半衰期（t1/2），结果见表3。可见，酸随着溶液温度的升高，大黄稳定性下降。

表3　温度对大黄酸稳定性的影响（pH=8，700 lx）

3　讨论

大黄酸属蒽醌类化合物，易发生氧化还原等降解反应，且降解反应复杂［8］。本试验结果表明，增加光照强度、升高温度和增加溶液pH均能加快大黄酸的降解速率，且降解反应为一级动力学过程。

随溶液pH的升高，大黄酸降解速率明显加快，大黄酸降解反应为一级动力学过程。当溶液pH＞8时，大黄酸降解反应速率迅速增加。随温度升高，许多中药的有效成分会发生降解［9］，大黄酸也一样，降解速率随温度升高而加快。当光照强度增至2 000 lx时，大黄酸降解速率迅速增加。故大黄酸试剂应尽量避免强光照射，应置阴凉通风的环境中，尽量避免在碱性较强的环境下使用。

［1］Chen WH，Chen J，Shi YP.Anthraquinones and stilbenes from the roots and rhizomesofRhubarb［J］.Asian NatProd Res，2011，13（11）：1036-1041.

［2］郭美资，徐海荣.大黄酸药理作用的研究进展［J］.国外医学：中医药分册，2002，3（24）：139-142.

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［5］李先端，黄璐琦.炮制对中药大黄5种蒽醌成分含量的影响［J］.中国中药杂志，2005，30（12）：904-943.

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［7］韩刚，崔静静，毕瑞，等.姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素稳定性研究［J］.中国中药杂志，2008，33（22）：2 611-2 614.

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Study on Stability of Rhein

Wang Wenyong1，Tian Yuxian1，Wang Yahong1，Tong Shenghe1，Zhu Xinyan1，Wang Kun2，Han Gang2
（1.Fengrun District People′s Hospital，Tangshan，Hebei，China 064000；2.Pharmaceutical College of Hebei United University，Tangshan，Hebei，China 063000）

Objective To investigate the influence of pH value，temperature and light intensity on the stability of rhein.M ethods The certain concentration of rhein was put into different pH values of buffer solutions and placed under different light intensities and different temperature conditions.The timing sampling was conducted.The change of rhein concentrations was detected by adopting the HPLC method.The rhein degradation rate equation was established by adopting the dynamic method.Results With the increase of pH value，temperature and light intensity，the rhein degradation rate was accelerated.Conclusion The stability of rhein is closely related with pH value，temperature and light intensity.Therefore rhein should be stored in low temperature and lucifugal conditions and should be used in the condition of low pH values.

rhein；stability；pH value；temperature；light intensity；HPLC

R286.0；R282.71

A

1006-4931（2015）16-0028-03

王文永（1962-），男，大学本科，副主任中药师，研究方向为中药活性成分，（电子信箱）1020059619@qq.com；韩刚，大学本科，教授，研究方向为中药活性成分及药物毒理学，本文通讯作者，（电话）0315-3726303（电子信箱）tsyxhg@163.com。

2014-10-28）