2种农药对葛氏鲈塘鳢外周血红细胞核异常的影响

郭策 韩福杰 田物 柴龙会 黄璞祎

摘要 [目的] 研究高效氯氟氰菊酯和硫丹對葛氏鲈塘鳢外周血红细胞核异常的影响，为评价这2种农药对葛氏鲈塘鳢的遗传毒性提供理论依据。[方法] 研究不同浓度（0.5、1.0、1.5、2.0 μg/L）高效氯氟氰菊酯和不同浓度（1.25、2.50、3.75、5.00、6.25 μg/L）硫丹96 h暴露对葛氏鲈塘鳢外周血红细胞核异常率的影响。[结果] 随着高效氯氟氰菊酯和硫丹浓度的增加， 葛氏鲈塘鳢红细胞的核异常率呈上升趋势，呈现较明显的剂量-效应关系。[结论] 高效氯氟氰菊酯和硫丹对葛氏鲈塘鳢具有潜在的遗传毒性，且毒性效应随着农药浓度的增加而增强。

关键词 高效氯氟氰菊酯；硫丹；核异常；葛氏鲈塘鳢

中图分类号 S949 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）34-215-02

葛氏鲈塘鳢（Perccottus glenii），隶属鲈形目（Perciformes）虾虎鱼亚目（Gobioidei）塘鳢科（Eleotridae），是东北地区的特有鱼类，主要分布在黑龙江、图们江流域水生植物较多的河道、排水渠和湿地，极易受到农药的影响。但是，目前关于农药对葛氏鲈塘鳢的毒性研究报道较少。

核异常率是反映农药对鱼类遗传毒性的重要指标，已被广泛用于评价农药对鱼类的遗传毒性效应[1-2]。拟除虫菊酯类和有机氯农药是目前常用的两类农药。为研究拟除虫菊酯类和有效氯农药对葛氏鲈塘鳢的遗传毒性效应，笔者测定了高效氯氟氰菊酯和硫丹对葛氏鲈塘鳢外周血红细胞核异常率的影响，旨在为评价这两类农药对鱼类的遗传毒性提供科学参考。

1 材料与方法

1.1 试验用鱼

葛氏鲈塘鳢采自哈尔滨市的松花江湿地，体长（6.97±0.79） cm，体重（5.02±1.81） g。室内暂养14 d后进行试验，暂养期间每天定时投喂摇蚊幼虫，试验前1 d停食，选取健康、活泼的个体进行随机分组。试验在60 cm×40 cm×50 cm的玻璃水族箱中进行，水温（24±1）℃，溶解氧浓度大于5 mg/L。试验用水为充分曝气2 d以上的自来水。

1.2 试验药物

高效氯氟氰菊酯（微乳剂），购于山东曹达化工有限公司，有效成分25 g/L；硫丹（乳油），购于拜耳作物科学（中国）有限公司，有效成分350 g/L。

1.3 试验方法

高效氯氟氰菊酯设置0、0.5、1.0、1.5、2.0 μg/L共5个浓度梯度，硫丹设置0、1.25、2.50、3.75、5.00、6.25 μg/L共6个浓度梯度，每个浓度梯度设置3个平行组，每组放置试验鱼5尾。试验持续96 h，试验期间停食，每隔24 h更换1次药液。

1.4 血涂片的制作和观察

各处理组在染毒96 h后随机迭取葛氏鲈塘鳢5尾，断尾取血，每尾各制作血涂片2片，采用南京建成科技有限公司的快速姬姆萨染液染色。采用油镜观察计数，每张血涂片观察3 000个细胞，记录核异常数，并按照以下公式计算核异常率：核异常率=具有核异常的细胞总数/观察的细胞总数×1 000‰。使用Leica 显微镜及相关软件拍摄记录。

1.5 数据统计与分析

使用SPSS 17.0统计软件对试验数据进行统计与分析。应用单因素方差分析（ANOVA），分析2种农药对葛氏鲈塘鳢红细胞核异常率的影响是否显著。应用Duncans多重比较分析不同浓度处理组的核异常率是否存在显著差异。试验结果均以平均值±标准误（±SE）表示。

2 结果与分析

2.1 农药对葛氏鲈塘鳢红细胞核形态的影响

从图1可以看出，葛氏鲈塘鳢正常的红细胞大多呈椭圆形、少数为圆形，表面光滑，核椭圆形，位于细胞中央；经姬姆萨染液染色后，细胞核呈蓝紫色，细胞质呈浅粉色；核异常包括核质外凸、核质内凹、核内空泡化、微核等。

2.2 高效氯氟氰菊酯对葛氏鲈塘鳢红细胞核异常率的影响

从图2可以看出，葛氏鲈塘鳢外周血红细胞的核异常率随高效氯氟氰菊酯浓度的升高呈上升趋势。0.5、1.0、1.5和2.0 μg/L高效氯氟氰菊酯处理组的核异常率分别为对照组的4.01倍、3.96倍、5.61倍和5.80倍。单因素方差分析（ANOVA）表明，高效氯氟氰菊酯对葛氏鲈塘鳢红细胞核异常率有极显著影响（P<0.01）。Duncans多重比较结果表明各处理组的核异常率均显著高于对照

组，1.5和2.0 μg/L高效氯氟氰菊酯处理组的核异常率显著高于0.5和1.0 μg/L处理组。

2.3 硫丹对葛氏鲈塘鳢红细胞核异常率的影响

从图3可以看出，葛氏鲈塘鳢的血红细胞核异常率随着硫丹浓度的增加而升高。1.25、2.50、3.75、5.00和6.25 μg/L硫丹处理组的核异常率分别为对照组的3.10倍、3.87倍、4.42倍、5.38倍和7.42倍。单因素方差分析表明，硫丹对葛氏鲈塘鳢红细胞的核异常率有极显著影响（P<0.01）。Duncans多重比较结果表明，对照组核异常率显著低于其他处理组（P<0.01），6.25 μg/L硫丹处理组的核异常率显著高于其他处理组（P<0.01）。

3 讨论

3.1 高效氯氟氰菊酯对葛氏鲈塘鳢红细胞核异常率的影响

该研究结果表明高效氯氟氰菊酯各处理组的葛氏鲈塘鳢血红细胞核异常率均显著高于对照组，说明高效氯氟氰菊酯对葛氏鲈塘鳢具有遗传毒性；较低浓度组（0.5和1.0 μg/L高效氯氟氰菊酯）的核异常率显著低于较高浓度组（1.5和2.0 μg/L高效氯氟氰菊酯），说明葛氏鲈塘鳢对较低浓度的高效氯氟氰菊酯造成的遗传损伤具有一定的修复作用。夏晓华等[1]研究发现泥鳅（Misgurnus anguillicaudatus）外周血红细胞的核异常率随着高效氯氟氰菊酯浓度的增加而不断升高，对泥鳅具有显著的遗传毒性效应。高效氯氟氰菊酯对大鳞副泥鳅（Paramisgurnus dabryanus）也具有很强的诱变性，核异常率与染毒浓度呈正相关[3]，这与该研究结果基本一致。

3.2 硫丹对葛氏鲈塘鳢红细胞核异常率的影响

该试验结果还表明低浓度（1.25 μg/L）硫丹处理组的核异常率为对照组的3.10倍，说明硫丹对葛氏鲈塘鳢具有较强的遗传损害作用；最高的核异常率出现在较高浓度（6.25 μg/L）处理组，表明硫丹对葛氏鲈塘鳢的遗传毒性具有明显的剂量-效应关系。硫丹对其他鱼类也表现出较强的遗传毒性。武焕阳等[2]研究发现草鱼（Ctenopharyngodon idellus）经硫丹染毒后，血红细胞的核异常率随着硫丹浓度的升高而呈上升趋势。