金丝桃苷对免疫抑制小鼠抗氧化能力和免疫功能的影响

胡小艳 李博文

摘要 [目的]观察金丝桃苷对小鼠抗氧化能力和免疫功能的影响。[方法] 将BALB/c小鼠随机分成5组：空白对照组、免疫抑制组、给药组（包括低剂量给药组和高剂量给药组）和阳性对照组，测定胸腺指数和脾脏指数，机体过氧化物MDA、H2O2水平，总抗氧化能力TAOC及其酶TSOD，以及MPO、XOD、GSHPX和POD等与抗氧化能力相关酶的活性。[结果] 与空白对照组相比，免疫抑制组的胸腺指数、脾脏指数、TAOC、TSOD、MPO、GSHPX及POD活性显著降低， MDA、H2O2和XOD活性显著升高。给予金丝桃苷治疗后，与免疫抑制组相比，胸腺指数、脾脏指数、TAOC、TSOD、MPO、GSHPX及POD的活性显著升高， MDA、H2O2和XOD活性显著降低。[结论] 金丝桃苷能通过提高免疫抑制小鼠体内胸腺指数、脾脏指数，降低机体过氧化物MDA、H2O2，提高TAOC、TSOD、GSHPX及POD活性来清除机体过氧化物，降低XOD活性来减少过氧化物的产生，以此提高小鼠抗氧化能力，增加机体免疫功能。

关键词 金丝桃苷；免疫抑制；抗氧化能力；免疫功能

中图分类号 S567 文献标识码

A 文章编号 0517-6611（2015）34-170-03

金丝桃苷（Hyperoside）是从藤黄科（Clusiaceae）植物贯叶连翘（Hypericum perforatum Linn.）中提取的一种黄酮醇苷类化合物，不仅对神经[1]和心血管系统[2]具有保护作用，还具有保护肝脏[3]、降低血脂的作用[4]。

目前，对金丝桃苷的研究集中在提取、分离及纯化方面，以及对心脑血管、神经系统等药理活性方面，关于对机体抗氧化作用方面的研究很少。笔者将金丝桃苷给予免疫力低下的小鼠，通过测定小鼠脾脏指数和胸腺指数及与自由基产生和清除相关的6种酶活性，来探讨金丝桃苷对免疫抑制小鼠抗氧化能力的影响。该研究将有助于在分子水平阐明药物对机体抗氧化及提高免疫功能的机理，具有非常重要的理论和实用意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物。BALB/c小鼠，体重18～22 g，雌雄各半，购自徐州医学院实验动物有限公司。

1.1.2 药物及试剂。金丝桃苷（纯度为95.5%），提取于贯叶连翘，临用时配制成灭菌水溶液；环磷酰胺，上海华联制药有限公司；黄芪多糖，成都市腾飞动物药业有限公司，临用时配制成灭菌水溶液。

丙二醛（MDA）试剂盒、过氧化氢（H2O2）试剂盒、总超氧化物歧化酶（T-SOD）试剂盒、总抗氧化力（TAOC）试剂盒、髓过氧化物酶（MPO）试剂盒、黄嘌呤氧化酶（XOD）试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPX）试剂盒、组织过氧化物酶（POD）试剂盒，购于南京建成生物工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 动物分组与处理。将60只BALB/c小鼠随机分成5组，雌雄各半，分笼饲喂。Ⅰ组为空白对照组，分别于第1、3、5天腹腔注射1 ml生理盐水。Ⅱ组为免疫抑制（模型）组，分别于第1、3、5天腹腔注射1 ml环磷酰胺。Ⅲ、Ⅳ组为药物组（其中Ⅲ为低剂量药物组，Ⅳ为高剂量药物组），分别于第1、3、5天腹腔注射1 ml环磷酰胺，第1～7天分别以150和300 mg/kg金丝桃苷混悬液灌胃。Ⅴ组为阳性对照组，分别于第1、3、5天腹腔注射1 ml环磷酰胺，第1～7天以0.2 mg/kg黄芪多糖水溶液灌胃。

1.2.2 检测项目及方法。将处理7 d后的供试小鼠眼静脉采血，分离血清，按照试剂盒使用说明测定血清中MDA、H2O2、NO水平。

颈椎脱臼处死，用生理盐水将所取胸腺和脾脏漂洗并用滤纸滤干，计算脾脏指数和胸腺指数，其方法：

胸腺（或脾脏）指数=胸腺（或脾脏）重量/小鼠体重

将小鼠肝脏组织取出，0 ℃制成匀浆，3 000 r/min离心15 min，收集上清液，按照试剂盒使用说明测定肝脏组织中小鼠体内总抗氧化能力TAOC及其相关酶TSOD活性，以及与自由基清除有关的酶MPO、POD、GSHPX及自由基产生相关酶XOD活性。

2 结果与分析

2.1 金丝桃苷对小鼠脾脏指数和胸腺指数的影响

小鼠注射环磷酰胺进行免疫抑制以及给予药物治疗后，胸腺指数和脾脏指数见表1。

由表1可知，小鼠注射环磷酰胺后，与空白对照组相比，免疫抑制模型组胸腺指数和脾脏指数显著降低（P<0.05），说明免疫抑制小鼠造模成功。给予免疫抑制小鼠高低2个剂量金丝桃苷治疗后，小鼠体内胸腺指数较免疫抑制模型组显著升高，脾脏指数高剂量组较免疫抑制模型组显著升高，高剂量组甚至比空白对照组还高。金丝桃苷对脾脏指数的影响存在剂量依赖关系，高剂量组在提高胸腺指数和脾脏指数作用方面与黄芪多糖的作用相当。

2.2 金丝桃苷对免疫抑制小鼠体内MDA及H2O2的影响 小鼠注射环磷酰胺进行免疫抑制以及给予药物治疗后，体内过氧化物MDA及H2O2水平见表2。

注：a表示与空白对照组有显著差异（P<0.05），A表示与空白对照组有极显著差异（P<0.01）；b表示与免疫抑制组有显著差异（P<0.05），B表示与免疫抑制组有极显著差异（P <0.01）。

由表2可知，小鼠注射环磷酰胺后，与空白对照组相比，免疫抑制模型组MDA及H2O2显著升高（P < 0.05），说明免疫抑制小鼠造模成功。给予免疫抑制小鼠高低2个剂量金丝桃苷治疗后，小鼠体内MDA及H2O2较免疫抑制模型组均显著降低。金丝桃苷对H2O2的影响存在剂量依赖关系，高剂量组在降低MDA和H2O2活性作用方面與黄芪多糖的作用相当。

2.3 金丝桃苷对小鼠体内总抗氧化能力TAOC及其相关酶TSOD活性的影响 小鼠注射环磷酰胺进行免疫抑制以及给予药物治疗后，体内TSOD和TAOC活性水平见表3。

由表3可知，小鼠注射环磷酰胺后，与空白对照组相比，免疫抑制模型组总抗氧化能力TAOC及其酶TSOD活性显著降低，说明免疫抑制小鼠造模成功。给予免疫抑制小鼠高低2个剂量金丝桃苷治疗后，小鼠体内TAOC和TSOD较免疫抑制模型组均显著升高，高剂量组甚至比空白对照组还高。金丝桃苷对TAOC和TSOD的影响存在剂量依赖关系，高剂量组在提高TSOD活性作用方面与黄芪多糖的作用相当。

2.4 金丝桃苷对小鼠体内与自由基清除有关的酶MPO、POD、GSHPX及自由基产生相关酶XOD活性的影响 小鼠注射环磷酰胺进行免疫抑制以及给予药物治疗后，体内MPO、XOD、GSHPX及POD活性水平见表4。

免疫抑制模型组MPO、GSHPX和POD活性极显著降低（P

<0.01），而XOD活性极显著升高（P<0.01），说明免疫抑制小鼠造模成功。给予免疫抑制小鼠高低2个剂量金丝桃苷治疗后，小鼠体内XOD活性较免疫抑制模型组均极显著降低（P<0.01），高低2个剂量组治疗作用相当，不存在剂量依赖关系，且均与黄芪多糖组的治疗作用相当。相比之下，高低2个剂量的金丝桃苷治疗后小鼠体内GSHPX和POD活性显著升高，且都存在剂量依赖关系，其治疗作用均与黄芪多糖组相当。而金丝桃苷对MPO活性无显著影响。

3 结论与讨论

3.1 金丝桃苷对小鼠脾脏指数和胸腺指数的影响

小鼠注射环磷酰胺后，体内脾脏指数和胸腺指数显著降低，给予金丝桃苷治疗后，小鼠体内脾脏指数和胸腺指数显著升高。脾脏和胸腺均是机体内的免疫器官，脾脏含有大量的淋巴细胞及巨噬细胞，是细胞免疫及体液免疫的中心，胸腺则具有能够调节机体免疫的功能，是重要的中枢免疫器官。在该研究中，小鼠处于免疫低下（免疫抑制）时，体内脾脏指数和胸腺指数显著降低，给予金丝桃苷治疗后，二者均升高，表明金丝桃苷能提高脾脏指数和胸腺指数。

3.2 金丝桃苷对免疫抑制小鼠体内MDA及H2O2的影响

小鼠注射环磷酰胺后，体内MDA及H2O2显著升高，给予金丝桃苷治疗后，小鼠体内MDA及H2O2显著降低。MDA和H2O2均是机体内的过氧化物，MDA为脂质过氧化物，它能够引起细胞损伤，其量的多少能够间接反映出细胞受损伤的程度。MDA还可能诱发癌症或是自身免疫疾病的基础[5]。而H2O2对心肌细胞具有损伤作用[6]。在该研究中，小鼠处于免疫低下（免疫抑制）时，体内MDA及H2O2显著升高，给予金丝桃苷治疗后，二者活性均降低，表明金丝桃苷能够通过降低机体内的过氧化物，增加机体免疫功能。

3.3 金丝桃苷对小鼠体内总抗氧化能力TAOC及其相关酶TSOD活性的影响

小鼠注射环磷酰胺后，体内TAOC和TSOD活性显著降低。给予金丝桃苷进行治疗后，免疫抑制小鼠体内TAOC和TSOD活性显著升高。TAOC表明体内总抗氧化能力的强弱。而SOD能够调节机体内活性氧和NO的水平[7]，平衡机体的氧化与抗氧化作用，是机体内最重要的抗氧化酶。在该研究中，小鼠处于免疫低下（免疫抑制）时，体内TAOC和TSOD活性降低，给予金丝桃苷治疗后，二者活性均升高，表明机体抗氧化能力增强。表明金丝桃苷能通过提高机体抗氧化能力而增加机体免疫功能。

3.4 金丝桃苷对小鼠体内与自由基清除有关的酶MPO、POD、GSHPX及自由基产生相关酶XOD活性的影响

小鼠注射环磷酰胺后，体内MPO、GSHPX和POD活性显著降低，XOD活性显著升高。MPO能消耗过氧化氢，同时将氯化物离子催化为次氯酸。XOD可以催化次黄嘌呤和黄嘌呤生成尿酸，同时传递电子产生大量活性氧和H2O2[8]。机体的自由基可损伤机体细胞，致使细胞老化，降低细胞合成酶活力，导致各种疾病的发生，而GSHPX能协同SOD清除体内自由基，分解H2O2，阻斷脂质过氧化反应，保护细胞膜结构和功能的完整性。POD能够催化H2O2反应，清除体内过多的H2O2，保护机体免受损伤。该研究中，经金丝桃苷治疗后，XOD活性降低，减少了过氧化物的产生。与此同时，GSHPX和POD活性升高，则有利于机体内过氧化物的清除。

参考文献

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[2] 王启海，陈志武.金丝桃苷对离体大鼠腹主动脉的舒张作用及其机制研究[J].中草药，2010，41（5）：766-770.

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