大叶藜叶中总黄酮含量的测定

武芸 马世荣 王春林 胡浩斌 张小伟

摘要[目的]建立大叶藜叶中总黄酮含量的测定方法。[方法]采用分光光度法，以芦丁为对照品，10 %KOH为显色剂，在403 nm处对样品中的总黄酮含量进行测定。[结果]总黄酮在10.7～64.2 μg/ml范围内呈良好的线性关系，R2=0.997；平均加样回收率为98.45%，RSD为0.56%（n=6），大叶藜叶中的总黄酮含量为2.45 mg/g。[结论]该方法稳定、简便、快速，适用于大叶藜叶中总黄酮含量的测定。

关键词 紫外-可见分光光度法；大叶藜；总黄酮；含量测定

中图分类号 S567.21+9；R284.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）34-164-02

大叶藜为藜科（Chenopodiaceae）藜属（Chenopodium）一年生草本植物，别名杂配藜、八角灰菜、血见愁等，我国各地均有分布[1]，其地上部分可作中药，主治月经不调、子宫出血、吐血、衄血、咯血、尿血等症[2]。研究表明，藜属植物富含黄酮、酚酸和萜类物质[3-4]，黄酮类化合物具有抗氧化、抗肿瘤、调节免疫、增强心血管功能、抗过敏、抗菌消炎、降血糖、降血脂、抗病毒、养胃护脾、利肝等功效[5-6]。现代药学研究表明，许多藜属植物具有止痒、抗菌、抗癌活性，并作为民间中药广泛使用[7-9]。大叶藜中总黄酮的含量测定及提取尚未见报道，笔者采用紫外-可见分光光度法测定了大叶藜叶中的总黄酮含量，旨在为进一步研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

大叶藜采自甘肃省庆阳市（107°41′0.8″ E，35°43′41.8″ N），由陇东学院生命科学与技术学院马世荣副教授鉴定，植物标本保存在陇东学院生命科学与技术学院（20140620）。

1.2 仪器与试剂

仪器：FZ102植物粉碎机（北京中兴伟业仪器有限公司）；FA1204B型电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；RE52C旋转蒸发器（上海科升仪器有限公司）；KQ500DB型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；SPECORD50 紫外可见分光光度计（德国耶拿公司）。

试剂：芦丁（中国药品生物制品鉴定所，批号：100080-200707）；95%乙醇、甲醇、氢氧化钾、三氯化铝、亚硝酸钠、硝酸铝均为分析纯；试验用水为二次蒸馏水，自制。

1.3 方法

1.3.1 供试品溶液的制备。

准确称取干燥至恒重的原料（过60目标准筛）1.0 g，用30 ml 70%乙醇溶液超声提取2次，每次40 min，过滤，将滤液合并，减压浓缩，浓缩物用石油醚（60～90 ℃）萃取3次，水相用乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯萃取液并转移至100 ml 容量瓶中，用70%乙醇定容、摇匀，作为供试品溶液。

1.3.2 对照品溶液的制备。

准确称取干燥至恒重（120 ℃）的芦丁标准对照品0.010 7 g，用70%乙醇超声溶解，并定容至100 ml，配制成107 μg/ml 的芦丁标准溶液。

1.3.3 检测波长的选择。

精密吸取一定量的供试品溶液和对照品溶液于2个10 ml具塞试管中，均用70%乙醇稀释至6 ml，加入10% KOH 溶液各0.5 ml，充分混匀，静置5 min，用70%乙醇定容、摇匀，以相应试剂作为空白对照，分别在190～900 nm进行扫描。

1.3.4 标准曲线的绘制。

精密量取新配制的芦丁标准溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml于 6个10 ml具塞试管中，按“1.3.3”中的显色方法和测定方法，分别在检测波长处测定各溶液的吸光度。以芦丁对照品溶液的质量浓度（C）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制标准曲线。

1.3.5 样品总黄酮含量的测定。

精密吸取大叶藜叶供试品溶液3份，每份均为5.0 ml，按“1.3.3”的方法在最大波长处分别测其定吸光度（每样测定3次），将试样的吸光度平均值代入芦丁标准曲线方程，计算供试样品的总黄酮含量。

2 结果与分析

2.1 检测波长的确定 由图1可知，对照品显色溶液与供试品显色溶液最大吸收波长很接近，故选择403 nm为试验的测定波长。

2.2 标准曲线的建立

标准曲线见图2，用最小二乘法分别求出回归方程及相關系数分别为A=0.019 6C+0.108 6，R2=0.995。

2.3 样品测定

按“1.3.5”的方法，将每种试样的吸光度平均值带入芦丁标准曲线方程，计算供试样品的总黄酮含量，得到大叶藜叶中总黄酮含量为2.45 mg/g。

2.4 方法学考察

2.4.1 精密度。

精密吸取5.0 ml供试品溶液，按“1.3.3”的方法测定最大吸收波长处的吸光度，重复测定5次，结果RSD=0.86%，表明仪器精密性良好。

2.4.2 重复性。

精密吸取供试品溶液5.0 ml，共5份，置于10 ml容量瓶中，按“1.3.3”的方法分别测定其吸光度，每份溶液在最大波长下测定3次，取平均值，结果RSD=0.93%，表明该方法重复性良好。

2.4.3 稳定性。

精密吸取供试品溶液5.0 ml于10 ml容量瓶中，按“1.3.3”的方法分别于20、40、60、80、100、120 min时测定其吸光度，结果RSD=1.78%，表明在显色后120 min内，吸光度基本稳定。

2.4.4 加样回收率。

精密吸取供试品溶液6份于10 ml容量瓶中，每份5.0 ml。分别加入芦丁标准溶液1.0、1.5、2.0 ml，每样平行2份。按“1.3.3”的方法在403 nm处分别测定加样后的吸光度，并计算总黄酮含量、回收率、平均回收率和RSD。加样回收率试验结果见表1。由表1可知，平均回收率为98.45%，RSD=0.56%。

采用 50%、60%、70% 、80%、95%乙醇作为提取剂，按照“1.3.1”的方法得到提取液，后采用“1.3.3”的显色方法和测

定方法测定提取液在403 nm处的吸光度，发现70%乙醇作为提取剂时吸光度达到最大，因此，该试验选取70%乙醇为提取溶剂。分别采用直接测定法和AlCl3CH3OH、10% KOH、NaNO2Al（NO3）3 3种显色法对供试品溶液进行显色，后分别在190 ～ 900 nm进行扫描，结果表明，采用10% KOH作为显色剂，步骤简单、快速、稳定，且出峰效果好，干扰小，故该试验选用10% KOH作为显色剂。

4 结论

该研究以70%乙醇为提取溶剂，10% KOH为显色剂，采用紫外-可见分光光度法测定大叶藜叶的总黄酮含量为2.45 mg/g，且精密性、重复性、稳定性、加样回收率试验结果表明，以KOH为显色剂，采用紫外-可见分光光度法测定大叶藜叶的总黄酮含量，方法操作简单，结果稳定、可靠。

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