饲用胆汁酸添加剂的亚慢性毒性试验

郑玲敏　陈航　周泽伟　王雨晶　王凯　鲁倩倩　张雨梅

摘要：将饲用胆汁酸按0、60、600、3000mg/kg添加于饲料中喂养Wistar大鼠90d，每周称量大鼠体质量与饲料消耗，并在喂养45、90d时剖检，分别进行血液细胞学、血液生化指标检测，计算主要脏器系数并进行组织病理学检查。结果表明，大鼠饲喂低、中、高剂量胆汁酸后平均饲料消耗、体质量增重、脏器系数、血液细胞学指标、大体解剖及组织病理学检查结果与对照组无显著差异。中剂量组血液生化指标除了喂养45d时GLU、TG以及喂养90d时TG稍低于对照组外，其他指标与对照无显著差异。饲用胆汁酸饲料添加剂在3000mg/kg添加量时，对大鼠喂养90d未观察到明显的有害作用。

关键词：大鼠；胆汁酸；饲料添加剂；亚慢性毒性；临床应用；安全剂量

中图分类号：S816.73 文献标志码：A 文章编号：1002-1302（2015）05-0222-04

胆汁酸是在肝脏中合成的具有同类结构的大分子，是胆汁的主要成分，在促进脂类消化、胆固醇代谢方面有着极为重要的作用。胆汁酸进入小肠后，乳化并水解脂肪为脂肪酸、甘油，并通过肝肠循环被重新吸收。胆汁酸可以促进胆汁分泌。研究发现，胆汁酸还是一类信号分子，可介导多种细胞信号的传导，包括参与钙动员、环磷酸腺苷合成、蛋白激酶C易位和活性。胆汁酸的TGR5细胞表面受体广泛分布于褐色脂肪组织、免疫系统、骨骼肌、神经组织、肠内膜等众多组织中，参与能量代谢、炎症反应的信号传导途经。胆汁酸对胆固醇、具有潜在毒性的外源性物质和代谢产物的排泄和生物转化具有重要作用。饲料中添加胆汁酸不仅可以活化脂肪酶、促进脂肪乳化、提高脂肪在肠道中的消化吸收率，还可以帮助机体排出有害物质、提高动物免疫功能、促进动物摄食、提高饵料效率、降低饲养成本，从而改善动物生产性能。笔者通过大鼠亚慢性试验，考察胆汁酸较长时间应用时大鼠是否存在不良反应，旨在为胆汁酸作为饲料添加剂的临床应用提供依据。

1.材料与方法

1.1材料

4周龄Wistar大鼠（清洁级），雌雄各40只，由扬州大学比较医学中心提供。动物生产许可证号：SCXK（苏）2012-0004，使用许可证号：SYXK（苏）2012-0029。大鼠饲喂经60Co照射的饲料，自由采食、饮水，所饮水为符合城市饮用水标准的自来水，试验前在试验环境中适应5d。饲用胆汁酸呈白色粉末状，胆汁酸总量>95%，批号20130428，由某动物保健品有限公司提供。

1.2受试物剂量及染毒途经

添加饲用胆汁酸于饲料中，经饲料加工厂制成药料，饲喂90d。添加量分为3000、600、60mg/kg高、中、低3个剂量组；对照组饲喂大鼠常规饲料。大鼠随机分为4组，每组20只，雌雄各半。

1.3观察指标

试验期间观察大鼠的行为及饮食，每周称量体质量、饲料消耗。分别在喂养45、90d时进行大体解剖，每组10只大鼠（雌雄各5只），分别取抗凝血进行血液细胞学检测。取血清样品进行谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（CHO）、葡萄糖（GLU）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）等血液生化指标的检测。称量心、肝、脾、肺、肾、卵巢子宫、睾丸附睾质量，计算脏器系数。对肝、肾、脾、肺、十二指肠、睾丸、子宫等主要脏器进行组织病理学检查。

1.4数据处理

采用SPSS19.0软件处理数据。

2.结果与分析

试验期内未发现饲用胆汁酸试验组大鼠有异常行为及表现，体质量、饲料消耗、脏器系数、血液学指标等见表1至表8。大鼠饲喂低、中、高剂量胆汁酸后平均饲料消耗、体质量增重、脏器系数、血液细胞学指标、大体解剖及组织病理学检查结果与对照组无显著差异。中剂量组血液生化指标除了喂养45d时GLU、TG，喂养90d时TG稍低于对照组外，其他指标与对照无显著差异。

3.结论与讨论

本研究表明，饲用胆汁酸饲料添加剂在3000mg/kg添加量时，对大鼠喂养90d未观察到明显的有害作用。如果在60mg/kg推荐水平使用，临床应用应该是安全的。亚慢性毒性是指试验动物连续多日接触较大剂量的外来化合物所出现的中毒效应，试验目的是观察不同剂量外源物质长期饲喂动物产生的毒性作用性质及靶器官，并制定安全使用剂量。正常情况下动物血液生理生化指标维持动态平衡，当动物受生物、化学、应激等因素影响时，血液生理生化指标就会发生相应的变化。血液生理生化指标是反映外来物质对机体毒性作用程度的关键指标。本研究表明，中剂量组血液生化指标除了喂养45d时GLU、TG，喂养90d时TG稍低于对照组外，其他指标与对照无显著差异。胆汁酸中剂量组的GLU、TG数值均在Wistar大鼠正常生理指标范围内。endprint