电子摄像技术在豚鼠全身主动过敏试验中的应用

2015-10-17顾筠莹印慧聪盛佳妮俞铭华蒋婉娟朱根麟

实验动物与比较医学 2015年3期

关键词：豚鼠药典全身

顾筠莹，印慧聪，盛佳妮，俞铭华，蒋婉娟，李　英，朱根麟

（上海和黄药业有限公司，上海200331）

电子摄像技术在豚鼠全身主动过敏试验中的应用

顾筠莹，印慧聪，盛佳妮，俞铭华，蒋婉娟，李英，朱根麟

（上海和黄药业有限公司，上海200331）

目的研究在豚鼠全身主动过敏试验引入电子摄像（动态）技术及其适用性。方法以豚鼠全身主动过敏试验激发后过敏反应阶段，作为电子摄像内容，进行电子摄像（动态）记录、比较分析。结果初步建立电子摄像技术，记录豚鼠全身主动过敏试验激发后的过敏反应，可以对豚鼠激发后过敏反应的各种症状进行动态观察、分析，还对人工记录和电子摄像记录进行比较，分析了两种记录特点。结论在豚鼠全身主动过敏试验引入电子摄像（动态）技术可以对原试验记录（人工观察）进行补充、完善。将两者相结合，能够得到更真实、客观、完整、有效的试验原始记录。

豚鼠；过敏试验；电子摄像技术

豚鼠全身主动过敏试验，是指我国现行版药典收载的检测注射类药物制剂过敏反应的经典试验方法［1］。其对过敏性反应的评定方法，主要是采用肉眼观察和记录受试动物在静脉注射供试品溶液后30 min内所表现出的全身过敏反应症状，按照全身致敏性的评价（判定）标准对其进行过敏阳性或阴性的评价（判定）。作者在长期使用该方法评价中药注射剂过敏试验后发现，该方法评价（判定）的主观因素较强，存在一定个体观察和评价（判定）上的差异，从而不可避免地对试验结果（结论）判定准确性和可靠性也产生一定的影响。为此，作者引入电子摄像技术对豚鼠全身主动过敏试验中激发后的过敏反应阶段进行全程记录，发现其对实验过程记录的全面性、客观性、试验结果评价、试验结论判定的可靠性以及可追溯性均有不可替代的优越性。本文就该方法进行简要介绍。

1　材料与方法

1.1电子摄像设备

云监控DCS-930L无线网络摄像机，友讯电子设备（上海）有限公司生产，UPC Code7-9006934272-1。

1.2电脑设备

电脑配置最低系统要求（台式机）: Intel或AMD双核CPU 1.3 GHz或更高；128 MB/512 MB内存；200 MB以上硬盘空间；使用线缆或ADSL Internet服务或具有以太网端口的DSL调制解调器。在安装前，确认具备以太网线，电脑安装有Windows XP或Vista与IE 6以上版本的浏览器并开启了Active X 控制功能。

1.3电脑视频观察（记录）方法

用摄像设备对准豚鼠观察笼盒，打开电脑，登陆D-Link操作系统，点击“开始”按键，电脑屏幕实时出现在静脉注射供试品溶液30 min内豚鼠活动（行为体征、表现症状）的画面。

1.4动物

普通级豚鼠，体质量250～350 g，由上海市松江区车墩实验动物良种场提供［SCXK（沪）2012-0008］，在本公司动物实验室饲养并进行实验［SYXK（沪）2012-0009］。

1.5药物

（1）生脉注射液，为上海和黄药业有限公司产品，若干批号。（2）卵蛋白: Albumin，from chicken egg white CAS:9006-59-1，Pcode:1000453006，Produce of USA，使用浓度为0.7 mg/mL。（3）生理盐水: 为上海长征富民金山制药有限公司产品，若干批号。

1.6过敏试验方法

取豚鼠6只，体质量250～350 g，♀♂不拘，隔日每次腹腔注射供试品溶液0.5 mL/只，共3次；然后分为两组，每组3只，分别在首次注射后14 d 及21 d，再由静脉注射供试品溶液1.0 mL/只进行激发，观察静脉注射后30 min内，豚鼠有无过敏反应症状，以判定供试品是否引起动物全身过敏反应。在结果判断，静脉注射供试品溶液30 min内，不得出现过敏反应。如在同一只动物上出现竖毛、发抖、干呕、连续喷嚏3 声、连续咳嗽3声、紫癜和呼吸困难等现象中的2 种或2 种以上，或出现大便、小便失禁、步态不稳或倒地、抽搐、休克、死亡现象之一者，判定供试品不符合规定［1］。阴性组（生理盐水）3只相同方法处理。

2　结果

2.1电子摄像装置的建立

在豚鼠静脉注射供试品溶液后，放入观察盒内，盒上方安装电子摄像装置，观察、记录30 min内动物（过敏反应）症状或体征（图1）。

2.2生脉注射液过敏反应电子记录（动态）截图

从图2可以清楚看到其中1只豚鼠正出现搔鼻行为症状。在动态视频里，明显可见豚鼠出现搔鼻、或咳嗽等这些弱阳性过敏反应症状。

2.3卵蛋白过敏反应电子记录（动态）截图

从图3可以看到卵蛋白（阳性）组的3只豚鼠均出现了强阳性反应过敏症状（死亡）。在视频里，可以看到豚鼠分别出现了大、小便失禁或步态不稳或倒地、或抽搐、直到死亡一系列强阳性反应过敏症状的整个动态过程。

图 1　电子摄像探头在图的左上方位置

图 2　生脉注射液激发后的过敏反应动态截图

图 3　阳性组（卵蛋白）激发后的过敏反应动态截图

图 4 阴性组（生理盐水）激发后的过敏反应动态截图

2.4生理盐水过敏反应电子记录（动态）截图

从图4可以看到生理盐水（阴性）组的3只豚鼠在激发后的正常行为、症状。在动态视频里，阴性组豚鼠的正常行为体征、表现症状更为明显。

3　讨论

依据现行版药典收载过敏反应检查法的要求，豚鼠全身主动过敏反应系将一定量的供试品溶液注入豚鼠体内，间隔一定时间后静脉注射供试品溶液进行激发，观察动物出现过敏反应的情况，以判定供试品是否引起动物全身过敏反应［1］。供试品不合格表明注射剂含有过敏反应物质，临床用药时可能使患者致敏或产生过敏反应，引起严重不良反应［2］。在药物临床安全性评价中，对药物致敏性的关切和研究报道已受到社会日益广泛的重视，尤其是中药注射液的安全性问题。基于我国药典颁布豚鼠全身主动过敏反应检查法中可能出现影响试验结果的因素，对此法在执行过程中，已有众多学者提出了各自关切的内容。主要关注过敏反应与剂量相关性；药典收载的豚鼠过敏试验方法是否能严格控制药品的安全性［3］；再次激发对过敏反应发生率的影响［4］；豚鼠全身主动过敏试验皮下注射激发结果；一定剂量范围内，豚鼠全身过敏反应的发生率；试验的剂量设计和给药途径等［5-8］。目前尚未见到有关用电子摄像技术对豚鼠过敏试验进行动态记录的相关报道。作者在工作中发现，药典收载过敏反应检查法，在观察激发后30 min内动物有无过敏反应症状［1］中，存在较强的主观性或差异性。而在动物试验中减少、避免主观因素或个体差异对试验结果、试验结论准确性、精确性的影响，具有重要意义。为此本研究对药典颁布豚鼠全身主动过敏反应检查法引入电子摄像技术及该技术的适用性进行了初步探讨。

本研究结果表明，用电子摄像对豚鼠过敏试验反应症状的（动态）观察，可以将每组豚鼠激发后的过敏反应症状，如实记录（动态视频、动态音频）。本文列举图例是动态视频里的截图，没有实际观察视频中的动感，但可以反映动态视频里典型一幕。

对激发后过敏反应症状的观察，人工记录容易受到人为因素干扰影响，即存在人为观察的主观性及不同人之间观察的差异性，且试验后容易遗忘；试验结束（豚鼠处死）后，仅凭人工观察记录，供试验结论的判定及日后追溯。还有人工观察注意力是否能保持集中30 min，有易受情绪、或心情等多方面因素影响而出现遗漏或记录不全等情况。

电子摄像记录中没有受到人工观察后会遗忘的因素影响，可以长期保存且可以再现激发后反应症状的真实动态画面，可以明显补充人工记录的不足或在追溯记录时对纸质（人工观察）原始记录予以确认、修正甚至纠正等。用电子摄像记录，不是要取代原试验记录（人工观察），而是对其补充、完善。将两者记录相结合，能够得到更真实、客观、完整、有效的试验原始记录。

如果有条件，在目前电子摄像记录的基础上，进一步完善，可能效果会更理想。比如在激发后，电子摄像记录不是用一只电子摄像探头对准一组（3只）豚鼠，而是用一只电子摄像探头对准一只豚鼠，进行摄像（专一）记录。这样做可以在视野等方面都会有很大的提高。

作为对注射剂的药理检验项目，尤其是在中药注射剂的过敏反应试验，建立用电子摄像对豚鼠过敏试验进行动态观察方法，对记录结果分析、结论准确有重要意义。

［1］中华人民共和国药典，二部［S］. 2010年版，附录ⅩⅢ G 过敏反应检查法.

［2］中华人民共和国药典，二部［S］. 2010年版，附录ⅩⅧ B 中药注射剂安全性检查法应用指导原则.

［3］张德波，蒲旭峰，杨奎. 豚鼠过敏试验方法探讨［J］. 中国药品标准，2009，10（2）:112-116.

［4］管志英，张德波. 豚鼠过敏试验影响因素探讨［J］. 成都医学院学报，2013，8（6）:647-650.

［5］张建强，施虹，顾性初. “豚鼠全身主动过敏试验”以皮下注射途径激发结果［J］.中国药理学与毒理学杂志，2013，27（3）:534.

［6］郑智勇，李莉，赵晋，等. 不同致敏和激发剂量对豚鼠主动全身过敏试验结果的影响［J］. 中国药理学与毒理学杂志，2013，27（3）:540.

［7］单晓蕾，张素才，孙云霞.豚鼠给予疫苗的速发型全身主动过敏反应［J］. 中国药理学与毒理学杂志，2013，27（3）:518-519.

［8］翁谢川，樊星，王青秀，等. 药物安全性评价中豚鼠全身过敏试验方法的研究［J］. 中国比较医学杂志，2012，22（5）: 51-55.

Q95-33

1674-5817（2015）03-0227-03